Método para determinar el estado mutacional de PIK3CA en una muestra.

Un método para analizar la presencia de ADN de un alelo mutante de PIK3CA en una muestra de ADN,

comprendiendo dicho método las etapas de realizar una reacción en cadena de polimerasa (PCR) asimétrica y específica de alelo de dicho ADN de alelo mutante, y realizar un análisis de fusión del ADN producido en la PCR, en el que dicha PCR se realiza mediante el uso de:

- un cebador específico de alelo mutante complementario con un extremo 3' (tres prima) de una primera hebra del ADN del alelo mutante que se va amplificar, y dicho cebador específico de alelo mutante comprende un sitio de mutación y un desapareamiento con el ADN de tipo salvaje correspondiente, y

- una sonda de bloqueo no marcada que es un oligonucleótido complementario con una secuencia de tipo salvaje de una primera hebra del ADN de tipo salvaje correspondiente a una primera hebra del ADN del alelo mutante en la posición correspondiente donde se encuentra la mutación que se va a detectar, y dicha sonda de bloqueo no marcada comprende un desapareamiento adicional con dicha primera hebra de ADN del alelo mutante además del sitio de mutación, y dicha sonda está bloqueada para actuar como cebador para la síntesis de ADN en la reacción de PCR; y

- un cebador común que es complementario con un extremo 3' de una segunda hebra de ADN del alelo mutante se va a ser amplificado por la PCR, y en el que dicho análisis de fusión se realiza mediante el uso de:

- una sonda de fusión, en forma de una sonda no marcada que es un oligonucleótido que comprende una secuencia complementaria al ADN del alelo de tipo salvaje y que se solapa con una secuencia del ADN del alelo mutante; y

- un componente detectable para medir la temperatura de fusión de los componentes de ADN de doble hebra que al menos incluye un componente de doble hebra de la sonda de fusión unido a una hebra de ADN del alelo mutante amplificado o una hebra de ADN de alelo de tipo salvaje, en el que la temperatura de fusión difiere entre el componente de hebra doble de la sonda de fusión unido a la hebra del alelo mutante amplificado y la sonda de fusión unida a la hebra del alelo de tipo salvaje amplificado.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GR2015/000036.

Solicitante: Pharmassist Ltd.

Nacionalidad solicitante: Grecia.

Dirección: Anthrakorichon 15 142 35 Nea Ionia, Athens GRECIA.

Inventor/es: MARKOU,Athina, LIANIDOU,EVRYKLEIA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2764423_T3.pdf

 

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