Ensayo cuantitativo de amplificación y fusión multiplex de ácidos nucleicos.

Método para la amplificación por PCR en tiempo real, detección y cuantificación multiplex simultáneas de uno o más ácidos nucleicos diana en un único recipiente para muestras,

que comprende las etapas siguientes:

(a) poner en contacto una muestra, que se sospecha que contiene uno o más ácidos nucleicos diana, con por lo menos un juego de sondas oligonucleótidas, estando marcada cada sonda oligonucleótida en el juego con la misma o mismas fracciones informadoras, en el que cada una de dichas sondas oligonucleótidas marcadas

i. es suficientemente complementaria respecto a por lo menos una subsecuencia de por lo menos un ácido nucleico diana,

ii. es capaz de unirse al ácido nucleico diana correspondiente con una temperatura de fusión diferente de las temperaturas de fusión de las otras sondas oligonucleótidas marcadas en el mismo juego,

(b) amplificar los ácidos nucleicos diana en la muestra en un ciclo de una reacción de amplificación que incluye un intervalo de cambios de temperatura, en el que dichas sondas oligonucleótidas marcadas se disocia de los híbridos con los ácidos nucleicos diana correspondientes,

(c) detectar la emisión lumínica de dichas fracciones informadas en por lo menos una parte de dicho intervalo de cambio de temperatura, y

(d) representar la primera derivada de dicha emisión lumínica detectada en la etapa (c) en por lo menos dicha parte del intervalo de cambio de temperatura,

(e) determinar el valor del máximo de dicha derivada representada en la etapa (d),

(f) repetir las etapas (b) a (e) múltiples veces, y

(g) representar los valores de máximo de dicha derivada determinada en la etapa (e) frente al número de ciclos o el número de repeticiones de las etapas (b) a (e), y determinar el número de ciclos o el número de repeticiones a las que se alcanza un valor umbral predeterminado del valor determinado en la etapa (e),

cuantificando de esta manera la cantidad relativa de dicho ácido nucleico diana,

en el que dicha reacción de amplificación por PCR en tiempo real, detección y cuantificación multiplex simultáneas comprenden la detección de por lo menos dos secuencias diana diferentes, comprendiendo cualquier amplificación la utilización de parejas separadas de cebadores de amplificación para cada secuencia diana y la detección utilizando una sonda oligonucleótida separada para cada secuencia diana o la amplificación utilizando una pareja de cebadores de amplificación y la detección utilizando más de una sonda oligonucleótida para cada secuencia amplificada.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E10002350.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Inventor/es: HOLCOMB,CHERIE, HIGUCHI,RUSSELL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2589102_T3.pdf

 

Patentes similares o relacionadas:

Método para determinar la respuesta del cáncer a tratamientos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico, del 8 de Mayo de 2019, de THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION: Uso de cebadores para amplificar un ácido nucleico objetivo en el dominio de la quinasa del gen erbB1, en un método que predice la probabilidad de efectividad de un inhibidor […]

Método para determinar la respuesta del cáncer a tratamientos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico, del 8 de Mayo de 2019, de THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION: Una proteína del EGFR que comprende una o más variaciones o mutaciones que confieren capacidad de respuesta a la terapia con inhibidores de la tirosina […]

Método para determinar la respuesta del cáncer a tratamientos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico, del 8 de Mayo de 2019, de THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION: Un método para determinar la probabilidad de efectividad de un inhibidor de tirosina quinasa del EGFR para tratar cáncer en un paciente afectado con cáncer, que comprende: […]

Aptámeros contra PDGF y VEGF y su utilización en el tratamiento de afecciones mediadas por PDGF y VEGF, del 8 de Mayo de 2019, de Somalogic, Inc: Un aptámero que comprende la secuencia: (A) 5-'ACALnZGZAZGLmZLZ-3' (SEQ ID NO 512). en la que; el aptámero se une a PDGF; cada Z es, independientemente, una pirimidina […]

Detección y cuantificación de ácidos nucleicos para valorar la biomasa microbiana en los defectos del papel y en los fieltros de máquina, del 8 de Mayo de 2019, de NALCO COMPANY: Un método para identificar una infección por organismos formadores de biopelícula en un procedimiento de fabricación de papel, en donde el método […]

Procedimientos de tratamiento del esperma para la clasificación del sexo, del 8 de Mayo de 2019, de INGURAN, LLC: Un procedimiento de clasificación de esperma que comprende las etapas de: ajustar la concentración de una muestra de esperma a un intervalo de concentración predeterminado […]

Método para determinar la respuesta del cáncer a tratamientos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico, del 8 de Mayo de 2019, de THE GENERAL HOSPITAL CORPORATION: Una sonda seleccionada de: A. una sonda capaz de distinguir la presencia de una variación o variaciones particulares en el dominio de la quinasa del gen erbB1 de un paciente […]

Composiciones y procedimientos de extracción de ácidos nucleicos, del 8 de Mayo de 2019, de Abbott Molecular Inc: Un procedimiento de extracción de ácido nucleico de material de origen celular, comprendiendo dicho procedimiento: a) proporcionar i) material de origen […]

Otras patentes de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG