Uso de anticuerpos anti-proteína PLAC1 como biomarcadores de infertilidad.

Uso de anticuerpos contra la proteína PLAC1 como biomarcadores de infertilidad para mujeres y hembras de animal que expresan dicha proteína.

Uso de anticuerpos anti-proteína PLACI como biomarcadores de infertilidad

La presente invención se refiere al uso de anticuerpos contra la proteína PLACI como biomarcadores de infertilidad. Se describen un kit diagnóstico para la detección de la respuesta inmune contra PLACI y el uso de la proteína PLACI en campos terapéuticos y anticonceptivos.

En particular, se describe el uso de anticuerpos contra la proteína PLACI como biomarcadores de infertilidad, un kit diagnóstico para la detección de la respuesta inmune contra PLACI y el uso de la proteína PLACI en forma tolerogénica o inmunogénica para terapia de infertilidad o como un anticonceptivo o un medio de interceptación poscoital, respectivamente.

La esterilidad es una patología de constante crecimiento con una incidencia del 3,5% en 1965 al 9,2% en 1982 (Bulletin WHO 27; 85, 733-82) y que afecta actualmente en Italia al 1-15% de las parejas fértiles (es decir, 5.-7. parejas de acuerdo con los datos del Istat del 2).

Entre las diversas razones de la esterilidad, la esterilidad idiopática aún cubre un sustancial porcentaje (aproximadamente el 15%) de los diagnósticos realizados. De hecho, sólo en esta categoría no existe hoy en día ninguna causa conocida para los déficits repetidos de implantes de embriones de buena calidad, transferidos a los úteros de pacientes jóvenes y sin causa evidente de esterilidad. Dado el hecho de que en el campo de la esterilidad Idiopática no se ha detectado ningún mecanismo biológico patógeno y, en consecuencia, no se dispone de ensayos diagnósticos, queda un diagnóstico de exclusión (y que se va a realizar después de la exclusión de las causas ya conocidas). El hallazgo de un biomarcador y un mecanismo patógeno en esta categoría representa un notable paso de desarrollo desde el punto de vista diagnóstico y potencialmente terapéutico.

Por lo tanto, a la luz de lo anterior, es evidente la necesidad de proporcionar un método diagnóstico y una terapia para la esterilidad idiopática y el déficit de implantes de embriones en casos de esterilidad de otros orígenes.

Durante los últimos pocos años se ha identificado una serie de genes específicos de la placenta (Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 28; 24: 159-81) de importancia fundamental para el desarrollo normal de las funciones placentarias, aun cuando, hasta ahora, el número de genes identificados real y exclusivamente específicos de la placenta es muy

pequeño.

El gen PLACI (gen 1 específico de la PLACenta) es un gen específico de trofoblastos situado en un locus del cromosoma X, de acusada importancia para el desarrollo de la placenta (Mol. Reprod. Dev. 27; 74: 922-9). PLACI codifica una proteína superficial muy expresada en la placenta. En particular, la proteína PLACI se localiza a nivel del compartimento membranoso ¡ntracelular en la reglón apical del slncltlotrofoblasto y se expresa en la superficie de la membrana de las mlcrovellosidades de la placenta (Mol. Reprod. Dev. 27; 74: 922-9). Esta proteína ha sido también previamente Identificada en pacientes que adolecen de cáncer hepático (HCC) (Int. J. Cáncer 28; 122: 238-43). En un porcentaje de estos sujetos se ha demostrado también la presencia de anticuerpo ant¡-PLAC1, lo que demuestra las propiedades inmunogénlcas de la proteína y su capacidad para Inducir una respuesta de anticuerpos en dicho subconjunto de pacientes (Cáncer Immunlty 27; 6: 7-18).

Hasta ahora, en el campo obstétrico, en pacientes preeclámptlcos se ha detectado la presencia de mRNA de PLACI en embarazos caracterizados por daño en la placenta (Prenat. Diagn. 27; 27: 772-7), pero no hay datos bibliográficos acerca de la presencia de antl-PLAC1 ni/o datos de mRNA de PLACI en pacientes infértiles. Además, Fant et al. (Fant et al., Prenat. Diagn. 21; 3: 497-52) describen que PLACI provoca una respuesta de anticuerpos en algunos pacientes con cáncer, que promueve su supervivencia. También se discute un posible papel de PLACI como un biomarcador pronostlcador de complicaciones específicas en el embarazo, tal como la preeclampsia.

Los autores de la presente invención han hallado ahora por vez primera la presencia de anticuerpos contra la proteína PLACI en pacientes afectados por una esterilidad idiopática caracterizada por fallos repetidos en el Implante de embriones después de ciclos de IVF-ET. El nivel de anticuerpos ant¡-PLAC1 es acusadamente mayor que en los pacientes fértiles testigo. El gen PLACI es un gen específico de la placenta recién detectado que está unido al brazo largo del cromosoma X (Genomlcs 2 15; 68: 35-12).

Estudios de hibridación in situ previos con mRNA antlsentldo durante el proceso de embriogénesis murina demostró la expresión del gen PLACI de 7,5 a 14,5 días después de la fecundación, lo que da lugar a la opinión de que PLACI es un marcador del desarrollo de la placenta con un papel esencial en el desarrollo de la interfase materno- fetal (Genomics 2 15; 68: 35-12). Se ha detectado además que PLACI se expresa durante toda la gestación de 8 a 41 semanas y es constantemente específico de trofoblastos (Mol. Reprod. Dev. 22; 63: 43-6). Al ser una proteína inmunogénica (Cáncer Immunity 27; 6: 7-18) localizada en la superficie apical de las microvellosldades de los trofoblastos placentarios (Mol. Reprod. Dev. 27; 74: 922-9), los autores supusieron que la presencia de

anticuerpos anti-PLAC1 se podía asociar con condiciones de infertilidad que evitaban el proceso fisiológico de implante del embrión. Por consiguiente, se ha estudiado un subconjunto de pacientes afectados por esterilidad de tipo idiopático (Hum. Reprod. 1995; 1: 1246-71) y fallos repetidos en cuanto al implante de embriones después de ciclos de IVF-ET en el que se pudiera asociar la presencia de mayores niveles de anticuerpos anti-PLAC1 con problemas en el implante de embriones. Los resultados sustentan la hipótesis anteriormente citada. De hecho, el análisis estadístico demuestra que la concentración de anticuerpos anti-PLAC1 es notablemente mayor en pacientes estériles que en los testigos fértiles.

Es interesante poner énfasis en los datos clínicos del seguimiento llevado a cabo durante los años sucesivos sobre pacientes estériles reclutados. De hecho, de 5 pacientes con mayores niveles de anticuerpos anti-PLAC1 ninguna tuvo éxito en cuanto a quedar embarazada durante los meses sucesivos, ni espontáneamente ni después de ciclos repetidos de IVF-ET, y una resultó afectada por 2 abortos y un embarazo bioquímico (es decir, un embarazo sólo demostrado por un ensayo de BHCG positivo en ausencia de evidencia de saco de gestación). Por lo contrario, de 17 pacientes estériles con niveles no significativos de anticuerpos anti-PLAC1, 6 (35%) tuvieron éxito en cuanto a obtener un embarazo desarrollado en el curso del seguimiento.

Por lo tanto, dichos datos demuestran la presencia de anticuerpos contra el antígeno PLACI específico de la placenta en pacientes afectados por esterilidad de tipo idiopático con títulos notablemente mayores que los testigos fértiles sanos. Los datos del seguimiento clínico sugieren que la respuesta de anticuerpos tiene lugar en un subconjunto de pacientes infértiles y determina el pronóstico de reproducción de los mismos. Tampoco se puede excluir que se pueda provocar una respuesta de anticuerpos contra PLACI durante el embarazo que dé lugar a un daño en la placenta y se pueda correlacionar con patologías tales como preeclampsia o defectos del crecimiento fetal por insuficiencia de la placenta. En este contexto, la prueba podía haber sido llevada también a cabo para control del embarazo.

Se ha demostrado además la posibilidad de desarrollar una respuesta de anticuerpos contra PLACI como resultado de la administración de secuencias peptídicas de la proteína (epítopos antigénicos). Por lo tanto, es razonable argüir que se puede utilizar PLACI para inmunidad (o tolerancia) con un fin anticonceptivo o para que se induzca activamente una terapia para infertilidad.

Por lo tanto, un objeto específico de la presente invención es el empleo de anticuerpos contra la proteína PLACI como biomarcadores de Infertilidad, por ejemplo, de tipo idiopático, en mujeres y hembras de animal que expresan la proteína.

Son ejemplos de hembras de animal que expresan la proteína PLACI las hembras de primate (Pan troglodytes), las vacas (Sos taurus), las yeguas (Equus caballus), las cerdas (Sus scrofa), las ratonas (Mus musculus) y las hembras de rata (Rattus norvegicus).

La presente Invención se refiere además a un método para el diagnóstico in vitro de la Infertilidad, por ejemplo, de tipo idiopático, en mujeres y hembras de animal que expresan dicha proteína por detección de una respuesta inmune ant¡-PLAC1, respuesta Inmune... [Seguir leyendo]

1) Uso de anticuerpos contra la proteína PLACI como biomarcadores de infertilidad para mujeres y hembras de animal que expresan dicha proteína.

2) Uso según la reivindicación 1, en donde la infertilidad es idiopática.

3) Uso según la reivindicación 1, en donde los animales son seleccionados del grupo que consiste en primate,

bovino, equino, cerdo, ratón y rata.

4) Método para el diagnóstico in vitro de infertilidad para mujeres y hembras de animal que expresan dicha proteína, mediante la detección de una respuesta inmune anti-PLAC1, respuesta inmune que es seleccionada de entre respuesta mediada por células y respuesta de anticuerpos.

5) Método según la reivindicación 4, en donde la infertilidad es idiopática.

6) Método según la reivindicación 4, en donde los animales son seleccionados del grupo que consiste en primate, bovino, equino, cerdo, ratón y rata.