Mejoras en un ensayo cuantitativo de protección contra la nucleasa (qNPA) y secuenciación (qNPS).
Un procedimiento de determinación de una secuencia de al menos una molécula de ácido nucleico diana en una muestra,
que comprende:
la puesta en contacto de la muestra con al menos una sonda de protección contra la nucleasa flanqueada (NPPF) en condiciones suficientes para que la NPPF se una específicamente a la molécula de ácido nucleico diana,
donde la NPPF comprende:
un extremo 5' y un extremo 3',
una secuencia complementaria a una región de la molécula de ácido nucleico diana, que permite una unión específica entre la NPPF y la molécula de ácido nucleico diana,
una secuencia flanqueante situada en 5', 3' o en ambos, con respecto a la secuencia complementaria a la molécula de ácido nucleico diana, donde la secuencia flanqueante comprende al menos 12 nucleótidos contiguos no presentes en una molécula de ácido nucleico presente en la muestra, que proporciona una secuencia de amplificación universal, y donde la secuencia flanqueante es complementaria a al menos una parte de un cebador de amplificación;
la puesta en contacto de la muestra con una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia complementaria a la secuencia flanqueante (CFS) en condiciones suficientes para que la secuencia flanqueante se una específicamente a la CFS;
la puesta en contacto de la muestra con una nucleasa específica para moléculas de ácidos nucleicos monocatenarias en condiciones suficientes para eliminar las moléculas de ácidos nucleicos no unidas, generando así una muestra digerida que comprende NPPF hibridadas con la molécula de ácido nucleico diana y con la o las CFS;
la amplificación de NPPF en la muestra digerida con el cebador de amplificación, generando así amplicones de NPPF; y la secuenciación de al menos una parte de los amplicones de NPPF, determinando así la secuencia de la al menos una molécula de ácido nucleico diana en la muestra.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/035260.
Solicitante: HTG Molecular Diagnostics, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3430 E. Global Loop Tuscon, AZ 85706 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: SELIGMANN, BRUCE, THOMPSON,DEBRAH, VASICEK,TOM, GORDON,DEBRA A.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2597032_T3.pdf
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