Procedimiento de aislamiento de anticuerpos humanos.

Procedimiento para producir un anticuerpo humano o fragmento de unión del mismo con especificidad deseada caracterizado por el aislamiento de células B de cultivos oligoclonales a corto plazo de células B activadas que secretan anticuerpos de isotipo IgG que comprende las siguientes etapas en la secuencia:



(a) seleccionar células B de memoria que expresan anticuerpos contra una proteína de interés de una o más muestras biológicas en base a la expresión de al menos un marcador de membrana de la superficie celular y/o de unión a antígeno, en el que dicha muestra biológica deriva de un paciente que sufre de síndrome de poliendocrinopatía autoinmune de tipo 1 (APS-1)/poliendocrinopatía autoinmune-candidiasis-distrofia ectodérmica (APECED), y en el que las células están agotadas de los isotipos IgM e IgD;

(b) estimular las células seleccionadas con un primer activador de células B policlonal que es el virus de Epstein-Barr (EBV) en condiciones de cultivo celular durante tres a cinco horas;

(c) separar las células de dicho activador, en el que el activador se elimina mediante dilución o lavado;

(d) activar las células estimuladas con un segundo activador de células B policlonal que es un oligonucleótido basado en CpG en condiciones de cultivo celular que no comprenden una citoquina;

(e) cribar las células activadas que expresan anticuerpos de isotipo IgG de interés y preferiblemente;

(e') recoger células individuales de los cultivos oligoclonales que producen el anticuerpo de interés;

(f) secuenciar y/o clonar el ADNc de al menos las regiones variables de cadena ligera y pesada y opcionalmente la región constante del anticuerpo de interés,

en el que el procedimiento no comprende la clonación celular de las células B.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2013/050026.

Solicitante: ImmunoQure AG.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: Königsallee 90 40212 Düsseldorf ALEMANIA.

Inventor/es: KROHN,KAI, PETERSON,PART, RANKI,ANNAMARI, MACAGNO,ANNALISA, HAYDAY,ADRIAN, KISAND,KAI, STUART,EDWARD.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/395 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61P37/00 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos.
  • C07K16/06 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › del suero.
  • C07K16/18 C07K 16/00 […] › contra materiales animales o humanos.
  • C12N15/13 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Inmunoglobulinas.
  • C12N5/0781 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células B; Sus progenitores.

PDF original: ES-2668104_T3.pdf

 

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