Métodos de generación de proteínas marcadas endógenamente.

Un método de marcaje de al menos una proteína endógena, comprendiendo el método:



a) introducir en una célula de mamífero (i) al menos una endonucleasa de dirección o ácido nucleico que codifique una endonucleasa de dirección, uniéndose la endonucleasa de dirección a un sitio diana y siendo capaz de escindir un sitio de escisión en una secuencia cromosómica que codifica la proteína endógena, y (ii) al menos un polinucleótido donante que comprende una secuencia de marcaje, la secuencia de marcaje estando flanqueada por una secuencia dirección cadena arriba y una secuencia dirección cadena abajo, la secuencia cadena arriba y la secuencia cadena abajo compartiendo una identidad de secuencia sustancial con cualquier lado del sitio de escisión de la secuencia cromosómica; y

b) mantener la célula en condiciones que reparan la rotura de doble cadena introducida en el sitio de escisión por la endonucleasa de dirección mediante un proceso de homología dirigida, de modo que la secuencia de marcaje del polinucleótido donante se integra en fase en la secuencia cromosómica codificante de la proteína endógena de modo que se produce una proteína endógena marcada;~

en el que la proteína endógena se selecciona entre actina, tubulina, lamina, receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) y proteína del grupo de alta movilidad A (HMGA).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/032218.

Solicitante: Sigma-Aldrich Co. LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ZHANG,FAN, MALKOV,DMITRY, ZENSER,NATHAN, VASSAR,DEBORAH, ZHANG,HONGYI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K).
  • C12N5/00 C12N […] › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).

PDF original: ES-2565216_T3.pdf

 

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