Método para separar y purificar lactoferrina humana recombinada a partir de semillas de arroz.

Un método de cromatografía para separar y purificar la lactoferrina humana recombinante a partir de semillas de arroz transgénico,

comprende secuencialmente las siguientes etapas de:

1) extraer lactoferrina humana recombinante a partir de semillas de arroz transgénico, para obtener el extracto en bruto que contiene lactoferrina humana recombinante;

2) someter el extracto en bruto que contiene lactoferrina humana recombinante a cromatografía de intercambio catiónico para realizar la purificación primaria, para obtener una fracción de elución que contiene lactoferrina humana recombinante; donde:

la cromatografía de intercambio catiónico se realiza en una resina de intercambio catiónico débil CM sephorose FF, la etapa de cromatografía comprende:

2A) equilibrar la columna de cromatografía con 5-15 veces el volumen de columna de tampón que contiene Tris 10-25 mM, NaAC 10-25 mM, NaCl 0-250 mM, pH 6,0-7,5, a un caudal de 50-200 cm/h;

2B) usar el extracto en bruto de la etapa 1) como una muestra de carga, donde la muestra tiene una conductancia de 2-25 ms/cm, y un pH de 6,0-7,5; eluir las impurezas con un tampón de lavado de impurezas, conteniendo el tampón de lavado de impurezas NaH2PO4 3-10 mM, Na2HPO4 3-10 mM, NaCl 200-300 mM, pH 6,5-8,0, y siendo el caudal de elución de 50-200 cm/h;

2C) eluir la muestra con un tampón de lavado que contenía NaH2PO4 3-10 mM, Na2HPO4 3-10 mM, NaCl 400-650 mM, pH 6,5-8,0 a un caudal de 50-200 cm/h, para obtener una fracción de elución;

3) recoger la fracción de elución de la etapa 2), para obtener la solución que contenía lactoferrina humana recombinante.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2014/074539.

Solicitante: Wuhan Healthgen Biotechnology Corp.

Inventor/es: Yang,Daichang, SHI,JINGNI, OU,JIQUAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K1/18 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › Cromatografía de intercambio iónico.
  • C07K1/34 C07K 1/00 […] › por filtración, ultrafiltración u ósmosis inversa.
  • C07K1/36 C07K 1/00 […] › por una combinación de varios procesos de diferentes tipos.
  • C07K14/79 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Transferrinas, p. ej. lactoferrinas, ovotransferrinas.

PDF original: ES-2668719_T3.pdf

 

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