Nuevos y potentes péptidos del MHC de clase II derivados de la survivina.

Péptido consistente en la SEC ID N.º 3.

Nuevos y potentes péptidos del MHC de clase II derivados de la survivina.

La presente invención se refiere a péptidos, ácidos nucleicos y células destinados a la utilización en métodos inmunoterapéuticos. En particular, la presente invención se refiere a la inmunoterapia contra el cáncer. La presente invención se refiere asimismo a epítopos peptídicos para linfocitos T citotóxicos (CTL) asociados a tumores y 5 derivados de la survivina, solos o en combinación con otros péptidos asociados a tumores que pueden servir como principios activos farmacéuticos en composiciones vacunales destinadas a estimular respuestas inmunitarias antitumorales. La presente invención se refiere específicamente a una nueva secuencia peptídica derivada de moléculas HLA de clase II de células tumorales humanas que puede ser utilizada en composiciones vacunales para desencadenar respuestas inmunitarias antitumorales. 10

Antecedentes de la invención Los gliomas son tumores cerebrales originados en las células gliales del sistema nervioso. Las células gliales, llamadas por lo común neuroglía o simplemente glía, son células no neuronales que proporcionan soporte y nutrición, mantienen la homeostasia, forman la mielina e intervienen en la transmisión de señales en el sistema nervioso. Los dos tipos más importantes de glioma son el astrocitoma y el oligodendroglioma, llamados así por el 15 tipo de célula glial que los origina, esto es, astrocitos y oligodendrocitos. En el grupo de los astrocitomas se encuentra el glioblastoma multiforme (denominado en lo sucesivo glioblastoma) que es el tumor cerebral maligno más frecuente en adultos pues supone alrededor del 40% de los tumores cerebrales malignos y alrededor del 50% de los gliomas (CBTRUS, 2006) . El glioblastoma invade con agresividad el sistema nervioso central y entre todos los gliomas es el que ostenta el nivel más alto de malignidad (grado IV) . Pese a los avances en el tratamiento 20 logrados merced a mejoras en las técnicas de neuroimagen, la microcirugía y las opciones terapéuticas como la temozolomida o la radiación, el glioblastoma sigue siendo incurable (Macdonald, 2001; Burton and Prados, 2000; Prados and Levin, 2000) . La mortalidad causada por este tumor cerebral es muy alta: la esperanza de vida media se sitúa entre 9 y 12 meses desde el diagnóstico. La supervivencia a 5 años durante el periodo de observación comprendido entre 1986 y 1990 fue del 8, 0%. Hasta la fecha, la supervivencia a cinco años después del tratamiento 25 radical que incluye la resección macroscópica del tumor sigue siendo inferior al 10% (Burton and Prados, 2000; Nieder et al., 2000; Napolitano et al., 1999; Dazzi et al., 2000) . A tenor de lo anterior queda patente la necesidad de nuevos métodos terapéuticos eficaces.

El grado de indiferenciación de las células tumorales del glioblastoma es el más elevado de todos los tumores cerebrales, lo que explica su alto potencial de migración y proliferación y su elevada invasividad y, por ende, su 30 pronóstico funesto. Los glioblastomas provocan la muerte por el crecimiento rápido, agresivo e infiltrante que demuestran en el cerebro. El crecimiento infiltrante es el responsable del carácter inoperable de estos tumores. Los glioblastomas también son relativamente resistentes a la radioterapia y la quimioterapia, por lo que la recurrencia postratamiento es elevada. Además, la respuesta inmunitaria contra las células neoplásicas resulta claramente ineficaz a la hora de lograr su erradicación total después de la resección y la radioterapia (Roth and Weller, 1999; 35 Dix et al., 1999; Sablotzki et al., 2000) .

El glioblastoma se clasifica en primario (de novo) y secundario dependiendo de las diferencias en el mecanismo génico de la transformación maligna que experimentan los astrocitos indiferenciados o las células precursoras gliales. El glioblastoma secundario afecta a personas jóvenes menores de 45 años. A lo largo de 4 o 5 años, en promedio, el glioblastoma secundario evoluciona de un astrocitoma de bajo grado a un astrocitoma indiferenciado. 40 Por el contrario, el glioblastoma primario afecta sobre todo a personas más mayores, con una media de edad de 55 años. Por norma general, el glioblastoma primario aparece como un glioblastoma fulminante caracterizado por la progresión del tumor en 3 meses desde el estado sin anomalías clínicas ni patológicas (Pathology and Genetics of the Nervous Systems. 29-39 (IARC Press, Lyon, Francia, 2000) ) .

El glioblastoma migra a lo largo de los nervios mielinizados y se disemina ampliamente por el sistema nervioso 45 central. En la mayoría de casos el tratamiento quirúrgico sólo consigue un efecto terapéutico limitado (Neurol. Med. Chir. (Tokio) 34, 91-94, 1994; Neurol. Med. Chir. (Tokio) 33, 425-458, 1993; Neuropathology 17, 186-188, 1997) (Macdonald, 2001; Prados and Levin, 2000) .

Las células del glioma maligno eluden la detección del sistema inmunitario del anfitrión mediante la producción de agentes inmunodepresores que alteran la proliferación de los linfocitos T y la producción por parte de estos de la 50 citocina inmunoestimulante IL-2 (Dix et al., 1999) .

Las neoplasias intracraneales pueden surgir en cualquiera de las estructuras o tipos celulares del SNC: encéfalo, meninges, glándula pituitaria, cráneo, e incluso tejido embrionario residual. La incidencia anual total de tumores cerebrales primarios en Estados Unidos es de 14 casos por 100. 000. Los tumores cerebrales primarios más frecuentes son los meningiomas, que representan el 27% de los tumores cerebrales primarios, y los glioblastomas, 55 que suponen otro 23% (los glioblastomas suponen el 40% de los tumores cerebrales malignos en los adultos) . Muchos de esos tumores son agresivos y presentan un alto grado. En la población pediátrica los tumores cerebrales primarios son los tumores sólidos más frecuentes y la segunda causa de muerte por cáncer después de la leucemia.

A día de hoy prosigue la búsqueda de un tratamiento eficaz contra el glioblastoma. Para combatir tales células neoplásicas se está estudiando la inmunoterapia, o el tratamiento basado en el reclutamiento del sistema inmunitario. Los primeros resultados alentadores en el tratamiento del glioblastoma los obtuvo Northwest Therapeutics con «DCVax Brain» en estudios inmunoterapéuticos en humanos, en el curso de los cuales se pudieron generar respuestas de CTL específicas de antígeno que prolongaron la mediana del tiempo de 5 supervivencia respecto al tratamiento estándar con una toxicidad mínima (Heimberger et al., 2006) .

Carcinoma colorrectal

Según la Sociedad Americana contra el Cáncer (American Cancer Society) , el cáncer colorrectal (CCR) es el tercer tipo de cáncer más habitual en Estados Unidos puesto que afecta a más de 175. 000 nuevos pacientes cada año. En Estados Unidos, Japón, Francia, Alemania, Italia, España y Reino Unido el número de pacientes afectados supera 10 los 480. 000. Ello lo convierte en una de las principales causas de muerte por cáncer en los países industrializados. La supervivencia relativa a 1 y 5 años de los enfermos de cáncer colorrectal asciende al 84% y el 64%. Pasados los cinco años, la supervivencia sigue descendiendo hasta el 57% al cabo de diez años del diagnóstico. Cuando el cáncer colorrectal se detecta en un estadio inicial y localizado la supervivencia a 5 años es del 90%, pero sólo el 39% de los casos se detectan en ese estadio, principalmente por el escaso alcance de los programas de detección 15 sistemática. Cuando el cáncer alcanza dimensiones regionales y afecta ya a órganos adyacentes o ganglios linfáticos la supervivencia a 5 años disminuye hasta el 68%. Y en el caso de las personas con metástasis a distancia la supervivencia a 5 años vista se reduce al 10%.

Las investigaciones sugieren que el cáncer colorrectal tiene su origen en la interacción entre factores hereditarios y ambientales. En la mayor parte de los casos los pólipos adenomatosos parecen ser los precursores de los tumores 20 colorrectales, aunque el proceso de transición puede durar muchos años. El principal factor de riesgo del cáncer colorrectal es la edad, ya que el 90% de los casos se diagnostican a partir de los 50 años. Otros factores de riesgo referidos por la American Cancer Society son el consumo de alcohol, la alimentación rica en grasas o carnes rojas y una ingesta insuficiente de frutas y verduras. La incidencia sigue aumentando especialmente en zonas como Japón, donde como posibles causas se barajan la adopción de la alimentación de estilo occidental, con la ingesta excesiva 25 de grasas y carne y la reducción del consumo de fibra. Con todo, la incidencia no aumenta al mismo ritmo que en el pasado, lo cual se atribuye al aumento de las exploraciones... [Seguir leyendo]

1. Péptido consistente en la SEC ID N.º 3.

2. Péptido acorde con la reivindicación 1, en que dicho péptido es capaz de estimular linfocitos T CD8 o CD4.

3. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 que está fusionado con los aminoácidos N-terminales de la cadena invariable (Ii) asociada al antígeno HLA-DR. 5

4. Ácido nucleico, que codifica un péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un vector de expresión que expresa dicho ácido nucleico.

5. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4 para el uso en medicina.

6. Célula hospedadora que comprende el ácido nucleico o el vector de expresión acordes con la reivindicación 4, 10 siendo dicha célula hospedadora preferiblemente una célula presentadora de antígeno, en particular una célula dendrítica.

7. Método para producir un péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, comprendiendo el método el cultivo de la célula hospedadora acorde con la reivindicación 6 que expresa el ácido nucleico o el vector de expresión acordes con la reivindicación 4, y el aislamiento del péptido a partir de la célula hospedadora o de su 15 medio de cultivo.

8. Método in vitro para producir linfocitos T citotóxicos (CTL) activados, el cual comprende la puesta en contacto en condiciones in vitro de CTL con moléculas MHC de clase I o II humanas cargadas con antígeno expresadas en la superficie de una célula presentadora de antígeno o un constructo artificial que imite a una célula presentadora de antígeno durante un periodo de tiempo suficiente para activar dichos CTL de una manera específica de antígeno, 20 siendo dicho antígeno un péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2.

9. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4, la célula acorde con la reivindicación 6, un linfocito T citotóxico activado producido de acuerdo con la reivindicación 8 para el uso como medicamento en el tratamiento del cáncer, en que dicho medicamento es preferiblemente una vacuna. 25

10. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4, la célula acorde con la reivindicación 6, un linfocito T citotóxico activado producido de acuerdo con la reivindicación 8 para el uso acorde con la reivindicación 9, en que dicho cáncer se selecciona entre: astrocitoma, astrocitoma pilocítico, tumor neuroepitelial disembrioplásico, oligodendrogliomas, ependimoma, glioblastoma multiforme, gliomas mixtos, oligoastrocitomas, meduloblastoma, retinoblastoma, neuroblastoma, 30 germinoma, teratoma, gangliogliomas, gangliocitoma, gangliocitoma central, tumores neuroectodérmicos primitivos (PNET, p. ej. meduloblastoma, meduloepitelioma, neuroblastoma, retinoblastoma, ependimoblastoma) , tumores del parénquima pineal (p. ej. pineocitoma, pineoblastoma) , tumores de células ependimales, tumores de los plexos coroideos, tumores neuroepiteliales de origen incierto (p. ej. gliomatosis cerebral, astroblastoma) , glioblastoma, tumor de próstata, cáncer de mama, cáncer de esófago, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma de células 35 renales, carcinoma renal de células claras, cáncer de pulmón, SNC, cáncer de ovario, melanoma, cáncer de páncreas, carcinoma epidermoide, leucemia y meduloblastoma, y otros tumores o cánceres que presenten una sobreexpresión de survivina.

11. Péptido para el uso acorde con la reivindicación 9 o 10, en combinación con al menos un péptido seleccionado del grupo consistente en los péptidos acordes con las SEC ID N.º 4 a 13 y 24 en el tratamiento del cáncer renal, o 40 para el uso en combinación con al menos un péptido seleccionado del grupo consistente en los péptidos acordes con las SEC ID N.º 4, 8, 11, 12 y 15 a 24 en el tratamiento del cáncer de colon.

12. Un equipo que comprende:

(a) un envase que contiene una composición farmacéutica que contiene un péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4, una célula 45 acorde con la reivindicación 6, o un linfocito T citotóxico acorde con la reivindicación 8, en solución o en forma liofilizada;

(b) opcionalmente, un segundo envase que contiene un diluyente o solución de reconstitución para la formulación liofilizada;

(c) opcionalmente, al menos un péptido seleccionado del grupo consistente en los péptidos conformes a las 50 SEC ID N.º 4 a 24; y

(d) opcionalmente, instrucciones de uso de la solución y/o la reconstitución y/o uso de la formulación liofilizada.

13. Anticuerpo que es específico contra un péptido acorde con la SEC ID N.º 3 cuando forma un complejo con una molécula de HLA pertinente, siendo dicho anticuerpo preferiblemente un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal y/o un anticuerpo quimérico. 55