Métodos y sistemas para el enriquecimiento de secuencias basadas en solución y análisis de regiones genómicas.

Un método para reducir la complejidad genética de una población de moléculas de ácido nucleico,

dicho método comprende los pasos de:

a) exponer moléculas de ácido nucleico genómico desnaturalizado y fragmentado de dicha población a múltiples y diferentes sondas de oligonucleótidos bajo condiciones hibridantes en solución, seguido por la unión de complejos de moléculas hibridadas a un soporte sólido siendo una población de cuentas para capturar las moléculas de ácidos nucleicos que hibridan específicamente a dichas sondas,

en el que dichas moléculas de ácido nucleico desnaturalizado y fragmentado tienen un tamaño medio de entre alrededor de 100 a alrededor de 1000 residuos de nucleótidos, preferiblemente entre alrededor de 250 a alrededor de 800 residuos de nucleótidos, y más preferiblemente entre alrededor de 400 a alrededor de 600 residuos de nucleótidos, y

en el que dichas sondas están dirigidas a secuencias en el mismo fragmento que, pero separadas de la secuencia diana actual, y

b) separar los ácidos nucleicos no hibridados y los hibridados de forma inespecífica de las moléculas capturadas;

c) eluir las moléculas capturadas del soporte sólido, y

d) repetir opcionalmente los pasos (a) a (c) durante al menos un ciclo adicional con las moléculas capturadas eluidas,

en el que la distribución de las moléculas de ácido nucleico capturadas está normalizado mediante 1) La igualación del rendimiento de hibridación a las múltiples, diferentes sondas de oligonucleótidos ajustando la longitud de la sonda, temperatura de fusión y/o secuencia; e

2) igualando el rendimiento de hibridación ajustando la cantidad de múltiples, diferentes sondas de oligonucleótidos; y/o

3) realizando el paso (d) utilizando las mismas cantidades de las múltiples, diferentes sondas de oligonucleótidos, de forma que todas las sondas de oligonucleótidos están saturadas por las moléculas de ácidos nucleicos hibridadas.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E12184423.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.

Inventor/es: ALBERT,THOMAS, RODESCH,MATTHEW.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2633567_T3.pdf

 

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