DsbA y DsbC ultrapurificadas y procedimientos de preparación y uso de las mismas.

Un procedimiento para purificar un polipéptido de disulfuro oxidorreductasa A (DsbA) de un lisado celular que comprende el polipéptido de DsbA,

comprendiendo el procedimiento

a) añadir polietilenimina (PEI) a una concentración final de un 0,01 % a 1,0 %, preferentemente un 0,1 %, a un lisado celular que comprende el polipéptido de DsbA,

b) clarificar el lisado celular mediante centrifugación,

c) aplicar el lisado celular clarificado que comprende el polipéptido de DsbA a un material de cromatografía de intercambio aniónico,

d) eluir el polipéptido de DsbA del material de cromatografía de intercambio aniónico para generar un eluido del intercambio aniónico que comprende el polipéptido de DsbA,

e) aplicar el eluido del intercambio aniónico que comprende el polipéptido de DsbA a un material de cromatografía de intercambio catiónico,

f) eluir el polipéptido de DsbA del material de cromatografía de intercambio catiónico para generar un eluido del intercambio catiónico que comprende la DsbA purificada, en el que la DsbA comprende al menos un 95 % de polipéptido de DsbA monomérica.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2016/021059.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.

Inventor/es: LIM, AMY, WONG,MARC, YEE,LILIANA T, FONG,CHRIS B.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K1/113 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › sin cambio de la estructura primaria.
  • C07K1/16 C07K 1/00 […] › por cromatografía.
  • C07K1/18 C07K 1/00 […] › Cromatografía de intercambio iónico.
  • C07K1/20 C07K 1/00 […] › Cromatografía de partición, fase inversa o hidrófoba.
  • C12N9/02 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Oxidorreductasas (1.), p. ej. luciferasa.
  • C12N9/90 C12N 9/00 […] › Isomerasas (5.).
  • G01N33/53 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2761726_T3.pdf

 

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