Procedimiento de preparación de cápsulas lipídicas funcionalizadas.

Cápsula de tipo núcleo lipídico líquido/corteza lipídica sólida funcionalizada en la superficie con al menos un compuesto que contiene al menos una función amina,

caracterizada por que la estructura núcleo/corteza lipídicos está a escala nanométrica y por que dicho compuesto está unido de manera covalente por medio de una reacción de transacilación a dicha corteza lipídica sólida

Procedimiento de preparación de cápsulas lipídicas funcionalizadas La presente invención pretende proponer nuevos sistemas vesiculares y en particular de tipo cápsulas con envoltura lipídica sólida y núcleo lipídico líquido.

Ya se conocen unos sistemas de tipo nanocápsulas o nanogotitas cuyo tamaño varía de 50 a 500 nanómetros, y formados de un núcleo líquido o semi-sólido, cubiertos con una membrana externa.

Por ejemplo, la patente US 5, 961, 970 propone a título de vehículo de agentes activos, unas emulsiones aceite-enagua a escala submicrónica, es decir una miniemulsiones cuyas gotitas poseen un núcleo hidrófobo de naturaleza lipídica y están estabilizadas en la superficie por unos tensioactivos anfífilos y/o no iónicos como los tensioactivos de tipo fosfolípidos. La patente US 5, 576, 016 describe unas macroemulsiones cuyas gotitas están formadas de un núcleo lipídico sólido y que están estabilizadas por una envoltura fosfolipídica. Los documentos EP 1 265 698, WO 09/001019 y FR 2 916 974, por su parte, describen unas nanocápsulas de núcleo líquido y corteza sólida de naturaleza lipídica, que pueden ser obtenidas a partir de una microemulsión preparada mediante la técnica de inversión de fase por efecto térmico (emulsión PIT) .

El documento US 2008/2536960 se refiere a plataformas lipoproteicas que comprenden un núcleo lipídico líquido y una corteza constituida de fosfolípidos, de colesteroles no esterificados y de una proteína, en particular una apoproteína ApoB-100. La reacción de unión entre el ácido fólico y la ApoB-100 resulta de un acoplamiento peptídico.

Los documentos WO 2007/106683 y FR 2677272 describen unas partículas lipoproteicas que comprenden un núcleo no líquido y una corteza lipídica.

Estos sistemas de nanoparticulas están, principalmente, dedicados a la encapsulación de un agente activo que, en función de su naturaleza, hidrófila, hidrófoba o hidrodispersable, estará presente en el núcleo y/o en la corteza.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "encapsulación de un agente activo", su incorporación a nivel del núcleo o de la corteza de una nanocápsula, según su naturaleza, hidrófila, hidrófoba o hidrodispersable.

Sin embargo, estos sistemas vesiculares no se prestan simultáneamente al transporte de una gran variedad de agentes activos y/o a un control total de su capacidad de liberación y/o de orientación. En efecto, estos sistemas permiten la encapsulación sólo de agentes activos de peso molecular relativamente bajo, en particular de peso molecular inferior o igual a aproximadamente 5000 daltons. Por otra parte, sería ventajoso poder reforzar la estructura capsular de estas nanocápsulas para prevenir, por ejemplo, cualquier liberación intempestiva del agente activo que transportan o también incrementar la resistencia de su envoltura a los medios biológicos agresivos como, por ejemplo, los jugos gástricos. Podría además, ser muy interesante poder funcionalizarlos fácilmente en la superficie, para, por ejemplo, asignarles un objetivo específico. Así, podrá ser particularmente interesante aprovechar unos ligandos de tipo galactosa para dirigir estas nanocápsulas hacia el receptor expresado por los hepatocitos o de tipo péptido arginina-glicina-aspartato RGD para orientar las integrinas V3 expresadas por algunos tumores fuertemente vascularizados.

La invención pretende precisamente proponer un modo de funcionalización de estos sistemas vesiculares que permiten conferirlos las ventajas antes citadas.

De manera inesperada, los inventores han constatado que la superficie externa de nanocápsulas puede prestarse a tal funcionalización, con la condición de que esta sea realizada en condiciones específicas.

Contra toda previsión, la funcionalización en la superficie de estas nanocápsulas no afecta a su estabilidad y no conlleva su disgregación, como se confirma en los ejemplos siguientes mediante las mediciones de difusión dinámica de la luz o por la obtención de imágenes por microscopía electrónica de transmisión.

Así, la presente invención pretende, según un primero de sus aspectos, una cápsula de tipo núcleo lipídico líquido/corteza lipídica sólida funcionalizada en la superficie con al menos un compuesto que contiene al menos una función amina, caracterizada por que la construcción núcleo/corteza lipídicos es de escala nanométrica y por que dicho compuesto está unido de manera covalente por medio de una reacción de transacilación a dicha corteza lipídica sólida.

Según otro de sus aspectos, la presente invención pretende un procedimiento útil para la funcionalización de nanopartículas de corteza lipídica sólida y núcleo lipídico líquido, comprendiendo dicho procedimiento al menos las etapas que consisten en:

i) disponer de nanocápsulas con corteza lipídica sólida y núcleo lipídico líquido,

ii) poner en contacto dichas nanocápsulas con una solución acuosa alcalina, a fin de activar su superficie para una reacción de transacilación, iii) poner en contacto el medio ii) con al menos un compuesto que contiene al menos una función amina para formar, por transacilación, dichas cápsulas esperadas y, llegado el caso, iv) neutralizar las cápsulas funcionalizadas así obtenidas, y v) aislar dichas cápsulas funcionalizadas.

En efecto, el documento EP 0 693 963 describe la preparación de partículas cuya corteza es denominada "gelificada", a partir de polisacáridos esterificados, presentes en la corteza de la partícula considerada, y aptas para reaccionar con una poliamina por medio de una reacción de transacilación.

Sin embargo, además de su naturaleza muy diferente de las consideradas según la invención, las partículas de partida que sufren una reacción de transacilación poseen un tamaño que va desde algunos micrómetros hasta 10 milímetros.

Ahora bien, las partículas de tamaño más reducido, en particular de escala nanométrica, poseen ventajosamente una gran estabilidad coloidal. Las nanopartículas así funcionalizadas resisten a la foculación o a la agregación y tienen una vida útil más larga.

En el sentido de la presente invención, se entiende por "nanocápsulas funcionalizadas" unas nanocápsulas de corteza lipídica sólida, cuya superficie posee una estructura modificada con respecto a la superficie de las nanocápsulas en un estado no funcionalizado, siendo esta estructura en particular el resultado de un injerto en superficie de al menos uno o más compuestos que tienen al menos una función amina.

Con fines de simplificación, estos compuestos pueden también ser designados a continuación bajo la denominación de compuestos aminados. Tal compuesto puede ventajosamente poseer al menos dos, o al menos tres, incluso más funciones aminas.

Se comprende fácilmente que el anclaje de tales moléculas confiere a la nanocápsula así funcionalizada un tamaño superior a su tamaño inicial (es decir no funcionalizada) . Así, si las nanocápsulas de origen poseen un tamaño medio inferior a 150 nm, preferentemente inferior a 100 nm, más preferentemente inferior a 50 nm, las cápsulas obtenidas tras su funcionalización pueden poseer, por su parte, un tamaño medio superior a 150 nm, incluso a 200 nm. El control del procedimiento, y en particular del tiempo de reacción, permite controlar el tamaño final de las nanocápsulas funcionalizadas, que ventajosamente puede seguir siendo inferior a 250 nm.

El compuesto aminado fijado a la superficie de las cápsulas según la invención puede además ser propicio para la fijación de una o más moléculas de interés.

Así, en el sentido de la invención, el término "compuesto aminado" cubre o bien un agente activo tal cual, denominado también molécula de interés, es decir una entidad dotada de una actividad biológica, farmacológica, cosmética, fitosanitaria, o bien una entidad química o biológica capaz de conferir una o más funcionalidades complementarias de las nanocápsulas, y en particular capaz de reforzar su estructura externa y/o permitir un reconocimiento específico del o de los agente (s) activo (s) asociado (s) .

Ventajosamente, el compuesto aminado y/o la molécula de interés son de naturaleza proteica, peptídica, nucleica, polimérica o inorgánica, incluso organometálica.

En relación a las nanopartículas consideradas, un procedimiento según la invención es muy particularmente ventajoso para:

- reforzar su estructura nanocapsular, -modificar su cinética de liberación de los principios activos encapsulados, llegado el caso -incrementar su resistencia a los medios biológicos agresivos, tales como el tubo digestivo, -proteger el núcleo... [Seguir leyendo]

1. Cápsula de tipo núcleo lipídico líquido/corteza lipídica sólida funcionalizada en la superficie con al menos un compuesto que contiene al menos una función amina, caracterizada por que la estructura núcleo/corteza lipídicos está a escala nanométrica y por que dicho compuesto está unido de manera covalente por medio de una reacción de transacilación a dicha corteza lipídica sólida.

2. Cápsula según la reivindicación anterior, en la que el compuesto aminado injertado en la superficie de esta está por otro lado unido de manera no covalente a una molécula de interés.

3. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el compuesto aminado y/o la molécula de interés es de naturaleza proteica, peptídica, nucleica, polimérica o inorgánica, incluso organometálica.

4. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el compuesto aminado es una proteína seleccionada en particular entre la albúmina, la gelatina, los polipéptidos, en particular el ácido poliaspártico, la poliarginina, la polilisina o un polímero sintético, en particular un polietileno imina.

5. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el compuesto aminado y/o la molécula de interés es una molécula de ácido nucleico, en particular un ARNsi.

6. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya corteza lipídica comprende al menos un tensioactivo liposoluble.

7. Cápsula según la reivindicación anterior, en la que el tensioactivo liposoluble se selecciona entre los fosfolípidos, las lecitinas y las fosfatidilcolinas.

8. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya corteza lipídica sólida está formada de al menos un sistema tensioactivo que comprende un tensioactivo lipófilo y, además, un tensioactivo termosensible, no iónico e hidrófilo.

9. Cápsula según la reivindicación anterior, en la que el tensioactivo termosensible, no iónico e hidrófilo se selecciona entre los fosfolípidos, los ésteres de ácido graso de sorbitol polietoxilados, los ésteres de polietilenglicol de ácido graso, unos ácidos grasos de sorbitol polietoxilados, los ésteres de polietilenglicol de ácido graso, unos ácidos grasos polietoxilados, unos éteres de alcohol graso polioxietilenados, unos éteres no fenilo polioxietilenados, unos éteres hidroxifenilo polioxietilenados y un 2-hidroxiestearato de polietilenglicol.

10. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya corteza comprende además al menos un éster de alcohol.

11. Cápsula según la reivindicación anterior, en la que el éster de alcohol se selecciona entre los ésteres de alcohol cuyo número de carbono es un número entero inferior o igual a 12, más particularmente inferior o igual a 10, aún más particularmente inferior o igual a 8.

12. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones 10 y 11, en la que el éster de alcohol corresponde a la fórmula siguiente:

13. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la reacción de transacilación está establecida entre al menos un tensioactivo liposoluble, presente en la corteza lipídica, y al menos un compuesto que contiene al menos una función amina.

14. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el compuesto aminado está injertado en superficie de esta por medio de un procedimiento de transacilación a partir de una lecitina, presente en la corteza lipídica.

15. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la reacción de transacilación está establecida entre al menos un éster de alcohol, presente en la corteza, y al menos un compuesto que contiene al menos una función amina.

16. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el núcleo lipídico líquido comprende al

** (Ver fórmula) **

menos una fase grasa oleosa formada de al menos un cuerpo graso líquido o semilíquido, en particular de al menos un triglicérido, de un éster de ácido graso, o de una de sus mezclas.

17. Cápsula según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya estructura núcleo/envoltura lipídicos a escala 5 nanométrica encapsula al menos un agente activo en el núcleo y/o en la corteza.

18. Procedimiento útil para la funcionalización de nanocápsulas de corteza lipídica sólida y núcleo lipídico líquido, comprendiendo dicho procedimiento al menos las etapas que consisten en:

i) disponer de nanocápsulas de corteza lipídica sólida y núcleo lipídico líquido, ii) poner en contacto dichas nanocápsulas con una solución acuosa alcalina, a fin de activar su superficie para una reacción de transacilación, iii) poner en contacto el medio ii) con al menos un compuesto que contiene al menos una función amina para formar, por transacilación, dichas cápsulas esperadas y, llegado el caso, iv) neutralizar las cápsulas funcionalizadas así obtenidas, y 20 v) aislar dichas cápsulas funcionalizadas.

19. Procedimiento según la reivindicación anterior, en el que el compuesto aminado es un compuesto seleccionado entre los mencionados en las reivindicaciones 3 a 5.

20. Procedimiento según una de las reivindicaciones 18 o 19, en el que la reacción de transacilación utiliza una alcalinización por una solución de sosa.

21. Cápsulas susceptibles de ser obtenidas mediante el procedimiento según una de las reivindicaciones 18 a 20.

22. Utilización de al menos una cápsula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para la preparación de una composición de interés terapéutico, cosmético o nutracéutico.

23. Composición que contiene al menos una cápsula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en asociación con al menos un vehículo fisiológicamente aceptable. 35