Procedimientos y productos para la producción de líneas celulares de mamífero modificadas con transgenes amplificados.

Un procedimiento para la inserción de una secuencia exógena en un locus que se pueda amplificar de una célula de mamífero que comprende:



(a) proporcionar una célula de mamífero que tiene un sitio diana endógeno proximal a un gen de selección endógeno en el locus que se puede amplificar, en el que el sitio diana endógeno está de 0 a 100.000 pares de bases corriente abajo de la región reguladora 3' del gen de selección endógeno o de 0 a 100.000 pares de bases corriente arriba de la región reguladora 5' del gen de selección endógeno, en el que el sitio diana endógeno comprende:

(i) una secuencia de reconocimiento de una meganucleasa modificada

(ii) una región flanqueante 5' en 5' de la secuencia de reconocimiento; y

(iii) una región flanqueante 3' en 3' de la secuencia de reconocimiento; y

(b) introducir una rotura de doble cadena entre las regiones flanqueantes 5' y 3' del sitio diana endógeno;

(c) poner en contacto la célula con un vector donante que comprende de 5' a 3':

(i) una región flanqueante donante 5' homóloga de la región flanqueante 5' del sitio diana endógeno;

(ii) una secuencia exógena; y

(iii) una región flanqueante donante 3' homóloga de la región flanqueante 3' del sitio diana endógeno; de esta manera la región flanqueante donante 5', la secuencia exógena y la región flanqueante donante 3' se insertan entre las regiones flanqueantes 5' y 3' del sitio diana endógeno mediante recombinación homóloga para proporcionar una célula modificada.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/040599.

Solicitante: Precision Biosciences, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 302 East Pettigrew Street, Dibrell Building, Suite A-100 Durham, NC 27701 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: Smith,James Jefferson, Jantz,Derek, NICHOLSON,MICHAEL G.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/85 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células animales.
  • C12N15/90 C12N 15/00 […] › Introducción estable de ADN extraño en el cromosoma.
  • C12N9/00 C12N […] › Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas.
  • C12N9/06 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › actúan sobre compuestos que contienen nitrógeno como dadores (1.4, 1.5, 1.7).
  • C12N9/22 C12N 9/00 […] › Ribonucleasas.
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2713529_T3.pdf

 

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