Prevención de la reducción de enlaces disulfuro durante la producción recombinante de polipéptidos.

Un método para la prevención de la reducción de un enlace disulfuro en un polipéptido expresado en una célula hospedadora recombinante durante el procesamiento después de la fermentación,

que comprende, después de la fermentación, complementar el líquido de cultivo celular (LCC) prerecogido o el líquido de cultivo celular recogido (LCCR) de dicha célula hospedadora recombinante con un inhibidor de tiorredoxina, en donde dicho inhibidor de tiorredoxina es:

(i) un inhibidor directo de tiorredoxina;

(ii) un inhibidor específico de tiorredoxina reductasa;

(iii) sulfato cúprico;

(a) añadido en una concentración entre aproximadamente 5 μM y aproximadamente 100 μM;

(b) añadido en una concentración entre aproximadamente 10 μM a aproximadamente 80 μM;

(c) añadido en una concentración entre aproximadamente 15 μM y aproximadamente 50 μM; o (d) añadido a una concentración de al menos aproximadamente dos veces la concentración de tiorredoxina en dicho líquido de cultivo prerecogido o recogido.

(iv) un inhibidor de G6PD, seleccionado del grupo que consiste en piridoxal 5'-fosfato, 1 fluor-2,4 dinitrobenceno, deshidroepiandrosterona (DHEA) y epiandrosterona (EA);

(v) un inhibidor de la actividad de hexocinasa, inhibidor que es (a) un quelante de iones metálicos; o (b) se selecciona del grupo constituido por sorbosa-1-fosfato, polifosfatos, 6-desoxi-6-fluoroglucosa, 2-C-hidroximetilglucosa, xilosa y lixosa;

(vi) un anticuerpo que se une específicamente a una tiorredoxina reductasa; o

(vii) una medida que indirectamente da como resultado la inhibición de la actividad de la tiorredoxina, cuya medida es la inyección de aire en el líquido de cultivo recogido de dicha célula hospedadora recombinante.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2008/069395.

Solicitante: GENENTECH, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1 DNA WAY SOUTH SAN FRANCISCO, CA 94080 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: WONG, RITA, L., KAO,YUNG-HSIANG, LAIRD,MICHAEL W, SCHMIDT,MELODY TREXLER, HEWITT,DANIEL P.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K1/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Procedimientos generales de preparación de péptidos.
  • C07K14/00 C07K […] › Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados.

PDF original: ES-2655474_T3.pdf

 

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