Métodos de cribado y usos de los mismos.

Un método de aislar al menos un antiligando, en el que el antiligando es un polipéptido,

frente a al menos un ligando diana expresado diferencialmente, en donde el ligando diana es un antígeno de la superficie celular, en donde el ligando diana expresado diferencialmente es un ligando de baja expresión, en donde el ligando de baja expresión se expresa a entre 5.000 y 20.000 copias por célula, en donde el método comprende las etapas de:

(a) llevar a cabo la selección por afinidad diferencial sobre una biblioteca de moléculas antiligandos con el fin de aislar al menos un antiligando, en donde la etapa de selección por afinidad diferencial comprende además las subetapas de:

(i) proporcionar una biblioteca de antiligandos;

(ii) proporcionar una primera población de ligandos que comprende un ligando fijo a o incorporado en una construcción de ligando sustractor;

(iii) proporcionar una segunda población de ligandos que comprende el mismo ligando que en la etapa (ii), fijo a o incorporado en una construcción de ligando diana;

(iv) determinar una cantidad de la construcción del ligando sustractor y la construcción del ligando diana en las poblaciones que utilizan una o más ecuaciones derivadas de la ley universal de acción de masas**Fórmula**

donde:

A, B, C y D ≥ son los participantes en la reacción (reactivos y productos)

a, b, c, y d ≥ los coeficientes necesarios para obtener una ecuación química equilibrada

con el fin de permitir el aislamiento de una molécula dirigida contra ligando para un ligando diana expresado diferencialmente, en donde la ecuación es cualquiera de:**Fórmula**

donde

bA ≥ Antiligando unido

A ≥ Número total de antiligandos

T ≥ Número total de ligandos

C ≥ Constante de Avogrado (6,022 x 1023 35 partículas/moles)

V ≥ Volumen de reacción (litros)

Kd ≥ Constante de disociación en equilibrio

o

**Fórmula**

donde

bAp ≥ Antiligando unido

Tp ≥ El número de ligandos en Cp

Ts ≥ El número de ligandos en Cs

Cp ≥ El número de construcciones de ligandos diana

Cs ≥ El número de construcciones de ligandos sustractores

A ≥ Número total de antiligandos

T ≥ Número total de ligandos

C ≥ Constante de Avogrado (6,022 x 1023 partículas/moles)

V ≥ Volumen de reacción (litros)

Kd ≥ Constante de disociación en el equilibrio;

(v) proporcionar la cantidad de construcción de ligando sustractor como se determina en la etapa (iv);

(vi) proporcionar la cantidad de construcción de ligando diana como se determina en la etapa (iv);

(vii) proporcionar medios de separación para aislar el antiligando unido a la construcción del ligando diana a partir de un antiligando unido a una construcción de ligando sustractor;

(viii) exponer la biblioteca de (i) a las construcciones de ligandos proporcionadas por (v) y (vi) para permitir la unión de antiligandos a ligandos; y

(ix) utilizar los medios de separación para aislar el antiligando unido al ligando fijo a o incorporado en la construcción del ligando diana;

(b) a continuación llevar a cabo la secuenciación de alto rendimiento sobre los antiligandos aislados durante la etapa (a); y,

(c) a continuación llevar a cabo el cribado confirmatorio de la unión específica del antiligando para el ligando expresado diferencialmente.