Cebadores con fosfato y base modificados en PCR específica de alelo.
Un procedimiento de amplificación específica de alelo de una variante de una secuencia diana,
existiendo la diana en forma de varias secuencias variantes, comprendiendo el procedimiento:
(a) hibridar un primer oligonucleótido y un segundo oligonucleótido con al menos una variante de la secuencia diana; en el que el primer oligonucleótido es al menos parcialmente complementario de una o más variantes de la secuencia diana y el segundo oligonucleótido es al menos parcialmente complementario de una o más variantes de la secuencia diana y tiene al menos un nucleótido selectivo complementario de una única variante de la secuencia diana; en el que dicho segundo oligonucleótido comprende tanto un nucleótido con una base modificada covalentemente en el grupo amino exocíclico como un fosfato modificado que tiene una estructura:**Fórmula**
en la que A y B representan una cadena de nucleótidos, D es OH o CH3 y Acc es un aceptor de electrones o un aceptor de electrones sustituido con un residuo R en el que R es un sustituyente orgánico, en la que Acc se selecciona del grupo que consiste en CN, SO2-R', en el que R' comprende al menos un alquilo aminosustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heterociclo opcionalmente sustituido y un heterociclo N+ de seis miembros con al menos un átomo de N alquilado en posición orto o para, estando dicho heterociclo seleccionado del grupo que consiste en piridinio, pirimidinio y quinolinio;
(b) proporcionar condiciones adecuadas para la extensión de oligonucleótidos por una polimerasa de ácidos nucleicos;
(c) extender dicho primer oligonucleótido y dicho segundo oligonucleótido por dicha polimerasa de ácidos nucleicos, en el que dicha polimerasa de ácidos nucleicos es capaz de extender dicho segundo oligonucleótido eficientemente cuando dicho oligonucleótido hibrida con una variante de la secuencia diana que es complementaria de al menos dicho nucleótido selectivo y sustancialmente menos eficientemente cuando dicho segundo oligonucleótido hibrida con una variante de la secuencia diana que no es complementaria de al menos dicho nucleótido selectivo.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2013/076148.
Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.
Nacionalidad solicitante: Suiza.
Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.
Inventor/es: HEINDL, DIETER, KESSLER,DIRK, SCHOENBRUNNER,NANCY, TSAN,ALISON, FROEHNER,STEFANIE.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2627523_T3.pdf
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