ANTICUERPO CITOTÓXICO CONTRA UN PÉPTIDO C-TERMINAL DE GPC-3.
Un anticuerpo contra un péptido que consiste en los residuos de aminoácidos 375-580 de GPC 3, donde el anticuerpo tiene una actividad citotóxica
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2003/011318.
Solicitante: CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA.
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 5-1, UKIMA 5-CHOME, KITA-KU TOKYO, 115-8543 JAPON.
Inventor/es: ITO, YUKIO, NAKANO,Kiyotaka , ABURATANI,H, MIDORIKAWA,Y, OHIZUMI,Iwao, TOKITA,Susumu.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 4 de Septiembre de 2003.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K16/18 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
- C07K16/30 C07K 16/00 […] › de células tumorales.
Clasificación PCT:
- C07K16/18 C07K 16/00 […] › contra materiales animales o humanos.
- C12N15/06 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Células animales.
Clasificación antigua:
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
PDF original: ES-2373652_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Anticuerpo Citotóxico Contra un Péptido C-terminal de GPC-3
Campo Técnico
La presente invención se refiere a un anticuerpo contra un péptido C-terminal de GPC-3. La invención se refiere a un anticuerpo contra un péptido C-terminal de GPC-3 de aproximadamente 30 kDa encontrado en la forma soluble de la proteína núcleo de GPC-3.
Técnica Anterior
Se ha informado sobre la presencia de la familia de los glipicanos como una nueva familia de proteoglicanos de sulfato de heparano existente sobre la superficie celular. Hasta ahora, se ha informado de que existen cinco tipos de glipicano (glipicano 1, glipicano 2, glipicano 3, glipicano 4 y glipicano 5) . Los miembros de la familia tienen una proteína núcleo de un tamaño uniforme (aproximadamente 60 kDa) y tienen residuos de cisteína bien conservados en común únicos, y están unidos a la membrana celular a través de un ancla de glicosifosfatidilinositol (GPI) .
Se sabe que el glipicano 3 (GPC3) está profundamente implicado en la división celular durante el desarrollo y el control de su patrón. Además, se sabe que el gen de GPC3 es expresado sumamente en células de hepatoma y que el gen de GPC3 se utiliza posiblemente como marcador en el carcinoma hepatocelular.
Los autores de la presente invención encontraron previamente que un anticuerpo anti-GPC3 tenía una actividad ADCC y una actividad CDC y era útil como tratamiento terapéutico del hepatoma y presentaron una solicitud de patente (Solicitud de Patente Japonesa 2001-189443) .
Sin embargo, GPC3 es una proteína unida a la membrana y no se ha informado de que exista una proteína GPC3 de forma secretada. De este modo, no se ha realizado ningún examen a cerca del uso de la propia proteína GPC3 como marcador tumoral en la sangre.
Descripción de la Invención
Los autores de la presente invención encontraron el hecho de que el glipicano 3 (GPC3) es escindido en su residuo de aminoácido 358 o en su residuo de aminoácido 374 o una región en la proximidad de los residuos.
Los autores de la presente invención encontraron que un anticuerpo contra el extremo C de GPC3 tenía una elevada actividad citotóxica y consideraron que el uso del anticuerpo anti-GPC3 que reconoce el extremo C sería preferible para perturbar el desarrollo de las células cancerosas, es decir para tratar terapéuticamente el cáncer. A continuación, los autores de la presente invención realizaron un intento para desarrollar un anticuerpo que reconociera el péptido C-terminal de GPC3, y de este modo completaron la invención.
La invención se refiere a un anticuerpo contra un péptido que consiste en los residuos de aminoácidos 375-580 de GPC3 donde el anticuerpo tiene actividad citotóxica.
En un caso, la actividad citotóxica es una actividad citotóxica para células HepG2 o HuH-7.
Aún más, la invención se refiere al anticuerpo, que es un anticuerpo monoclonal.
Adicionalmente, la invención se refiere al anticuerpo, que es un anticuerpo quimérico.
Por añadidura, la invención se refiere al anticuerpo que es un anticuerpo humanizado.
Además, la invención se refiere al anticuerpo que es un anticuerpo recombinante.
Por añadidura, la invención se refiere al anticuerpo en el que el anticuerpo ha sido producido en una célula de mamífero. En un caso la célula de mamífero puede ser una seleccionada entre una célula CHO, COS, de mieloma, BHK, vero y Hela. La célula de mamífero se puede transformar con un vector de expresión que comprende un gen que codifica el anticuerpo En un caso, la invención se refiere al anticuerpo en el que la célula de mamífero comprende:
(a) un vector de expresión que comprende un gen que codifica la cadena pesada (H) del anticuerpo y un vector de expresión separado que comprende un gen que codifica la cadena ligera (L) del anticuerpo; o (b) un vector de expresión sencillo que codifica tanto la cadena H como L. En tales circunstancias, puede ser que:
(a) el gen que codifica la cadena H del anticuerpo comprenda la secuencia del SEQ ID NO: 9; y/o
(b) el gen que codifica la cadena L del anticuerpo comprenda la secuencia del SEQ ID NO: 17.
También puede ser que:
(a) el gen que codifica la cadena H del anticuerpo comprenda la secuencia del SEQ ID NO: 11; y/o
(b) el gen que codifica la cadena L del anticuerpo comprenda la secuencia del SEQ ID NO: 19.
De este modo, la invención se refiere al anticuerpo para su uso en la perturbación del desarrollo celular, donde las células cuyo desarrollo va a ser perturbado expresan GPC 3.
Además, la invención se refiere al agente para la perturbación del desarrollo celular, donde la célula es una célula cancerosa.
Adicionalmente, la invención se refiere a un agente anticanceroso que comprende el anticuerpo. En particular, el anticuerpo de la invención puede ser uno que se utilice en el tratamiento del cáncer, donde el cáncer expresa GPC
3.
En una realización el cáncer es un hepatoma, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, leucemia o linfoma.
La invención también se refiere a una formulación farmacéutica que comprende un anticuerpo de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
La invención se describe ahora con detalle más adelante.
Puesto que el anticuerpo contra el péptido C-terminal de GPC3 de acuerdo con la invención tiene una elevada actividad citotóxica, el anticuerpo se puede utilizar para perturbar el desarrollo de las células cancerosas, es decir para tratar terapéuticamente el cáncer. El cáncer que puede ser tratado clínicamente utilizando el anticuerpo incluye, pero no está limitado a, hepatoma, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, leucemia, y linfoma. Preferiblemente, el cáncer es un hepatoma.
1. Preparación del anticuerpo anti-GPC3 contra el péptido N-terminal o del anticuerpo anti-GPC3 contra el péptido C-terminal
La secuencia de aminoácidos y secuencia de nucleótidos de GPC3 son descritos por Lage, H. et al., Gene 188 (1997) , 151-156 o GenBank: Z37987.
El anticuerpo anti-GPC3 contra el péptido C-terminal utilizado en la invención debe ser capaz de unirse específicamente al péptido C-terminal de la proteína GPC3 que consiste en los residuos de aminoácido 375 a 580 de GPC3. Su origen o tipo (monoclonal, policlonal) o su forma no están específicamente limitados. Específicamente, se pueden utilizar anticuerpos conocidos tales como anticuerpo de ratón, anticuerpo de rata, anticuerpo humano, anticuerpo quimérico y anticuerpo humanizado.
Cuando GPC3 es escindida en un sitio de escisión, GPC3 se corta en un péptido de aproximadamente 40 kDa y un péptido de aproximadamente 30 kDa, que son el lado N-terminal y el lado C-terminal, respectivamente. El sitio de escisión de GPC3 es el residuo de aminoácido 358, el residuo de aminoácido 374 o una región en su proximidad. Se cree que el sitio de escisión principal es el residuo de aminoácido 358.
El péptido C-terminal de GPC3 es un péptido C-terminal de GPC3 y de aproximadamente 30 kDa encontrado en la forma soluble de la proteína núcleo de GPC-3. Basándose en el sitio de escisión mencionado anteriormente, el péptido C-terminal es un péptido de una secuencia de aminoácidos de Val 375 a His 580. De acuerdo con la invención, se pueden emplear fragmentos de tal péptido C-terminal. En esta memoria, el péptido C-terminal es referido también como fragmento C-terminal o fragmento peptídico C-terminal.
En otras palabras, el anticuerpo contra el péptido C-terminal de GPC3 de acuerdo con la invención es un anticuerpo que reconoce un epítopo existente sobre el péptido C-terminal de la proteína GPC3 de los aminoácidos 375 a 580, y el sitio del epítopo reconocido no está limitado.
El anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal pero es preferiblemente un anticuerpo monoclonal.
El anticuerpo anti-péptido C-terminal de GPC3 para su uso de acuerdo con la invención se puede obtener en forma de un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal, utilizando técnicas conocidas. El anticuerpo anti-GPC3 para su uso de acuerdo con la invención es preferiblemente un anticuerpo monoclonal derivado de mamíferos. El anticuerpo monoclonal derivado de mamíferos... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un anticuerpo contra un péptido que consiste en los residuos de aminoácido.
37. 580 de GPC 3, donde el anticuerpo tiene una actividad citotóxica.
2. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde la actividad citotóxica es una actividad citotóxica para las células HepG2 o HuH-7.
3. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 o 2, donde el anticuerpo es:
un anticuerpo monoclonal; y/o es un anticuerpo quimérico; y/o es un anticuerpo humanizado.
4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la actividad citotóxica es la actividad ADCC.
5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la actividad citotóxica es la actividad CDC.
6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el anticuerpo es un anticuerpo recombinante.
7. El anticuerpo de la reivindicación 6, donde el anticuerpo ha sido producido en una célula de mamífero.
8. El anticuerpo de la reivindicación 7, donde la célula de mamífero se selecciona entre una célula CHO, COS, de mieloma, BHK, vero y Hela.
9. El anticuerpo de la reivindicación 7 u 8, donde la célula de mamífero es transformada con un vector de expresión que comprende un gen que codifica el anticuerpo.
10. El anticuerpo de la reivindicación 9, donde la célula de mamífero comprende:
(a) un vector de expresión que comprende un gen que codifica la cadena pesada (H) del anticuerpo y un vector de expresión separado que comprende un gen que codifica la cadena ligera (L) del anticuerpo; o
(b) un vector de expresión sencillo que codifica tanto la cadena H como L.
11. El anticuerpo de la reivindicación 9 o 10, donde:
(a) el gen que codifica la cadena H del anticuerpo comprende la secuencia del SEQ ID NO: 9; y/o
(b) el gen que codifica la cadena L del anticuerpo comprende la secuencia del SEQ ID NO: 17.
12. El anticuerpo de la reivindicación 9 o 10, donde:
(a) el gen que codifica la cadena H del anticuerpo comprende la secuencia del SEQ ID NO: 11; y/o
(b) el gen que codifica la cadena L del anticuerpo comprende la secuencia del SEQ ID NO: 19.
13. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que es un anticuerpo humanizado.
14. Un anticuerpo como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en el tratamiento de cáncer, donde el cáncer expresa GPC 3.
15. Un anticuerpo como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 para su uso en la perturbación del desarrollo celular, donde las células cuyo desarrollo va a ser perturbado expresan GPC 3.
16. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, donde la célula es una célula cancerosa.
17. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 14 o 16, donde el cáncer es hepatoma, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, leucemia o linfoma.
18. Una formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y un portador y/o aditivo farmacéuticamente aceptable.
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