Producción de glucoproteínas modificadas con múltiples estructuras antenarias.
(05/09/2013) Una célula huésped de hongo unicelular o multicelular que es capaz de producir glucoproteínas que comprenden una estructura nuclear de N-glucano triantenario, en la que las células huésped son genomanipuladas para que produzcan glucoproteínas que tienen un N-glucano GlcNAc2Man3GlcNAc2 y en la que las células huésped además incluyen un ácido nucleico que codifica el dominio catalítico de la N-acetilglucosaminiltransferasa IV exógena GnT IVB (Δ104-53) humana fusionado con los nucleótidos 1-108 del gen MNN2 de S. cerevisiae que actúa como péptido de señalización de direccionamiento celular no asociado normalmente con el dominio catalítico, que dirige dicho dominio catalítico al RE o al aparato de Golgi de la célula huésped.
Expresión de N-acetilglucosaminiltransferasa III en eucariotas inferiores.
(21/08/2013) Un procedimiento para fabricar una glucoproteína recombinante en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso de eucariota inferior modificada para producir una glucoproteína que tiene una estructura central de Man3GlcNAc2 o de Man5GlcNAc2, que comprende la etapa de introducir en la célula un ácido nucleico que codifica una actividad de N-acetilglucosaminiltransferasa III, en el que dicha actividad es de una enzima que comprende el dominio catalítico de N-acetilglucosaminiltransferasa III GnTIII Δ32 de ratón o GnTIII Δ86 de ratón fusionado con un péptido de dirección MNN2 de Saccharomyces cerevisiae.
Biblioteca de ADN combinatoria para producir N-glucanos modificados en eucariotas inferiores.
(29/07/2013) Una célula huésped de un hongo unicelular o filamentoso que no presenta actividad α1,6 manosiltransferasa conrespecto al N-glucano en una glucoproteína, comprendiendo dicha célula huésped un ácido nucleico que codificauna proteína de fusión que comprende el dominio catalítico de una α-1,2-manosidasa fusionada en el extremo N-terminal con un péptido señal de dirección celular SEC12, VAN1 o MNN10 para la producción de una estructura decarbohidrato de Man5GlcNAc2, en donde Man5GlcNAc2 se produce como un sustrato productivo para GnTI in vivodentro de la célula huésped a un rendimiento de al menos el 30 por ciento en moles.
Biblioteca de ADN combinatoria para producir N-glucanos modificados en eucariotas inferiores.
(15/01/2013) Un procedimiento para producir una glucoproteína de tipo humano en una célula huésped que es un hongo unicelular o filamentoso que no presenta actividad α1, 6 manosiltransferasa con respecto al N-glucano en una glucoproteína, comprendiendo el procedimiento la etapa de introducir en la célula huésped un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión que comprende el dominio catalítico de una α-1, 2-manosidasa fusionada en el extremo N-terminal con un péptido señal de dirección celular SEC12, VAN1, o MNN10 para la producción de una estructura de carbohidrato de Man5GlcNAc2, en el que Man5GlcNAc2 se produce como un sustrato productivo para GnTI in vivo dentro de la célula huésped a un rendimiento de al menos 30 por ciento en moles.
Producción de glicoproteínas modificadas que tienen estructuras multiantenarias.
(16/07/2012) Una célula huésped de hongo unicelular o pluricelular que es capaz de producir glicoproteínas que comprendenuna estructura central de N-glicano triantenaria, en la que la célula huésped se modifica por ingeniería genética paraproducir glicoproteínas que tienen un N-glicano GlcNAc2Man3GlcNAc2 y en el que la célula huésped incluye ademásuna molécula de ácido nucleico que codifica el dominio catalítico de la N-acetilglucosaminiltransferasa V (GnT V) deratón (Δ145) fusionado a los aminoácidos 1-36 del péptido señal de dirección celular de MNN2 de S. cerevisiae, quedirige el dominio catalítico al RE o al aparato de Golgi de la célula huésped.
EXPRESION DE N-ACETILGLUCOSAMINIL TRANSFERASA III EN EUCARIOTAS INFERIORES.
(25/03/2010) Un procedimiento para fabricar una glucoproteína recombinante en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso de eucariota inferior modificada para producir una glucoproteína que tiene una estructura central de Man3GlcNAc2 o de Man5GlcNAc2, que comprende la etapa de introducir en la célula un ácido nucleico que codifica una actividad de N-acetilglucosaminiltransferasa III, en el que dicha actividad es de una enzima que comprende el dominio catalítico de N-acetilglucosaminiltransferasa III GnTIII ?32 de ratón o GnTIII ?86 de ratón fusionado con un péptido de dirección MNN2 de Saccharomyces cerevisiae
PROCEDIMIENTO DE PRODUCCION DE GLUCOPROTEINAS MODIFICADAS.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(09/12/2009). Solicitante/s: GLYCOFI, INC.. Clasificación: C12N1/14, C12N15/79, C12N9/24, C12N9/10D, C12N15/62, C12N5/10, C12N9/10, C12P21/00, C12R1/645.
Un procedimiento de cribar una adenoteca para detectar una célula huésped capaz de producir una glucoproteína diana con más del 30% molar de Man5GlcNAc2, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
(a) proporcionar una célula huésped unicelular o de hongo filamentoso que no presente actividad de alfa-1,6manosiltransferasa con respecto al N-glucano de la glucoproteína diana;
(b) introducir un gen en dicha célula huésped que codifica una enzima híbrida que comprende un dominio catalítico de alfa-1,2 manosidasa fusionado a un péptido de señalización celular en el extremo N que dirige y ancla dicho dominio catalítico al RE o al aparato de Golgi; y
(c) determinar el nivel de Man5GlcNAc2 en la proteína diana.
METODOS PARA PRODUCIR GLICOPROTEINAS MODIFICADAS.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(16/05/2006). Ver ilustración. Solicitante/s: GLYCOFI, INC.. Clasificación: C12N15/62, C12N5/10, C12N9/10, C12P21/00, C12N1/14, C12N9/24.
Una célula huésped que es un hongo unicelular o filamentoso que no muestra actividad alfa-1, 6- manosiltransferasa con respecto al N-glicano sobre una glicoproteína, que tiene en su retículo endoplasmático (RE) o aparato de Golgi un enzima híbrido seleccionado para tener actividad óptima en el RE o aparato de Golgi de dicha célula huésped, de manera que dicha célula huésped es capaz de formar de 50 a 100 moles% de Man5GlcNAc2 sobre una glicoproteína sustrato, el enzima híbrido que comprende: (a) un dominio catalítico de manosidasa exógeno que tiene una actividad óptima en dichos RE o Golgi a un pH entre 5, 1 y 8, 0; fusionado a (b) un péptido señal localizador anormalmente asociado con el dominio catalítico de (a), donde dicho péptido señal de selección celular dirige el ya citado dominio catalítico de manosidasas exógenas hacia dicho RE o aparato de Golgi.
