Composición de vacuna que comprende un antígeno y un adyuvante de péptido sintéticoKKARVEDALHATRAAVEEGV (Ec27; SEC ID Nº: 76).

Composiciones de péptidos hsp60 y antígenos víricos para vacunación y diagnóstico

Campo de la invención

La presente invención se refiere a vacunas que proporcionan inmunogenicidad potenciada que comprenden péptidos HSP60 conjugados con o mezclados con un antígeno vírico. La presente invención identifica adicionalmente un epítope novedoso y procedimiento de potenciación de la inmunogenidad de un antígeno.

Antecedentes de la invención

A pesar de los sorprendentes logros en el desarrollo de vacunas para ciertas infecciones víricas (es decir, poliomielitis y sarampión) y la erradicación de virus específicos de la población humana (por ejemplo, viruela) , las enfermedades víricas siguen siendo problemas médicos y para la salud pública importantes. De hecho, los virus son responsables de varias enfermedades “emergentes” (o re-emergentes) (por ejemplo, encefalitis del Nilo occidental y fiebre del dengue) , y la infección vírica es una causa de morbilidad y mortalidad significativa en el mundo.

La presencia de la ayuda de linfocitos T adecuados es importante para la construcción de potentes vacunas. Las vacunas que inducen tanto linfocitos T colaboradores como CTL pueden ser más eficaces que aquellas que sólo inducen CTL. De hecho, la importancia de la colaboración entre linfocitos T CD4+ y CD8+ se enfatiza en la vacunación terapéutica contra infección vírica crónica (Zajac y col., 1998; Matloubian y col., 1994) .

Clásicamente, las vacunas se fabrican introduciendo organismos muertos o atenuados en el huésped junto con adyuvantes adecuados parar iniciar la respuesta inmunitaria normal a los organismos mientras que, deseablemente, se evitan los efectos patogénicos del organismo en el huésped. El enfoque padece las muy conocidas limitaciones porque raramente es posible evitar la respuesta patogénica debido a la complejidad de la vacuna que incluye no sólo el determinante antigénico de interés, sino muchos materiales perjudiciales relacionados y sin relacionar, cualquier número de los cuales puede, en algunos o todos los individuos, inducir una reacción no deseable en el huésped.

Por ejemplo, las vacunas producidas en la forma clásica pueden incluir antígenos competitivas que son perjudiciales para la respuesta inmunitaria deseada, antígenos que incluyen respuestas inmunitarias no relacionadas, ácidos nucleicos del organismo o cultivo, endotoxinas y constituyentes de composición y fuente desconocida. Estas vacunas, generadas a partir de materiales complejos, tienen inherentemente una probabilidad relativamente alta de inducir respuestas competitivas incluso del antígeno de interés.

HSP60 pertenece a una familia de moléculas de chaperonas altamente conservada a lo largo de la evolución; una molécula de HSP60 similar está presente en todas las células, procariotas y eucariotas. La molécula de HSP60 humana se designó anteriormente HSP65, pero ahora se ha designado HSP60 en vista de la información del peso molecular más precisa; por cualquier designación, la proteína es la misma. Aparentemente, no puede existir célula sin la capacidad para expresar HSP60. HSP60 de mamífero es altamente homóloga a los cognados bacterianos, que muestran aproximadamente el 50% de identidad de aminoácidos (Jindal y col., 1989) . Por tanto, HSP60 es compartida por el huésped y sus parásitos, y es inmunogénico, de reactividad cruzada y se expresa universalmente en inflamación. Además, HSP60 es bien reconocida por el sistema inmunitario (Konen Waisman y col., 1999, Konen Waisman y col., 1995) y es una parte del conjunto de auto-moléculas para las que existe autoinmunidad naturalmente; HSP60 es miembro del homúnculo inmunológico (Cohen, 1992) . Choque térmico, IFNy, infección bacteriana o vírica, e inflamación, todos producen la presentación de epítopes de HSP60 endógenos en moléculas de la clase II del MHC que conducen a la activación de linfocitos T específicos para HSP60, incluso en individuos sanos (Anderton y col., 1993; Hermann y col., 1991; Koga y col., 1989) .

La patente europea EP 262 710 y la patente de EE.UU. nº 5.154.923 describen péptidos que tienen una secuencia de aminoácidos correspondiente a las posiciones 171-240 y 172-192, respectivamente, de un polipéptido de 64 kD de Mycobacterium bovis BCG, que son útiles como inmunógenos que inducen resistencia a artritis autoinmunitaria y enfermedades autoinmunitarias similares.

La solicitud de patente PCT nº WO 90/10449 describe un péptido designado p277 que tiene una secuencia de aminoácidos correspondiente a las posiciones 437-460 de la molécula de HSP65 humana que es útil como inmunógeno que induce resistencia a diabetes mellitus dependiente de insulina (DMDI) . Un péptido de control, designado p278, correspondiente a las posiciones 458-474 de HSP65 humana, no indujo resistencia a DMDI.

Lussow y col. (1990) mostraron que la sensibilización de ratones con Mycobacterium tuberculosis var. bovis (BCG) vivo e inmunización con el péptido sintético de la malaria repetitivo (NANP) 40 conjugado con derivado de proteína purificada (PPD) condujo a la inducción de altos títulos y de larga duración de anticuerpos IgG anti-péptido. Después, Lussow y col. (1991) mostraron que las proteínas de choque térmico (HSP) micobacterianas de 65 kDa (tipo GroEL) y 70 kDa (tipo ADNK) actuaron de moléculas de vehículo en ratones, previamente sensibilizadas con Mycobacterium tuberculosis var. boris (bacilo de Calmette-Guerin, BCG) , para la inducción de altos títulos y de larga duración de IgG contra el péptido sintético de la malaria repetitivo (NANP) 40. Los anticuerpos anti-péptido se indujeron cuando el péptido de la malaria, conjugado con la HSP micobacteriana, se administró en ausencia de cualquier adyuvante.

Barrios y col. (1992) han mostrado que ratones inmunizados con péptidos u oligosacáridos conjugados con la HSP de 70 kDa produjeron altos títulos de anticuerpos IgG en ausencia de cualquier sensibilización previa con BCG. La respuesta de anticuerpos anti-péptido persistió durante al menos 1 año. Este efecto de vehículo libre de adyuvante de la HSP de 70 kDa fue dependiente de linfocitos T, ya que no se indujeron ni anticuerpos IgG anti-péptido ni anti70 kDa en ratones nu/nu atímicos. La inmunización previa de ratones con la HSP de 65 kDa o 70 kDa no tuvo ningún efecto negativo sobre la inducción de anticuerpos IgG anti-péptido después de la inmunización con conjugados de HSP-péptido en ausencia de adyuvantes. Además, la preinmunización con la HSP de 65 kDa podría sustituir al BCG en proporcionar sensibilización eficaz para la inducción de anticuerpos anti (NANP) 40. Finalmente, tanto HSP de 65 kDa como de 70 kDa actuaron de moléculas de vehículo para la inducción de anticuerpos IgG a oligosacáridos meningocócicos del grupo C, en ausencia de adyuvantes, sugiriendo que el uso de HSP como vehículos en construcciones conjugadas para la inducción de anticuerpos anti-péptido y anti-oligosacárido podría ser de valor en el diseño de nuevas vacunas para uso eventual en seres humanos.

La patente de EE.UU. nº 5.736.146 desvela conjugados de antígenos escasamente inmunogénicos con un vehículo de péptido sintético que comprende un epítope de linfocitos T derivado de la secuencia de la proteína de choque térmico humana HSP65, o un análogo de la misma, pudiendo dicho péptido o análogo aumentar sustancialmente la inmunogenicidad del antígeno escasamente inmunogénico. La patente 146 desvela conjugados de un péptido correspondiente a las posiciones 458-474 y 437-453 de HSP60 humana o de ratón y homólogos de la misma con una amplia variedad de antígenos que incluyen péptidos, proteínas y polisacáridos tales como polisacárido bacteriano (por ejemplo, polisacárido capsular (CPS) Vi de Salmonella typhi) y antígenos derivados del virus del VIH

o de antígeno de la malaria.

La patente de EE.UU. nº 5.869.058 desvela conjugados de antígenos escasamente inmunogénicos, por ejemplo, péptidos, proteínas y polisacáridos, con un vehículo de péptido sintético que comprende un epítope de linfocitos T derivado de la secuencia de HSP65 de E. coli (GroEL) , o un análogo de la misma, pudiendo dicho péptido o análogo aumentar sustancialmente la inmunogenicidad del antígeno escasamente inmunogénico. Un péptido adecuado según la invención es Pep278e, que se corresponde con las posiciones 437-453 de la molécula de HSP65 de E. coli.

El citomegalovirus humano (HCMV) es un virus de ADN bicatenario ubicuo del grupo de los... [Seguir leyendo]

1. Composición de vacuna que comprende un antígeno y un adyuvante de péptido sintético KKARVEDALHATRAAVEEGV (Ec27; SEC ID Nº: 76) .

5 2. La composición de la reivindicación 1, en la que el antígeno está seleccionado del grupo que consiste en: un péptido, un derivado de péptido, una proteína, un polisacárido y un anticuerpo.

3. La composición de la reivindicación 1, en la que el antígeno es un antígeno vírico.

10 4. La composición de la reivindicación 1, en la que el antígeno está covalentemente unido a dicho adyuvante de péptido sintético.

5. La composición de la reivindicación 1 que comprende una mezcla del antígeno y dicho adyuvante de péptido

sintético. 15

6. La composición de la reivindicación 3, en la que dicho antígeno vírico tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en una cualquiera de SEC ID Nº: 11-12, 21 .

2. 44 y análogos, homólogos, derivados y sales del mismo.

7. Un procedimiento de potenciación de la inmunogenicidad de un antígeno que comprende conjugar 20 covalentemente el antígeno con un vehículo de péptido sintético de SEC ID Nº: 76.