Método para cribar y cuantificar diversas actividades enzimáticas usando un sistema genético de cribado de enzimas.
Un método para cribar una actividad enzimática buscada para la producción de un compuesto fenólico usando un circuito genético artificial,
comprendiendo el método las etapas de:
(a) proporcionar un circuito genético artificial para detectar un compuesto fenólico, comprendiendo el circuito genético artificial (i) un gen que codifica una proteína reguladora, (ii) al menos un gen indicador seleccionado del grupo que consiste en genes que codifican proteínas fluorescentes y genes de resistencia a antibióticos, (iii) una región reguladora de la expresión génica que consiste en un promotor que regula la expresión de la proteína reguladora, una región a la que se une la proteína reguladora para inducir la expresión de un gen indicador aguas abajo y un promotor que regula la expresión del gen indicador y (iv) un RBS (sitio de unión ribosómica) para facilitar la expresión del gen indicador y un terminador de la transcripción,
en donde la proteína reguladora de (i) reconoce un compuesto fenólico para inducir la unión de la proteína reguladora a la región reguladora de la expresión génica y activar un promotor del gen indicador de modo que se pueda expresar el gen indicador aguas abajo;
(b) proporcionar una clonoteca o genoteca que contiene un gen que codifica la enzima que se va a cribar;
(c) introducir la clonoteca o genoteca y el circuito génico artificial para detectar el compuesto fenólico en microorganismos hospedadores para preparar microorganismos recombinantes;
(d) tratar los microorganismos recombinantes con un compuesto de descarga de fenol capaz de liberar un compuesto fenólico mediante una reacción enzimática de la enzima buscada que se va a cribar; y
(e) detectar la actividad de la proteína indicadora cuya expresión era inducida por la proteína reguladora que identifica el compuesto fenólico liberado por la reacción enzimática y la unión de la proteína reguladora a la región reguladora de la expresión génica.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/KR2010/003674.
Solicitante: KOREA RESEARCH INSTITUTE OF BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY.
Nacionalidad solicitante: República de Corea.
Dirección: 52, Eoeun-dong Yuseong-gu Daejeon 305-333 REPUBLICA DE COREA.
Inventor/es: LEE,SEUNG GOO, RHA,EUGENE, CHOI,SU LIM, SONG,JAE JUN, CHOI,JONG HYUN, KIM,HEE SIK.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2608691_T3.pdf
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