Métodos para aislar, cultivar y modificar genéticametne poblaciones de células inmunes para la terapia adoptiva.

1. Un método para enriquecer las células T CD4+ y CD8+, el método comprende:

(a) realizar una primera selección en un sistema cerrado, dicha primera selección comprende el enriquecimiento para una de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de una muestra que contiene células T humanas primarias, generando el enriquecimiento así una primera población seleccionada y una población no seleccionada; y

(b) realizar una segunda selección en el sistema cerrado, comprendiendo dicha segunda selección enriquecer para la otra de (I) células CD4+ y (II) células CD8+ de la población no seleccionada, generando así el enriquecimiento de una segunda población seleccionada.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende además:

incubar células de la primera población seleccionada en condiciones estimulantes e incubar células de la segunda población seleccionada en condiciones estimulantes; y/o

introducir un receptor de antígeno genéticamente modificado en células de la primera población seleccionada y en células de la segunda población seleccionada.

3. El método de la reivindicación 1, que comprende además:

incubar una composición iniciadora de cultivo que comprende células de la primera población seleccionada y células de la segunda población seleccionada, opcionalmente en una proporción deseada, en un recipiente de cultivo en condiciones estimulantes, generando así células estimuladas; y

opcionalmente introducir un receptor de antígeno genéticamente modificado en una pluralidad de células estimuladas, en donde el método genera una composición de salida que comprende células T CD4+ y células T CD8+ que expresan el receptor de antígeno genéticamente modificado.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, que comprende además la combinación de células de la primera población seleccionada y las células de la segunda población seleccionada en una proporción deseada de células CD4+ a las células CD8+.

5. El método de la reivindicación 4, en donde dicha relación deseada es entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 1:5, aproximadamente 2:1 y aproximadamente 1:2, aproximadamente 1, 5:1 y aproximadamente o aproximadamente 1:5, aproximadamente 1, 5:1 y aproximadamente 1:2, o aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1:2, o es o es aproximadamente 1, 1.

6. El método de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde dicha relación deseada es de aproximadamente 1:1.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en donde dicha combinación se realiza en el sistema cerrado.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 4-7, en donde el método genera así una composición de salida que comprende las células T CD4+ y CD8+ en la proporción deseada.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 -8, en donde las células enriquecedoras en la primera y/o segunda selección comprenden una selección basada en inmunoafinidad.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la primera selección y la segunda selección se llevan a cabo en recipientes de separación separados, que están conectados operativamente.

11. El método de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde la selección basada en inmunoafinidad en la primera y/o segunda selección comprende:

poner en contacto las células con un anticuerpo inmovilizado o unido a una matriz de cromatografía de afinidad, dicho anticuerpo capaz de unirse específicamente a un marcador de superficie celular para efectuar una selección positiva o negativa de células CD4+ o CD8+; y recolectar células de la matriz de cromatografía de afinidad enriquecida para las células CD4+ o las células CD8+.

12. El método de la reivindicación 11, en donde:

el anticuerpo comprende uno o más pares de unión capaces de formar un enlace reversible con un reactivo de unión inmovilizado en la matriz de cromatografía de afinidad, por lo que el anticuerpo se une reversiblemente a dicha matriz de cromatografía de afinidad durante dicho contacto; y las células que expresan un marcador de la superficie celular específicamente unido por el anticuerpo en dicha matriz de cromatografía de afinidad pueden recogerse de la matriz al interrumpir la unión reversible entre el reactivo de unión y el par de unión.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde el enriquecimiento para las células CD4+ comprende una selección positiva basada en la expresión superficial de CD4 y/o el enriquecimiento para las células CD8+ comprende una selección positiva basada en la expresión superficial de CD8.

14. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde una de la primera y segunda selecciones que comprende enriquecer para las células CD8+ comprende además enriquecer para células T (Tcm) de memoria central y/o enriquecer para células que expresan un marcador seleccionado de entre CD28, CD62L, CCR7, CD127 y CD27.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde la muestra se obtiene de un sujeto.

16. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde la muestra es una muestra de sangre o derivada de sangre, una muestra de glóbulos blancos, una muestra de aféresis, una muestra de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) o una muestra de leucoféresis.

17. El método de las reivindicaciones 2-16, en donde la condición estimulante:

comprende un agente capaz de activar uno o más dominios de señalización intracelular de uno o más componentes de un complejo TCR; y/o

comprende la presencia de un anticuerpo anti-CD3, un anticuerpo anti-CD28, un anticuerpo anti-4-1BB y/o una citocina.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2-17, en donde:

el receptor de antígeno genéticamente modificado comprende un receptor de células T (TCR) o un receptor de antígeno funcional no TCR; o el receptor de antígeno genéticamente modificado comprende un receptor de antígeno quimérico (CAR) .