Receptor de eritropoyetina protector de tejido (NEPOR) y métodos de uso.

Un método de determinar si un paciente con cáncer es adecuado para terapia con eritropoyetina (EPO),

que comprende

(A) determinar el nivel de expresión de EPH-B4 en una muestra de tejido aislada de dicho paciente; y

(B) correlacionar una presencia de expresión de EPH-B4 con una respuesta fisiológica negativa a terapia con EPO.

Receptor de eritropoyetina protector de tejido (NEPOR) y métodos de uso Campo Técnico

La presente descripción proporciona un complejo de la proteína del receptor de unión de eritropoyetina (EPO) protector de tejido novedoso, denominado aquí como NEPOR. Se propone que el NEPOR media las propiedades protectoras del tejido de EPO. Por lo tanto, la presencia de NEPOR en un tumor permite que el EPO incida en la supervivencia de las células asociadas mejorando de esta manera la evolución del tumor y afectando negativamente la supervivencia del paciente. En esta circunstancia, la presencia de NEPOR representa un bioetiquetador de pronóstico para resultados del paciente más pobres, aunque también representa una única proteína objetivo anti- neoplásica clínicamente tratable, de forma similar, el NEPOR media la actividad neuroprotectora de EPO y así representa un objetivo único para el tratamiento de enfermedades asociadas con lesiones neuronales, tales como apoplejía.

En el primer caso, la presente descripción proporciona un método para evaluar un tumor para expresión de esta proteína. La presente descripción proporciona adicionalmente un método para estratificar pacientes que tienen un tumor que es adecuado (es decir no está presente NEPOR) o no adecuado (es decir, está presente NEPOR) para tratamiento de EPO. El método descrito comprende: (a) aislar una muestra de tejido de un individuo quien recibe o es un candidato para recibir eritropoyetina, (b) determinar el nivel de expresión de los genes NEPOR (mARN) y/o la presencia del producto de gen NEPOR (proteína) a partir del tejido aislado, y (c) correlacionar la presencia de un producto de expresión génico NEPOR o la presencia de la proteína NEPOR con una respuesta fisiológica para el tratamiento con eritropoyetina. En un segundo caso, la presente descripción proporciona un método para tratar pacientes con tumores positivos a NEPOR. Adicionalmente, la presente descripción proporciona un método para tratar apoplejía. Finalmente, la presente descripción proporciona un método para detectar compuestos terapéuticos dirigidos a NEPOR (compuestos terapéuticos antagonistas para tratar cáncer, y compuestos terapéuticos agonistas para el tratamiento de daño de tejido asociado con hipoxia, tal como apoplejía).

Antecedentes

Aprobado por la FDA en 1993 para el tratamiento de anemia, la eritropoyetina (EPO) es una hormona de glicoproteína de 193 aminoácidos, producida por los riñones para regular la producción de glóbulos rojos (RBC); un proceso comúnmente denominado eritropoyesis. La EPO se identifica originalmente como una citoquina que promueve la supervivencia y diferenciación del progenitor eritrocito, pero también ha mostrado que posee funciones neuroprotectoras, particularmente en respuesta a lesión isquémica en el sistema nervioso central, (SNC). El uso clínico de EPO ha sido prevalente en el tratamiento de pacientes con cáncer anémico, mientras que los estudios en curso exploran el potencial de la EPO en el tratamiento de enfermedades neurológicas (por ejemplo apoplejía). No obstante, estudios clínicos recientes en pacientes con cáncer han empezado a revelar eventos adversos altamente preocupantes, que sugieren que la administración de la EPO humano recombinante (rHuEPO) puede afectar adversamente la supervivencia general del paciente. Subsiste una necesidad urgente en la oncología médica para entender mejor y predecir la prevalencia o susceptibilidad a este efecto, de tal manera que la administración de rHuEPO se puede contra-indicar, continuar o detener.

EPO: Función biológica

La eritropoyetina (EPO) es una citoquina tipo I de 193 aminoácidos, producida por células de la corteza renal para regular la producción de glóbulos rojos (RBC) en un proceso denominado eritropoyesis. La eritropoyesis tiene naturaleza de multietapas, que implica la diferenciación de blastocitos hematopoyéticos pluripotentes a través de las células progenitoras de unidades formadoras de brotes de eritrocitos (BFU-E) de linaje comprometido y unidades formadoras de colonia de eritrocitos (CFU-E), que surgen en una serie de eritoblastos tempranos y tardíos, que conducen eventualmente a la formación de reticulocitos y eritrocitos maduros. Durante este proceso, la formación secuencial de pro-eritroblastos, eritoblastos basófilos, policromatófilos, y ortocromáticos se regula positivamente por EPO. La EPO induce múltiples efectos positivos en eritroblastos tempranos, que incluyen proliferación aumentada, progresión a través de maduración, y protección de muerte celular programada.

En términos del mecanismo molecular, la EPO se une a dos receptores Idénticos (EpoR), un evento que activa diversas rutas de señalización intracelular. Estas incluyen el transductor de señal 2 de quinasa Janus y el activador de transcripción 5 (JAK2-STAT5), 3- quinasa fosfatidilinositol (PI3K), proteína quinasa C (PKC), y Ras-Raf-MEK (proteína quinasa regulada por la señal extracelular o activada por mitógeno)-ERK (proteína quinasa regulada por la señal extracelular). Las rutas JAK2- STAT5 y RAS-RAF-MEK-ERK se considera que están asociadas con la acción

mitogénica de Epo, mientras que la ruta PI3K, que actúa a través Akt (PI3K-Akt), se ve como un mediador de actividades anti-apoptóticas de EPO.

EPO: Uso clínico

La anemia (AmE) o anaemia/anemia (BrE), del Griego (vaimía) (an-haíma) significa "sin sangre", es una deficiencia 5 de glóbulos rojos (RBC) y/o hemoglobina. La afección se observa comúnmente en pacientes con enfermedades crónicas, y es particularmente común en cáncer cuando aproximadamente 50% de los pacientes son anémicos en la presentación y algunos, el 70-90% desarrolla la afección durante el curso de tratamiento (típicamente denominado anemia inducida por quimioterapia (CIA)). En un estudio reciente de the European Cáncer Anemia Survey (ECAS), Ludwig et al. cita en un índice de anemia inicial del 50 % (hemoglobina [Hb] < 12 g/dL) entre 3010 pacientes con 10 cánceres hematológicos y un índice de anemia inicial de 41 % entre 11.453 pacientes con tumores sólidos (Blood, 2002; 100: 234a-235a. Resumen 884). El análisis longitudinal adicional revela que 72 % de los 2780 pacientes con cánceres hematológicos y 66 % de los 10.067 pacientes con tumores sólidos sucumben a CIA. Otros estudios publicados han reportado altos índices variados en pacientes en diferentes fases y con diferentes tipos de tratamiento (Tabla 1). No obstante, todos los estudios demuestran la extremadamente alta prevalencia de anemia 15 en pacientes con cáncer.

Tabla 1. Prevalencia de Anemia en Pacientes con Cáncer que Experimentan Tratamiento

Un número de factores contribuyen a la alta incidencia de anemia entre pacientes con cáncer, que incluyen no solo quimioterapia y mielosupresión inducida por radiación, sino también anemia mediada por citoquina de enfermedad 20 crónica, hemorragia, infiltración de la médula ósea por el tumor, hemolisis, y deficiencias nutricionales. Cualquiera que sea la fuente, la anemia resulta en una capacidad reducida de la sangre para transferir oxígeno a los tejidos, lo que conduce a hipoxia de tejido y un rango asociado de consecuencias clínicas, que afectan todos los ámbitos de salud del paciente: estado fisiológico, bienestar sicosocial y calidad de vida. No es sorprendente que la anemia pueda afectar en forma negativa la respuesta del paciente a una terapia contra el cáncer, un hecho que destaca la 25 importante función de soporte de rHuEPO para restaurar los conteos normales de RBC.

EPO: Señales de Seguridad Clínica

Durante muchos años se consideró que el ESA era extremadamente seguro en sus indicaciones etiquetadas de enfermedad crónica de riñón y anemia inducida por quimioterapia. Los primeros indicios de problemas de seguridad se produjeron en el 2003 cuando los resultados de un par de estudios que examinan la potenciación de la radiación 30 y la quimioterapia de la EPO dieron lugar a una reunión de la FDA en Mayo de 2004. Este primer estudio (the ENHANCE study: Lancet 2003; 362: 1255-1260) sugirió el riesgo relativo de la supervivencia libre de evolución que fue peor para pacientes quienes recibieron radioterapia más beta epoyetina NeoRecormon de Roche que para pacientes que... [Seguir leyendo]

1. Un método de determinar si un paciente con cáncer es adecuado para terapia con eritropoyetina (EPO), que comprende

(A) determinar el nivel de expresión de EPH-B4 en una muestra de tejido aislada de dicho paciente; y

(B) correlacionar una presencia de expresión de EPH-B4 con una respuesta fisiológica negativa a terapia con EPO.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el nivel de expresión se determina mediante una técnica seleccionada del grupo que consiste de ¡nmunoensayo, ensayo quimioluminiscente, ensayo nefelométrico, ensayo turbidimétrico, bioensayo y ensayo indicador.

3. El método de la reivindicación 1, en donde el nivel de expresión se determina mediante un ¡nmunoensayo seleccionado del grupo que consiste del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA), ¡nmunoprecipitación, ¡nmunoensayo de enzima (EIA), radlolnmunoensayo (RIA), ¡nmunoensayo fluorescente, transferencia Western, ¡nmunoensayo competitivo, ¡nmunoensayo no competitivo, ¡nmunoensayo homogéneo y ¡nmunoensayo heterogéneo.

4. El método de la reivindicación 1, en donde el nivel de expresión se determina mediante ELISA.

5. El método de la reivindicación 1, en donde dicho nivel de expresión se determina mediante ¡nmunohistoquímica.

6. El método de la reivindicación 1, en donde el nivel de expresión se determina mediante medir la cantidad de EPH- B4 mARN en dicha muestra, en particular en donde el nivel de expresión se determina mediante una técnica seleccionada del grupo que consiste de PCR, QPCR, R-PCR, análisis de microdisposición de expresión de gen, análisis de transferencia northern, transcripción inversa y amplificación, zimografía, reacción de cadena ligasa, NASBA, De Protección de RNasa (RPA), electrofóresis capilar con fluorescencia inducida por láser (CE-LIF), y RT- PCR.

7. El método de la reivindicación 6, en donde el nivel de expresión se determina mediante transcripción inversa y amplificación.

8. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra de tejido se selecciona de tejido canceroso o células circulantes derivadas del mismo, o en donde la muestra de tejido se selecciona de sangre, linfa, orina o fluido cerebral.

9. El método de la reivindicación 1, comprende adicionalmente determinar el nivel de expresión en dicha muestra de por lo menos uno de Efrina A1 o EPOR.

10. El método de la reivindicación 1, en donde dicha respuesta fisiológica negativa incluye evolución de tumor en aumento, más pobre supervivencia del paciente o supervivencia celular de tumor mejorada.