Terapia de combinación para trastornos de células B.

Un anticuerpo de unión a CD20 y un antagonista de BLyS como una combinación para uso en un método para aliviar un trastorno autoinmunitario regulado por células B,

comprendiendo el método administrar a un paciente que padece el trastorno una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo de unión a CD20 y del antagonista de BLyS.

Terapia de combinación para trastornos de células B Campo de la invención

La invención se refiere a nuevas terapias de combinación para el tratamiento de tumores malignos de células B así como trastornos autoinmunitarios

Antecedentes de la invención

Los linfocitos son una de varias poblaciones de glóbulos blancos; reconocen específicamente y responden a antígeno ajeno. Las tres clases principales de linfocitos son linfocitos B (células B), linfocitos T (células T) y células citolíticas naturales (NK). Los linfocitos B son las células responsables de la producción de anticuerpos y proporcionan inmunidad humoral. Los linfocitos B maduran dentro de la médula ósea y dejan la médula expresando un anticuerpo de unión a antígeno en su superficie celular. Cuando una célula B virgen se encuentra por primera vez con el antígeno para el que su anticuerpo unido a membrana es específico, la célula comienza a dividirse rápidamente y su descendencia se diferencia en células B de memoria y células efectoras denominadas "células plasmáticas". Las células B de memoria tienen una esperanza de vida más larga y continúan expresando un anticuerpo unido a membrana con la misma especificidad que la célula parental original. Las células plasmáticas no producen anticuerpos unido a membrana sino que producen en su lugar una forma secretada del anticuerpo. Los anticuerpos secretados son las moléculas efectoras principales de la inmunidad humoral.

El antígeno CD20 (también denominado antígeno de diferenciación restringido a linfocitos B humano, Bp35) es una proteína transmembrana hidrófoba con un peso molecular de aproximadamente 35 kD localizada en linfocitos pre-B y B maduros (Valentine et al. J. Biol. Chem. 264(19): 11282-11287 (1989); y Einfeld et al. EMBO J. 7(3): 711-717 (1988)). El antígeno también se expresa en más del 90 % de linfomas no de Hodgkin (NHL) de células B (Anderson et al. Blood 63(6): 1424-1433 (1984)), pero no se encuentra en células madre hematopoyéticas, células pro-B, células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder et al. J. Immunol. 135(2): 973-979 (1985)). Se cree que CD20 regula una etapa o etapas tempranas en el proceso de activación para el inicio y diferenciación del ciclo celular (Tedder ef al., mencionado anteriormente) y posiblemente actúe como un canal de ión de calcio (Tedder etal. J. Cell. Biochem. 14D: 195 (1990)).

Dada la expresión de CD20 en linfomas de células B, este antígeno ha sido una diana terapéutica útil para tratar dichos linfomas. Hay más de 300.000 personas en los Estados Unidos con NHL de células B y se diagnostican cada año más de 56.000 nuevos casos. Por ejemplo, el anticuerpo rituximab (RITUXAN®) que es un anticuerpo monoclonal humano/muñno quimérico modificado por ingeniería genética dirigido contra el antígeno CD20 humano (disponible en el mercado de Genentech, Inc., South San Francisco, California, Estados Unidos) se usa para el tratamiento de pacientes con linfoma no de Hodgkin de células B, CD20 positivo, recidivante o refractario de grado bajo o folicular. Rituximab es el anticuerpo denominado "C2B8" en la Patente de Estados Unidos N2 5.736.137 presentada el 7 de abril de 1998 (Anderson et al.). El mecanismo in vitro de estudios de acción ha demostrado que RITUXAN® se une con el complemento humano y lisa líneas celulares B linfoides mediante citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) (Reff et al. Blood 83(2): 435-445 (1994)). Adicionalmente, tiene actividad significativa en ensayos para citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC). Los estudios preclínicos in vivo ha mostrado que RITUXAN® agota las células B de la sangre periférica, ganglios linfáticos y médula ósea de monos cynomolgus, supuestamente mediante procesos mediados por célula y complemento (CDC) (Reff et al. Blood 83(2): 435-445 (1994)). Otros anticuerpos anti-CD20 indicados para el tratamiento de NHL incluyen el anticuerpo murino Zevalinque se une con el radioisótopo. El ltño-90 (IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA), Bexxar que es otro anticuerpo completamente murino conjugado con 1-131 (Corixa, WA).

BLyS (también conocido como BAFF, TALL-1, THANK, TNFSF13B o zTNF4) es un miembro de la superfamilia del ligando TNF1 que es esencial para la supervivencia y maduración de las células B. La sobreexpresión de BLyS en ratones transgénicos conduce a hiperplasia de células B y desarrollo de enfermedad autoinmunitaria grave (Mackay, etal. (1999) J. Exp. Med. 190, 1697-1710; Gross, etal. (2000) Nature 404, 995-999; Khare, etal. (2000) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 97,3370-33752-4). Los niveles de BLyS están elevados en pacientes humanos con diversos trastornos autoinmunitarios, tales como lupus eñtematoso sistémico, artritis reumatoide y síndrome de Sjógren (Cheema, G. S, et al., (2001) Arthñtis Rheum. 44, 1313-1319; Groom, J., et al, (2002) J. Clin. Invest. 109, 59-68; Zhang, J., et al., (2001) J. Immunol. 166, 6-10). Además, los niveles de BLyS se correlacionan con la gravedad de la enfermedad, lo que sugiere que BLyS puede desempeñar un papel directo en la patogénesis de estas enfermedades. BLyS actúa en las células B uniéndose con tres miembros de la superfamilia del receptor de TNF, TACI, BCMA y BR3 (también conocido como BAFF-R) (Gross, etal., mencionado anteriormente; 8. Thompson, J. S., etal., (2001) Science 293, 2108-2111; Yan, M., etal., (2001) Curr. Biol. 11, 1547-1552; Yan, M etal., (2000) Nat. Immunol. 1, 37-41; Schiemann, B., etal., (2001) Science 293, 2111-2114). De los tres, solamente BR3 es específico para BLyS; los otros dos también se unen con el miembro de la familia de TNF relacionado, APRIL. La comparación de los fenotipos de BLyS y ratones con anulación del receptor o mutantes indica que la señalización a través de BR3 media en las funciones de supervivencia de células B de BLyS (Thompson, et al., mencionado anteriormente; Yan,

(2002), mencionado anteriormente; Schiemann, mencionado anteriormente). Por el contrario, TACI parece actuar como un receptor inhibidor (Yan, M., (2001) Nat. Immunol. 2, 638-643), mientras que el papel de BCMA no está claro (Schiemann, mencionado anteriormente).

BR3 es una proteína transmembrana de tipo III de 184 restos expresada en la superficie de células B (Thompson, et al., mencionado anteriormente; Yan, (2002), mencionado anteriormente). La región intracelular no porta ninguna similitud de secuencia con dominios estructurales conocidos o motivos de interacción proteína-proteína. No obstante, la señalización inducida por BLyS a través de BR3 da como resultado el procesamiento del factor de transcripción NF-B2/p100 a p52 (Claudio, E, et al., (2002) Nat. Immunol. 3, 958-965; Kayagaki, N., et al., (2002) Immunity 10,515-524). El dominio extracelular (ECD) de BR3 también es divergente. Los miembros de la familia de TNFR se caracterizan habitualmente por la presencia de múltiples dominios ricos en cisterna (CRD) en su región extracelular; cada CRD está compuesto normalmente de ~40 restos estabilizados por seis cisternas en tres enlaces disulfuro. Los miembros convencionales de esta familia realizan contactos con el ligando a través de dos CRD que interaccionan con dos zonas distintas en la superficie del ligando (revisado en Bodmer, J.-L., et al., (2002) Trends Biochem. Sci. 27, 19-26). Sin embargo, el ECD de BR3 contiene solamente cuatro restos de cisterna, capaces de formar un CRD parcial como máximo, planteando la cuestión de cómo un receptor tan pequeño transmite unión de ligando de alta afinidad.

Previamente se ha mostrado que el dominio de unión de BLyS de BR3 reside dentro una región central de 26 restos (Kayagaki, et al., mencionado anteriormente). Seis restos de BR3, cuando se estructuran dentro un péptido en horquilla (5 (bhpBR3), fueron suficientes para conferir unión a BLyS y bloquear la señalización mediada por BR3. Otros han presentado polipéptidos que se ha propuesto que interaccionan con BLyS (por ejemplo, documentos WO 02/24909, WO 03/035846, WO 02/16312, W002/02641).

Sumario de la invención

Se desvela en el presente documento un método para agotar células B de una población mixta de células que comprende poner en contacto la población mixta de células con un antagonista de BLyS y un anticuerpo de unión a CD20. Este método es útil por ejemplo, en un ensayo in vitro comercial para agotar eficaz y selectivamente células B de una población mixta de células, poniendo en contacto las células B con un antagonista de BLyS y un anticuerpo anti-CD20. Otro aspecto del método precedente de agotamiento de células B es agotar específicamente ciertos subconjuntos de células B tales como células B de un centro germinal y células B de zona marginal. Las células B de centro germinal pueden estar en el bazo y placas de Peyer.... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo de unión a CD20 y un antagonista de BLyS como una combinación para uso en un método para aliviar un trastorno autoinmunitario regulado por células B, comprendiendo el método administrar a un paciente que padece el trastorno una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo de unión a CD20 y del antagonista de BLyS.

2. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS como una combinación para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el antagonista de BLyS es un anticuerpo, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo anti-BLyS o un anticuerpo anti-BR3; una inmunoadhesina de BR3, tal como una inmunoadhesina de BR3 que comprende el dominio extracelular de BR3; o un polipéptido que tiene la secuencia de SEC ID N2: 5, SEC ID N2: 6, SEC ID N2: 7, SEC ID N2: 8, SEC ID N2: 9 o SEC ID N2: 10.

3. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la inmunoadhesina de BR3 es BR3-Fc de SEC ID N2: 2.

4. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el antagonista de BLyS bloquea parcial o completamente la interacción de BR3 con un polipéptido de BLyS.

5. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo de unión a CD20 es un anticuerpo humanizado.

6. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo de unión a CD20 es un anticuerpo quimérico que comprende las regiones variables de un anticuerpo murino fusionado con las regiones constantes de un anticuerpo humano.

7. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo quimérico es rituximab o hu2H7v.16 que tienen las secuencias de cadena ligera y pesada de SEC ID N2: 15 y SEC ID N2: 16, respectivamente.

8. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el método el anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS se administran simultáneamente.

9 El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el método el anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS se administran secuencialmente.

10. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el método el antagonista de BLyS se administra antes que el anticuerpo de unión a CD20.

11. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el trastorno autoinmunitario se selecciona del grupo que consiste en lupus eritomatoso sistémico (SLE), lupus, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, enfermedad de Wegener, enfermedad inflamatoria del intestino, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), púrpura trombocitopénica trombótica (TTP), trombocitopenia autoinmunitaria, esclerosis múltiple, psoriasis, nefropatía de IgA, polineuropatías de IgM, miastenia grave, vasculitis, diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjorgen y glomerulonefritis.

12. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde en el método el BR3-Fc se administra a una dosificación de aproximadamente 2-5 mg/kg y se administra rituximab a una dosificación de aproximadamente 2,5-10 mg/kg.

13. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la administración del antagonista de BLyS y el anticuerpo de unión a CD20 produce un efecto sinérgico para agotar las células B.

14. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde en el método el antagonista de BLyS y el anticuerpo de unión a CD20 se administran junto con terapia usando un fármaco seleccionado de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), glucocorticoide, prednisona y fármaco antirreumático modificador de enfermedad (ARME).

15. El anticuerpo de unión a CD20 y el antagonista de BLyS para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde las células B de zona marginal o de centro germinal del paciente están agotadas.