PCR asimétrica junto con caracterización post-PCR para la identificación de ácidos nucleicos.

Un método para clasificar, identificar, cuantificar y/o genotipificar una o más dianas de ácido nucleico en una muestra,

comprendiendo el método:

a) realizar una PCR cinética asimétrica en una mezcla de reacción que contiene una o más sondas 5'- nucleasa marcadas y una o más sondas de hibridación marcadas en la que dichas una o más sondas 5'- nucleasa y dichas una o más sondas de hibridación pueden ser la(s) misma(s) sonda(s) o diferentes sondas en secuencia;

b) hacer un seguimiento de las señales fluorescentes generadas a partir de la una o más sondas 5'-nucleasa marcadas para crear una o más curvas de crecimiento a partir de la PCR cinética para calcular un valor Ct (umbral de ciclo) y de ese modo determinar el número de copia, el genotipo o la identidad de diana;

c) modificar la temperatura de la mezcla de reacción después de la PCR cinética para causar un cambio en la asociación entre la una o más sondas de hibridación marcadas y la una o más dianas de ácido nucleico;

d) hacer un seguimiento de una o más señales fluorescentes generadas a partir de la una o más sondas de hibridación marcadas unidas a la cadena en exceso generada en la PCR cinética asimétrica produciendo de ese modo una curva de fusión o curva de hibridación;

e) correlacionar la curva de fusión o la curva de hibridación de la etapa d) con una curva de fusión o hibridación de una sonda completamente complementaria de una o más dianas de ácido nucleico conocidas, por tanto, identificar la una o más dianas de ácido nucleico en la muestra,

en el que la PCR cinética asimétrica comprende un primer cebador y al menos un segundo cebador, en el que la cantidad del primer cebador es mayor que la cantidad del segundo cebador y en el que la sonda de hibridación está presente en mayor cantidad que el segundo cebador.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E06013329.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Inventor/es: WILL, STEPHEN GORDON, NEWTON,NICOLAS.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • C12Q1/70 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen virus o bacteriófagos.

PDF original: ES-2605016_T3.pdf

 

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