Amplificación selectiva de las regiones de ácido nucleico deseadas en una secuencia diana.

Procedimiento para la amplificación selectiva de amplicones deseados en una reacción en cadena de la polimerasa en dos etapas,

que comprende los pasos de:

• proporcionar un material genético diana;

• desnaturalizar el material genético diana;

• añadir un conjunto de cebadores diana en condiciones que permitan la reasociación de cebadores con material genético diana;

• comprendiendo cada cebador en dicho conjunto de cebadores diana

• una secuencia específica de diana,.

• una secuencia de control de desemparejamiento, y

• una secuencia de hibridación genérica;

* siendo dicha secuencia de hibridación genérica idéntica en cada cebador diana;

* estando dicha secuencia de control de desemparejamiento y secuencia de hibridación genérica próximas entre sí; y

* comprendiendo dicho conjunto de cebadores diana al menos dos pares de cebadores adaptados para la amplificación de al menos dos amplicones deseados superpuestos en el material genético diana, de tal modo que existe la posibilidad de obtener al menos un amplicón no deseado en la región de superposición;

* estando caracterizado además dicho conjunto de cebadores diana porque cualquier par de cebadores que flanquean una secuencia de amplicón deseada tiene secuencias de control de desemparejamiento desemparejadas, mientras que cualquier par de cebadores que flanquean una secuencia de amplicón no deseada tiene secuencias de control de desemparejamiento emparejadas;

• llevar a cabo una primera reacción en cadena de la polimerasa multiplexada, dando como resultado amplicones superpuestos correspondientes a diferentes combinaciones posibles de pares de cebadores en el primer conjunto de cebadores, manteniéndose dichos amplicones superpuestos en condiciones tales que se autohibridan a través del acoplamiento de pares de bases entre las secuencias complementarias resultantes de la secuencia de hibridación genérica en cada cebador;

• tratar dichos amplicones superpuestos en condiciones de selección que son tales que los amplicones deseados se desnaturalizan debido a secuencias no complementarias resultantes de las secuencias de control de desemparejamiento desemparejadas, mientras que los amplicones no deseados permanecen autohibridados debido a secuencias complementarias adicionales resultantes de las secuencias de control de desemparejamiento emparejadas;

• añadir cebadores genéricos, cada uno de los cuales comprende una secuencia que es complementaria de la secuencia de hibridación genérica;

• llevar a cabo una segunda reacción en cadena de la polimerasa, que da como resultado la amplificación selectiva de los amplicones deseados.