Detección de variantes diana usando un marcador fluorescente y un extintor soluble.
Procedimiento para detectar la presencia o ausencia de una variante del ácido nucleico diana en una muestra,
en el que puede producirse un ácido nucleico diana en al menos dos variantes, comprendiendo el procedimiento (a) proporcionar al menos un oligonucleótido marcado que comprende un primer marcador, comprendiendo dicho primer marcador al menos un resto emisor de luz y en el que al menos una subsecuencia del oligonucleótido marcado es suficientemente complementaria de al menos una subsecuencia del ácido nucleico diana, de tal manera que el oligonucleótido marcado hibrida con el ácido nucleico diana en una condición seleccionada;
(b) proporcionar al menos un modificador soluble de la emisión de luz, que, cuando el modificador se une de forma no covalente al ADN bicatenario que incorpora el oligonucleótido marcado, extingue la emisión de luz del primer marcador y no extingue significativamente la emisión de luz del primer marcador en presencia del modificador soluble de la emisión de luz cuando el oligonucleótido marcado es monocatenario;
(c) amplificar el ácido nucleico diana en la muestra en presencia del oligonucleótido marcado y del modificador soluble de la emisión de luz en una reacción de amplificación en la condición seleccionada, de tal manera que el oligonucleótido marcado se extienda para producir un primer amplicón marcado bicatenario que incorpore el oligonucleótido marcado, en el que el primer amplicón marcado bicatenario tenga una temperatura de fusión diferente dependiendo de cuál de las al menos dos variantes del ácido nucleico diana se amplifican;
(d) detectar la temperatura de fusión del amplicón marcado bicatenario disociado en dos hebras individuales monitorizando la señal del marcador con una temperatura cambiante; y
(e) correlacionar la temperatura de fusión del amplicón marcado bicatenario con la presencia de una de las al menos dos variantes diana, detectando de este modo la presencia o ausencia de una variante del ácido nucleico diana en una muestra.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/006688.
Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.
Nacionalidad solicitante: Suiza.
Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.
Inventor/es: WILL, STEPHEN GORDON, Gupta,Amar P, GEYER,LAURA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2629460_T3.pdf
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