Métodos para aislar, cultivar y modificar genéticametne poblaciones de células inmunes para la terapia adoptiva.

Un método para enriquecer las células T CD4+ y CD8+, el método comprende:



(a) realizar una primera selección en un sistema cerrado, dicha primera selección comprende el enriquecimiento para una de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de una muestra que contiene células T humanas primarias, generando el enriquecimiento así una primera población seleccionada y una población no seleccionada; y

(b) realizar una segunda selección en el sistema cerrado, comprendiendo dicha segunda selección enriquecer para la otra de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de la población no seleccionada, generando así el enriquecimiento de una segunda población seleccionada.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/027401.

Solicitante: Juno Therapeutics, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 400 Dexter Avenue North, Suite 1200 Seattle, WA 98109-4703 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: RAMSBORG,CHRIS, BONYHADI,MARK L, CHAN,CALVIN, BEAUCHESNE,PASCAL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K35/12 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sustancias procedentes de mamíferos; Composiciones que comprenden tejidos o células indeterminadas; Composiciones que comprenden células madre no embrionarias; Células modificadas genéticamente (células madre no caracterizadas A61K 35/545; vacunas o preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00).
  • A61K35/17 A61K 35/00 […] › Linfocitos; Células B; Células T; Células NK; Linfocitos activados por interferón o activados por citoquinas (cuando se activan por un antígeno concreto A61K 39/00).
  • C12M1/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12M EQUIPOS PARA ENZIMOLOGIA O MICROBIOLOGIA (instalaciones para la fermentación de estiércoles A01C 3/02; conservación de partes vivas de cuerpos humanos o animales A01N 1/02; aparatos de cervecería C12C; equipos para la fermentación del vino C12G; aparatos para preparar el vinagre C12J 1/10). › Equipos para enzimología o microbiología.
  • C12N5/0781 C12 […] › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células B; Sus progenitores.
  • C12N5/0783 C12N 5/00 […] › Células T; Células NK; Progenitores de células T o NK.
  • G01N33/569 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

PDF original: ES-2759260_T3.pdf

 

Métodos para aislar, cultivar y modificar genéticametne poblaciones de células inmunes para la terapia adoptiva.

Reivindicaciones:

1. Un método para enriquecer las células T CD4+ y CD8+, el método comprende:

(a) realizar una primera selección en un sistema cerrado, dicha primera selección comprende el enriquecimiento para una de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de una muestra que contiene células T humanas primarias, generando el enriquecimiento así una primera población seleccionada y una población no seleccionada; y

(b) realizar una segunda selección en el sistema cerrado, comprendiendo dicha segunda selección enriquecer para la otra de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de la población no seleccionada, generando así el enriquecimiento de una segunda población seleccionada.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende además:

incubar células de la primera población seleccionada en condiciones estimulantes e incubar células de la segunda población seleccionada en condiciones estimulantes; y/o

introducir un receptor de antígeno genéticamente modificado en células de la primera población seleccionada y en células de la segunda población seleccionada.

3. El método de la reivindicación 1, que comprende además:

incubar una composición iniciadora de cultivo que comprende células de la primera población seleccionada y células de la segunda población seleccionada, opcionalmente en una proporción deseada, en un recipiente de cultivo en condiciones estimulantes, generando así células estimuladas; y

opcionalmente introducir un receptor de antígeno genéticamente modificado en una pluralidad de células estimuladas, en donde el método genera una composición de salida que comprende células T CD4+ y células T CD8+ que expresan el receptor de antígeno genéticamente modificado.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, que comprende además la combinación de células de la primera población seleccionada y las células de la segunda población seleccionada en una proporción deseada de células CD4+ a las células CD8+.

5. El método de la reivindicación 4, en donde dicha relación deseada es entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 1:5, aproximadamente 2:1 y aproximadamente 1:2, aproximadamente 1, 5:1 y aproximadamente o aproximadamente 1:5, aproximadamente 1, 5:1 y aproximadamente 1:2, o aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:2, o es o es aproximadamente 1, 1.

6. El método de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde dicha relación deseada es de aproximadamente 1:1.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en donde dicha combinación se realiza en el sistema cerrado.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 4-7, en donde el método genera así una composición de salida que comprende las células T CD4+ y CD8+ en la proporción deseada.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 -8, en donde las células enriquecedoras en la primera y/o segunda selección comprenden una selección basada en inmunoafinidad.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la primera selección y la segunda selección se llevan a cabo en recipientes de separación separados, que están conectados operativamente.

11. El método de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la selección basada en inmunoafinidad en la primera y/o segunda selección comprende:

poner en contacto las células con un anticuerpo inmovilizado o unido a una matriz de cromatografía de afinidad, dicho anticuerpo capaz de unirse específicamente a un marcador de superficie celular para efectuar una selección positiva o negativa de células CD4+ o CD8+; y recolectar células de la matriz de cromatografía de afinidad enriquecida para las células CD4+ o las células CD8+.

12. El método de la reivindicación 11, en donde:

el anticuerpo comprende uno o más pares de unión capaces de formar un enlace reversible con un reactivo de unión inmovilizado en la matriz de cromatografía de afinidad, por lo que el anticuerpo se une reversiblemente a dicha matriz de cromatografía de afinidad durante dicho contacto; y las células que expresan un marcador de la superficie celular específicamente unido por el anticuerpo en dicha matriz de cromatografía de afinidad pueden recogerse de la matriz al interrumpir la unión reversible entre el reactivo de unión y el par de unión.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde el enriquecimiento para las células CD4+ comprende una selección positiva basada en la expresión superficial de CD4 y/o el enriquecimiento para las células CD8+ comprende una selección positiva basada en la expresión superficial de CD8.

14. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde una de la primera y segunda selecciones que comprende enriquecer para las células CD8+ comprende además enriquecer para células T (Tcm) de memoria central y/o enriquecer para células que expresan un marcador seleccionado de entre CD28, CD62L, CCR7, CD127 y CD27.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde la muestra se obtiene de un sujeto.

16. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde la muestra es una muestra de sangre o derivada de sangre, una muestra de glóbulos blancos, una muestra de aféresis, una muestra de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) o una muestra de leucoféresis.

17. El método de las reivindicaciones 2-16, en donde la condición estimulante:

comprende un agente capaz de activar uno o más dominios de señalización intracelular de uno o más componentes de un complejo TCR; y/o

comprende la presencia de un anticuerpo anti-CD3, un anticuerpo anti-CD28, un anticuerpo anti-4-1BB y/o una citocina.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2-17, en donde:

el receptor de antígeno genéticamente modificado comprende un receptor de células T (TCR) o un receptor de antígeno funcional no TCR; o el receptor de antígeno genéticamente modificado comprende un receptor de antígeno quimérico (CAR) .

 

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