Método de ensayo para endotoxina.

Un método de ensayo de endotoxinas consistente en añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión de un derivado de camptotecina,

timiperona o un derivado de taxano en presencia de albúmina y/o globulina, donde dicho derivado de camptotecina tiene un esqueleto de camptotecina y donde dicho derivado de taxano tiene un esqueleto de baccatina.

Método de ensayo para endotoxina Campo técnico La presente invención se relaciona con un método de ensayo para endotoxina.

Técnica anterior Es sabido que la contaminación con pirógenos en una solución para inyección puede causar síntomas, tales como pirexia y escalofríos. Con objeto de prevenir la contaminación con pirógenos, se ha empleado convencionalmente la prueba de pirógenos en los procedimientos para la preparación o el control de calidad de las soluciones para inyección para detectar pirógenos. Sin embargo, la prueba requiere mucho tiempo y trabajo y es muy complicada (véase el Documento no de patente 1) .

Se sabe que el pirógeno está principalmente compuesto por endotoxina, que constituye la pared celular de las bacterias gram-negativas. Para la detección y cuantificación de la endotoxina derivada de bacterias gram-negativas, se conocen métodos de ensayo de endotoxinas basados en el principio de coagulación de extractos de glóbulos sanguíneos (lisados) del cangrejo herradura (tal como Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus) con endotoxina (véase el Documento no de patente 2) . Últimamente, dichos métodos de ensayo para endotoxina son utilizados con más frecuencia para la detección de pirógenos que los métodos de ensayo de pirógenos.

[Documento no de patente 1] Comentario de la Farmacopea Japonesa, Decimocuarta Edición, Hirokawa Publishing Co. 2001 B-493 [Documento no de patente 2] Comentario de la Farmacopea Japonesa, Decimocuarta Edición, Hirokawa Publishing Co. 2001 B-63

EP 0.731.354 A1 se relaciona con un método de ensayo de una substancia reactiva con reactivo de límulus y con el problema de la selección de dos diferentes longitudes de onda de la luz que permitan una determinación sensible y precisa sin resultar afectada por substancias interferentes. US 4.273.557 se relaciona con un procedimiento de lisado de límulus para determinar endotoxinas en productos tales como emulsiones lipídicas que tienden a interferir con la reacción.

Divulgación de la invención Problemas que la invención ha de resolver La presente invención proporciona un método capaz de detectar y cuantificar endotoxinas en una muestra en la que no se pueden detectar o cuantificar con precisión endotoxinas derivadas de bacterias gram-negativas mediante el método descrito en el Documento no de patente 2.

Medios para resolver los problemas Como resultado de estudios intensivos por parte de los presentes inventores, se ha visto que el anterior problema es resuelto llevando a cabo una prueba de endotoxina mediante el uso de un reactivo de lisado, en donde se añade el reactivo de lisado a una muestra en presencia de albúmina y/o globulina, y se ha completado la presente invención.

Por consiguiente, la presente invención se relaciona con un nuevo método de ensayo de endotoxinas y con un procedimiento para preparar una inyección que tiene una concentración de endotoxinas inferior a un límite de especificación, según se define en las reivindicaciones, y también se relaciona con lo siguiente.

(1) Un método de ensayo de endotoxinas consistente en añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión de un derivado de camptotecina, timiperona o un derivado de taxano en presencia de albúmina y/o globulina, según se define en la reivindicación 1.

(2) El método de ensayo según (1) , donde la albúmina y/o globulina es seroalbúmina humana.

(3) El método de ensayo según (1) o (2) , donde el derivado de camptotecina es clorhidrato de irinotecán.

(4) Un procedimiento para preparar una inyección que contiene un principio farmacéuticamente activo y que tiene una concentración de endotoxina inferior a un límite de especificación, que comprende una etapa de cribado consistente en: añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión del principio farmacéuticamente activo en presencia de albúmina y/o globulina y determinar la presencia o ausencia de endotoxina, según se define en la reivindicación 6.

(5) Un procedimiento para preparar una inyección que contiene un derivado de camptotecina, timiperona o un derivado de taxano y que tiene una concentración de endotoxina inferior a un límite de especificación, que comprende una etapa de cribado consistente en: añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión del derivado de camptotecina, timiperona o el derivado de taxano en presencia de albúmina y/o globulina y

determinar la presencia o ausencia de endotoxina, según se define en la reivindicación 7.

(6) El procedimiento según (4) o (5) , donde la albúmina y/o globulina es seroalbúmina humana.

(7) El procedimiento según (5) o (6) , donde el derivado de camptotecina es clorhidrato de irinotecán.

Efecto de la invención Como resulta evidente por los Ejemplos que se describirán más adelante, el método de ensayo de la presente invención hace posible detectar y cuantificar la endotoxina derivada de bacterias gram-negativas en una muestra en la que no se puede detectar o cuantificar con precisión la endotoxina mediante los métodos de ensayo convencionales. Según la presente invención, se pueden llevar a cabo la preparación y el control de calidad de una inyección sin usar pruebas de pirógenos complicadas, y se puede disponer de un procedimiento para preparar una inyección que tiene una concentración de endotoxina inferior a un límite de especificación. Además, como se puede detectar el pirógeno sin emplear una prueba de pirógenos en conejos, la presente invención es deseable desde la perspectiva de la protección animal.

Mejor modo de realización de la invención En la presente invención, se hace que una muestra (una solución o dispersión de un principio farmacéuticamente activo) reaccione con un reactivo de lisado en presencia de albúmina y/o globulina y se detecta y cuantifica la reacción entre la endotoxina de la muestra y el reactivo de lisado.

Como ejemplos de la albúmina y/o globulina según la presente invención, se pueden incluir las obtenidas purificando o purificando parcialmente el plasma sanguíneo o el suero sanguíneo y substancias que contienen albúmina y/o globulina como componente. De tales albúminas y globulinas, se prefieren las derivadas del suero sanguíneo humano. Como ejemplos de las substancias que contienen albúmina y/o globulina como componente, se pueden incluir fracciones de COHN, fracciones de albúmina y fracciones de globulina obtenidas por electroforesis, plasma congelado fresco comercial (v.g., los de Japanese Red Cross Society) , proteína plasmática humana calentada (v.g., las de NIHON PHARMACEUTICAL CO., LTD.) , seroalbúmina humana (v.g., las de Japanese Red Cross Society, Mitsubishi Pharma Corporation o Baxter Limited) e inmunoglobulina humana (v.g., las de Japanese Red Cross Society, Mitsubishi Pharma Corporation o Baxter Limited) . En la presente invención, se prefiere la seroalbúmina humana desde el punto de vista de la sensibilidad de detección de la endotoxina.

En la presente invención, un objeto es una muestra en la que no se puede detectar o cuantificar la endotoxina por métodos de ensayo convencionales. El método de ensayo habitual se refiere aquí al método de ensayo descrito en el Documento no de patente 2 y a métodos de ensayo substancialmente similares al mismo. El método descrito en el Documento no de patente 2 es substancialmente el mismo que los métodos descritos en la Farmacopea de los Estados Unidos, en la Farmacopea Europea, en JIS y en los Requerimientos Mínimos para Productos Biológicos. Como ejemplos de la muestra objeto, se incluyen derivados de camptotecina, timiperona y derivados de taxano. Los derivados de camptotecina son derivados que tienen un esqueleto de camptotecina y se conocen generalmente como agentes anticancerosos. Como ejemplos de derivados de camptotecina conocidos, se pueden incluir el clorhidrato de irinotecán, el clorhidrato de nogitecán, el rubitecán, el lurtotecán, la 9-aminocamptotecina y derivados descritos en la Publicación Internacional Nº WO98/07727, la Publicación Internacional Nº WO98/015573, la Publicación Internacional Nº WO99/17804, la Publicación Internacional Nº WO99/011646 y la Patente Japonesa Abierta al Público Nº 10-72467. Los derivados de taxano son derivados que tienen un esqueleto de baccatina y se conocen generalmente como agentes anticancerosos. Como ejemplos de derivados de taxano conocidos, se incluyen paclitaxel, docetaxel hidrato, (2R, 3S) -3- (terc-butoxicarbonilamino) -3- (3-fluoro-2-piridil) -2-hidroxipropionato de (-) - (1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoiloxi-9, 10-[ (1S) -2- (dimetilamino) etilidenoxi]-5, 20-epoxi-1hidroxitax-11-en-13-ilo y derivados descritos en la Patente Japonesa Abierta al Público Nº 7-149779, la Publicación... [Seguir leyendo]

1. Un método de ensayo de endotoxinas consistente en añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión de un derivado de camptotecina, timiperona o un derivado de taxano en presencia de albúmina y/o globulina, donde dicho derivado de camptotecina tiene un esqueleto de camptotecina y donde dicho derivado de taxano tiene un esqueleto de baccatina.

2. El método de ensayo según la reivindicación 1, donde la albúmina y/o globulina es seroalbúmina humana.

3. El método de ensayo según la reivindicación 1 ó 2, donde dicho derivado de camptotecina es seleccionado entre clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de nogitecán, rubitecán, lurtotecán y 9-aminocamptotecina.

4. El método de ensayo según la reivindicación 1 ó 2, donde dicho derivado de camptotecina es clorhidrato de irinotecán. 15

5. El método de ensayo según la reivindicación 1 ó 2, donde dicho derivado de taxano es seleccionado entre paclitaxel, docetaxel hidrato y (2R, 3S) -3- (terc-butoxicarbonilamino) -3- (3-fluoro-2-piridil) -2-hidroxipropionato de (-) (1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoiloxi-9, 10-[ (1S) -2- (dimetilamino) etilidenoxi]-5, 20-epoxi-1hidroxitax-11-en-13-ilo.

6. Un procedimiento para preparar una inyección que contiene un principio farmacéuticamente activo y que tiene una concentración de endotoxina inferior a un límite de especificación, que comprende una etapa de cribado consistente en: añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión del principio farmacéuticamente activo en presencia de albúmina y/o globulina, valorar la presencia o ausencia de endotoxina y preparar una solución o dispersión que tiene una concentración de endotoxina inferior al límite de especificación.

7. Un procedimiento para preparar una inyección que contiene un derivado de camptotecina, timiperona o un derivado de taxano y que tiene una concentración de endotoxina inferior a un límite de especificación, que comprende una etapa de cribado consistente en: añadir un reactivo de lisado a una solución o dispersión del derivado de camptotecina, de la timiperona o del derivado de taxano en presencia de albúmina y/o globulina, valorar la presencia o ausencia de endotoxina y preparar una solución o dispersión que tiene una concentración de endotoxina inferior al límite de especificación, donde dicho derivado de camptotecina tiene un esqueleto de camptotecina y donde dicho derivado de taxano tiene un esqueleto de baccatina.

8. El procedimiento según la reivindicación 7, donde dicho derivado de camptotecina es seleccionado entre clorhidrato de irinotecán, clorhidrato de nogitecán, rubitecán, lurtotecán y 9-aminocamptotecina.

9. El procedimiento según la reivindicación 7, donde el derivado de camptotecina es clorhidrato de irinotecán. 40

10. El procedimiento según la reivindicación 7, donde dicho derivado de taxano es seleccionado entre paclitaxel, docetaxel hidrato y (2R, 3S) -3- (terc-butoxicarbonilamino) -3- (3-fluoro-2-piridil) -2-hidroxipropionato de (-) (1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoiloxi-9, 10-