Método para diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática en un sujeto y/o para controlar la eficacia del tratamiento de dicha patología.

Método para diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática,

en particular una fibrosis hepática en un sujeto que comprende el establecimiento de al menos una puntuación diagnóstica no invasiva de la fibrosis portal y septal mediante la realización de las etapas siguientes :

a) medir en una muestra de dicho sujeto tres, cuatro, cinco, seis o siete variables escogidas en el grupo constituido por α-2 macroglobulina (A2M), ácido hialurónico (AH o hialuronato), apoliproteína Al (ApoAl), propéptido N-terminal del procolágeno de tipo III (P3P), gamma-glutamiltranspeptidasa (GGT), bilirubina, gamma globulinas (GLB), plaquetas (PLQ), tasa de protrombina (TP), aspartato amino-transferasa (ASAT), alanina amino-transferasa (ALAT), urea, sodio (NA), glicemia, triglicéridos, albúmina (ALB), fosfatasas alcalinas (PAL), YKL-40 (human cartilage glycoprotein 39), Inhibidor tisular de la metaloproteinasa de la matriz 1 (TIMP-1), metaloproteinasa de la matriz 2 (MMP-2), Ferritina, una al menos de las tres, cuatro, cinco, seis o siete variables que se escogen entre el grupo constituido por plaquetas (PLQ) y tasa de protrombina (TP); en el caso donde se mide exactamente tres variables, estas tres variables no pueden ser juntas plaquetas (PLQ), tasa de protrombina (TP) y bilirubina ; y, las tres, cuatro, cinco, seis o siete variables escogidas no comprenden juntas α-2 macroglobulina (A2M), ácido hialurónico (AH o hialuronato) e Inhibidor tisular de la metaloproteinasa de la matriz 1 (TIMP-1),

b) recoger al menos una variable clínica que caracteriza a dicho sujeto y ; para la puntuación diagnóstica de la fibrosis portal y septal, las etapas a) y b) arriba son tales que al menos se miden o recogen 4 variables,

c) combinar, en una función lógica o lineal, las variables siguientes : α-2 macroglobulina (A2M) y tasa de protrombina (TP) y al menos dos variables escogidas entre plaquetas (PLQ), aspartato amino-transferasa (ASAT), urea, ácido hialurónico (AH) y edad, a fin de obtener un resultado diagnóstico de la fibrosis portal y septal;

d) diagnosticar la presencia y/o la gravedad de dicha patología y/o la eficacia de dicho tratamiento a partir del resultado obtenido durante la combinación de la etapa (c).

Método para diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática en un sujeto y/o para controlar la eficacia del tratamiento de dicha patología La presente invención concierne al campo del diagnóstico en hepatología, y específicamente tiene como objeto un método que permita la evaluación de la presencia y/o de la gravedad de la fibrosis hepática del hígado.

En el sentido de la de la presente invención, el término « evaluación de la presencia de la fibrosis » significa se investiga si la fibrosis existe o no en el paciente analizado por el método de la invención; el término « evaluación de la gravedad » significa que se investiga una medida del grado de fibrosis, esto debe distinguirse de la gravedad de la enfermedad hepática, que es una deficiencia funcional del hígado. El término « evaluación del área de fibrosis » significa que se investiga una medida del grado de lesión del hígado por la fibrosis. Es claro que el deterioro funcional del hígado está en función del grado de lesión anatómica del hígado, pero no linealmente.

La gravedad de las enfermedades crónicas del hígado reside en la fibrosis que es una cicatriz secundaria a la inflamación. Las causas de las enfermedades fibrosantes del hígado son principalmente las infecciones virales B y C, el alcohol y la esteatosis (hígado graso) .

Hasta el presente, la evaluación de la fibrosis reposa en la biopsia hepática (PBH) . La fibrosis hepática se clasifica a partir de la PBH en marcador de fibrosis semicuantitativo. Existen muchas clasificaciones basadas en la observación de lesiones similares. La descripción de esas lesiones es principalmente cualitativa después de una perturbación (o distorsión) de la arquitectura de la unidad elemental (a nivel funcional y anatómico) del hígado que es el « lóbulo » hepático. La fibrosis nace en la periferia del lóbulo en el espacio « puerta » (etapa F1) para extenderse en el lóbulo (bandas restringidas de fibrosis en la etapa F2) y luego disecciona (bandas extensivas de fibrosis o etapa F3) para ser concéntrica y aislar las células hepáticas (etapa F4 o cirrosis) . La clasificación Metavir descrita arriba (Bedossa y otros, 1994, Hepatology, vol. 20, páginas 15-20) es una de las más utilizadas. Ella clasifica la fibrosis hepática en 5 etapas de F0 a F4, la etapa F4 corresponde a la última etapa de cirrosis. Se dice que la fibrosis es clínicamente significativa cuando es de etapa F º 2. E marcador de la fibrosis F se utiliza por todos los especialistas del hígado en el mundo (según clasificaciones diferentes) . Es el parámetro más importante para determinar la gravedad de una enfermedad del hígado, su potencial evolutivo y la indicación del tratamiento. Es de una ayuda determinante para poder prescribir un tratamiento o para el cuidado de un enfermo. Esta clasificación en puntuación F es semi-cuantitativa por 3 razones : a) la descripción de las lesiones es puramente cualitativa y por lo tanto evaluada por un médico anatomo-patólogo, b) la gradación sólo se puede hacer con un número finito y restringido de etapas (de 4 a 6 sin contar la ausencia de fibrosis) , c) la progresión de la cantidad de fibrosis no es lineal en función de las etapas. El aspecto cuantitativo se debe al carácter ordenado de las clases según la extensión de la fibrosis en el seno del lóbulo.

Existe un medio puramente cuantitativo de medir la fibrosis : es la medición del área (o superficie) de fibrosis por una técnica semi-automática llamada análisis de imagen. Con relación a un panel de marcadores sanguíneos de fibrosis, considerado como referencia, el área de fibrosis demostró ser más fiable que la puntuación de Metavir (Pilette y otros, 1998, J Hepatol, vol. 28, páginas 439-46) .

Sin embargo, la PBH es un examen costoso e invasivo por lo tanto susceptible de complicaciones y necesita como mínimo una hospitalización de día. Las limitaciones actuales de la PBH (costo, intervención invasiva que necesita una hospitalización) limitan la utilización. Utilizar este método diagnóstico sigue siendo un uso casi exclusivo de los especialistas del hígado. Por lo tanto, la atención médica actual incluye los pacientes que están a menudo en una etapa relativamente avanzada de la enfermedad (cirrosis a menudo complicada) , para los cuales las posibilidades de tratamiento son menores.

Varias investigaciones demuestran claramente que la PBH es el principal factor limitante de detección y el acceso a los tratamientos. El desarrollo de alternativas a la PBH, que es el objetivo de la presente invención, forma parte de las recomendaciones de investigación de las conferencias de consenso americana y francesa en 2002.

La fibrosis hepática, incluyendo cirrosis hasta la etapa reciente, es un estado reversible. La detección precoz de la fibrosis permite a menudo proponer medidas para curar la enfermedad o al menos limitar las consecuencias.

Las alternativas a la PBH son los medios no invasivos, en primer lugar los marcadores sanguíneos de fibrosis. El término de marcadores sanguíneos de fibrosis posee de hecho dos significados. Para el biólogo, se trata de marcadores que reflejan uno de los procesos dinámicos de la fibrosis : fibrogénesis (producción de fibrosis) , fibrolisis (destrucción de la fibrosis) . Para el clínico, se trata de un marcador del grado de fibrosis observada con el examen anatomopatológico (fibrosis « septal » principalmente) , es decir una imagen estática resultante de los dos procesos dinámicos precedentes. Además, el clínico distingue esos indicadores en marcadores directos cuando se obtienen a partir de una de las moléculas que participan en la

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matriz extracelular (fibrosis) y en marcadores indirectos cuando reflejan pero no forman parte integrante de esta fibrosis visible.

La Solicitud de Patente Internacional publicada con el número WO 02/16949 describe un método de diagnóstico de enfermedades inflamatorias, fibróticas o cancerosas, en las que se miden los valores de los marcadores bioquímicos en el suero o el plasma de un paciente, se combinan dichos valores gracias a una función lógica, y se analiza el valor final de dicha función lógica en vistas de determinar la presencia de fibrosis o la presencia de lesión necrótico-inflamatorias del hígado. Esta solicitud de patente internacional permite proponer una prueba de fibrosis. Sin embargo, los marcadores utilizados son marcadores bioquímicos clásicos (marcadores indirectos) , que no son indicadores específicos de la fibrosis y pueden variar en función de otras perturbaciones presentes en el curso de las enfermedades del hígado. La prueba que existen en el mercado corresponden al método de la patente WO02/16949, (ver también Imbert-Bismut y otros, Lancet 2001, Vol. 37, páginas 1069-1075) , llamado el Fibrotest comercializado por la sociedad Biopredictive presenta específicamente el inconveniente de tener dificultades para clasificar correctamente a los pacientes con hepatitis viral de etapa F0 y F4.

Además, la solicitud de patente internacional publicada con el número WO03/07382 concierne un método para diagnosticar la presencia o la gravedad de una fibrosis hepática en un paciente. Este método se basa en la detección de tres marcadores que son la a2-macroglobulina, el ácido hialurónico y el inhibidor tisular de las metaloproteinasas-1.

La presente invención tiene como objeto proponer nuevas herramientas que permitan determinar las etapas de fibrosis F, en particular de puntuación F 2, y cuantificar de manera fina el grado exacto de esta fibrosis, en vista de diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática, y/o para controlar la eficacia de un tratamiento curativo.

El seguimiento de la eficacia de un tratamiento curativo o de suspensión es importante. Como la mayoría de las enfermedades crónicas del hígado se acompañan de una fibrosis, el tratamiento curativo o de suspensión tiene como efecto retardar la progresión o incluso el retroceso de la fibrosis. Por lo tanto es importante poder disponer de pruebas que puedan evaluar esta variación de la fibrosis.

Contrario a las herramientas y métodos de la técnica anterior, la presente invención no se refiere solamente a las fibrosis cuya causa es viral, sino también las fibrosis cuya causa es alcohólica y las esteatosis.

Por otro lado, las herramientas de la presente invención son más confiables que las de la técnica anterior.

Estas herramientas son un resultado diagnóstico de la presencia y de la gravedad de la fibrosis, también llamadas marcador de diagnóstico de la fibrosis portal y septal.

La invención permite por lo tanto la determinación de un marcador de diagnóstico no... [Seguir leyendo]

1. Método para diagnosticar la presencia y/o la gravedad de una patología hepática, en particular una fibrosis hepática en un sujeto que comprende el establecimiento de al menos una puntuación diagnóstica no invasiva de la fibrosis 5 portal y septal mediante la realización de las etapas siguientes :

a) medir en una muestra de dicho sujeto tres, cuatro, cinco, seis o siete variables escogidas en el grupo constituido por a-2 macroglobulina (A2M) , ácido hialurónico (AH o hialuronato) , apoliproteína Al (ApoAl) , propéptido N-terminal del procolágeno de tipo III (P3P) , gamma-glutamiltranspeptidasa (GGT) , bilirubina, gammal0 globulinas (GLB) , plaquetas (PLQ) , tasa de protrombina (TP) , aspartato amino-transferasa (ASAT) , alanina amino-transferasa (ALAT) , urea, sodio (NA) , glicemia, triglicéridos, albúmina (ALB) , fosfatasas alcalinas (PAL) , YKL-40 (human cartilage glycoprotein 39) , Inhibidor tisular de la metaloproteinasa de la matriz 1 (TIMP-1) , metaloproteinasa de la matriz 2 (MMP-2) , Ferritina, una al menos de las tres, cuatro, cinco, seis o siete variables que se escogen entre el grupo constituido por plaquetas (PLQ) y tasa de protrombina (TP) ; en el caso donde se l5 mide exactamente tres variables, estas tres variables no pueden ser juntas plaquetas (PLQ) , tasa de protrombina (TP) y bilirubina ; y, las tres, cuatro, cinco, seis o siete variables escogidas no comprenden juntas a-2 macroglobulina (A2M) , ácido hialurónico (AH o hialuronato) e Inhibidor tisular de la metaloproteinasa de la matriz 1 (TIMP-1) , b) recoger al menos una variable clínica que caracteriza a dicho sujeto y ; para la puntuación diagnóstica de la fibrosis portal y septal, las etapas a) y b) arriba son tales que al menos se miden o recogen 4 variables, c) combinar, en una función lógica o lineal, las variables siguientes : a-2 macroglobulina (A2M) y tasa de protrombina (TP) y al menos dos variables escogidas entre plaquetas (PLQ) , aspartato amino-transferasa (ASAT) , urea, ácido hialurónico (AH) y edad, a fin de obtener un resultado diagnóstico de la fibrosis portal y septal; d) diagnosticar la presencia y/o la gravedad de dicha patología y/o la eficacia de dicho tratamiento a partir del

resultado obtenido durante la combinación de la etapa (c) .

2. Método de acuerdo con las reivindicación 1, caracterizado porque dicha patología hepática se escoge entre las enfermedades hepáticas de origen viral, las enfermedades hepáticas de origen alcohólico y las esteatosis.

3. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque en la etapa (a) de dicho método, se mide en una muestra de dicho sujeto 4, 5, 6 o 7 variables.

4. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque en la etapa (c) se combina :

-a-2 macroglobulina (A2M) , tasa de protrombina (TP) , ácido hialurónico (AH) y edad (marcador llamado SNIFF 4a) ;

- a-2 macroglobulina (A2M) , tasa de protrombina (TP) , aspartato amino-transferasa (ASAT) y edad (marcador llamado SNIFF 4b) ;

- a-2 macroglobulina (A2M) , tasa de protrombina (TP) , plaquetas (PLQ) , aspartato amino-transferasa (ASAT) y 40 edad (marcador llamado SNIFF 5) ;

-a-2 macroglobulina (A2M) , tasa de protrombina (TP) , plaquetas (PLQ) , aspartato amino-transferasa (ASAT) , urea y ácido hialurónico (AH) (marcador llamado SNIFF 6) ; o

-a-2 macroglobulina (A2M) , tasa de protrombina (TP) , plaquetas (PLQ) , aspartato amino-transferasa (ASAT) , urea, ácido hialurónico (AH) y edad (marcador llamado SNIFF 7) .

5. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho sujeto es un hombre o una mujer.