Método para producir anticuerpos.

Un método para obtener un anticuerpo recombinante con una capacidad deseada para unirse a un antígeno seleccionado que evita múltiples etapas de digestión y ligación para producir vectores y múltiples transformaciones en células huésped,

que comprende:

(a) proporcionar una población de células linfocíticas formadoras de anticuerpos que se sospecha que contienen al menos una célula capaz de producir un anticuerpo que comprende una cadena pesada y una cadena ligera que muestra dicha especificidad deseada;

(aa) una primera etapa de selección previa a la etapa (b) en la que la población de células formadoras de anticuerpos proporcionadas en la etapa (a) se seleccionan para identificar una célula formadora de anticuerpos o una población de células formadoras de anticuerpos que producen un anticuerpo que muestra la capacidad deseada: (aaa) identificar y aislar una única célula formadora de anticuerpos que produce un anticuerpo que muestra la capacidad deseada a partir de una población de células formadoras de anticuerpos identificada por la primera etapa de selección (aa);

(b) generar un polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo que codifica una cadena ligera o un fragmento de la misma y un polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo que codifica una cadena pesada o un fragmento de la misma para cada anticuerpo recombinante a partir de la única célula aislada formadora del anticuerpo obtenida en la etapa (aaa), en la que cada polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo comprende una primera secuencia de polinucleótidos codificante que codifica un dominio variable de un anticuerpo producido por la única célula aislada formadora de anticuerpos obtenida en la etapa (aaa), una segunda secuencia de polinucleótidos codificante que codifica una o más secuencias de polinucleótidos codificantes de dominio constante y uno o más elementos reguladores de la transcripción y no es capaz de replicación autónoma; en donde la etapa (b) comprende:

bb) proporcionar la primera secuencia de polinucleótidos codificante, la segunda secuencia de polinucleótidos codificante y los uno o más elementos reguladores de la transcripción; bbb) unir la primera secuencia de polinucleótidos codificante y la segunda secuencia de polinucleótidos codificante mediante PCR, y

bbbb) unir uno o más elementos reguladores de la transcripción a la primera secuencia de polinucleótidos codificante y/o a la segunda secuencia de polinucleótidos codificante mediante PCR;

(c) expresar un anticuerpo recombinante que comprende una cadena pesada y una cadena ligera de polinucleótidos lineales recombinantes transcripcionalmente activos generados en la etapa (b) mediante transfección transitoria de los polinucleótidos lineales recombinantes transcripcionalmente activos en una célula, cultivando dichas células huésped en un medio apropiado y aislando el anticuerpo a partir de la célula;

(d) seleccionar el anticuerpo recombinante producido por la etapa (c) para la capacidad deseada; y

(e) repetir opcionalmente las etapas (b), (c) y (d) para identificar un anticuerpo recombinante que muestra la capacidad deseada.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/052408.

Solicitante: UCB Biopharma SPRL.

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: ALLÉE DE LA RECHERCHE 60 1070 BRUSSELS BELGICA.

Inventor/es: STEPHENS,PAUL EDWARD, WRIGHT,MICHAEL JOHN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/24 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C12N15/64 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Métodos generales para la preparación del vector, para su introducción en la célula o para la selección del huésped que contiene el vector.

PDF original: ES-2700442_T3.pdf

 

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