Método de cultivo celular y utilización del mismo.

Método de cultivo de una célula animal distinta de una célula productora de IgM que comprende comenzar el cultivo en un medio inicial que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo y alimentar el medio al menos una vez con un medio de alimentación que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado durante el cultivo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2005/023709.

Solicitante: CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA.

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 5-1, UKIMA 5-CHOME, KITA-KU TOKYO, 115-8543 JAPON.

Inventor/es: GOTO,SUSUMU, KISHISHITA,SHOHEI, TAKUMA,SHINYA, HIRASHIMA,CHIKASHI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N5/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.

PDF original: ES-2535230_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Método de cultivo celular y utilización del mismo Campo técnico

La invención se refiere a un método de cultivo de una célula animal distinta de una célula productora de IgM. Más específicamente, la presente Invención se refiere a un método de cultivo de una célula animal distinta de una célula productora de IgM y a un método para permitir que una célula animal distinta de una célula productora de IgM produzca una proteína utilizando el método anterior.

Técnica anterior

Al cultivar una célula animal para obtener una proteína natural producida por la célula animal, o al cultivar una célula animal incorporando un gen que codifica para una proteína deseada para producir la proteína deseada, etc., se añaden nutrientes esenciales, tales como bases, azúcares, aminoácidos y vitaminas a un medio de cultivo. Además, se añade habitualmente un extracto derivado de mamífero, concretamente suero, tal como suero bovino fetal, en un intervalo del 5 al 2% para la proliferación de la célula animal. Sin embargo, tal suero derivado de mamífero tiene varias desventajas. Representa del 75 al 95% del coste para el medio de cultivo, y debido a las muchas diferencias entre lotes existentes en cuanto a calidad, no se logra proliferación estable. Además, el suero derivado de mamífero no puede esterilizarse en un autoclave o similar, y por tanto puede contaminarse con virus o micoplasmas. Aunque la mayoría de estos virus o micoplasmas no son patógenos, pueden volverse factores desconocidos adicionales desde el punto de vista de la fabricación estable. Además, el suero contiene más de 5 tipos de proteínas, complicando por tanto el aislamiento y la purificación de la proteína deseada, el producto celular, del medio de cultivo. Para resolver tales problemas con la fabricación estable, se llevan a cabo métodos que usan una proteína purificada derivada de suero tal como fetuína, insulina o transferrina, en lugar de suero. También se someten a ensayo, desde un punto de vista del coste de producción, métodos que usan componentes de medio de cultivo extraídos de mamíferos.

Sin embargo, recientemente se ha expresado una inquietud sobre la relación entre los componentes derivados de mamífero y enfermedades tales como la enfermedad de las vacas locas, la encefalopatía espongiforme bovina (BSE), la encefalopatía espongiforme transmisible (TSE) y la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (CJD). Se demanda desde el punto de vista de la seguridad, el desarrollo de un medio de cultivo para cultivar células animales libres de estos componentes derivados de mamífero.

Al cultivar una célula animal, el no añadir los componentes derivados de mamífero descritos anteriormente en el medio de cultivo provoca una disminución notable en la tasa de supervivencia de las células, y una disminución en el recuento de células viables en el caldo de cultivo en una fase temprana del cultivo. Estos acontecimientos hacen que el cultivo a largo plazo o el cultivo a gran escala sea imposible.

Para resolver el problema descrito anteriormente, se ha notificado un método en el que se añade un producto de degradación enzimática de carne de pescado o de extracto de carne de pescado al medio de cultivo (documentos de patente 1 y 2). Con este método, se ha hecho posible la alta producción de proteínas sin suero bovino fetal que se creía en general esencial. Además, el documento 3 describe un cultivo discontinuo alimentado de células CHO para la producción de IFN-y recombinante. El método comprende el cultivo en un medio de cultivo inicial que comprende la peptona de carne de vaca Primatone RL y la adición de un medio de alimentación que también comprende Primatone RL.

Sin embargo, se desea una mejora adicional porque desde el punto de vista del coste de producción, son preferibles niveles todavía superiores de producción de proteínas.

Documento de patente 1: Publicación internacional WO 99/6358

Documento de patente 2: Publicación de patente japonesa no examinada n.° 23-33468.

Documento 3: Gu et al., Biotechnology and Bioengineering 5b (1997); 353-36.

Descripción de la invención Problema que va a solucionar la invención

Es un objeto de la presente invención permitir una alta producción celular de proteínas realizando un cultivo discontinuo alimentado usando un medio que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado.

Medios para resolver el problema

Como resultado de investigaciones exhaustivas e intensivas para solucionar el problema descrito anteriormente, se ha encontrado que es posible permitir que una célula animal distinta de una célula productora de IgM produzca una proteína de interés con un rendimiento todavía superior realizando un cultivo discontinuo alimentado usando un

medio que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo. Así se ha logrado la presente invención.

El contenido de la presente invención es tal como se describe a continuación.

(1) Un método de cultivo de una célula animal distinta de una célula productora de IgM que comprende comenzar el cultivo en un medio inicial que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo y alimentar el medio al menos una vez con un medio de alimentación que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado durante el cultivo.

(2) El método según (1), en el que la célula se cultiva mediante cultivo discontinuo alimentado.

(3) El método según (1) ó (2), en el que la célula es una célula en la que se ha transferido un gen que codifica para una proteína de interés.

(4) El método según (3), en el que la proteína de interés es un anticuerpo.

(5) El método según uno cualquiera de (2) a (4), en el que la célula es una célula de mamífero.

(6) El método según (5), en el que la célula de mamífero es una célula CHO.

(7) Un método de producción de una proteína cultivando una célula animal distinta de una célula productora de IgM que comprende comenzar el cultivo en un medio inicial que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo y alimentar el medio al menos una vez con un medio de alimentación que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado durante el cultivo.

(8) El método según (7), en el que la célula se cultiva mediante cultivo discontinuo alimentado.

(9) El método según (7) u (8), en el que la célula es una célula en la que se ha transferido un gen que codifica para una proteína de interés.

(1) El método según (9), en el que la proteína de interés es un anticuerpo.

(11) El método según uno cualquiera de (7) ó (1), en el que la célula es una célula de mamífero.

(12) El método según (11), en el que la célula de mamífero es una célula CHO.

(13) El método según (2) u (8), en el que la concentración del producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido en el medio inicial es de 3 a 2 g/l y en el medio de alimentación de 5 a 15 g/l.

(14) El método de (4) ó (1), en el que el anticuerpo es un anticuerpo IgG.

Efecto de la invención

En la presente invención, es posible permitir que una célula animal distinta de una célula productora de IgM produzca una proteína de interés con un rendimiento todavía superior añadiendo un producto de degradación enzimática de carne de pescado no sólo al medio al comienzo del cultivo sino también al medio durante el cultivo.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es un gráfico que muestra las concentraciones (g/l) de un anticuerpo producido en medios de cultivo por células CHO que se cultivaron en un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con 5 g/l de hidrolizado de bonito (medio inicial) y un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con 3 g/l de hidrolizado de bonito (medio de alimentación).

La figura 2 es un gráfico que muestra las concentraciones (g/l) de un anticuerpo producido en medios de cultivo por células CHO que se cultivaron en un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con 15 g/l de hidrolizado de bonito (medio inicial) y un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con 75 g/l de hidrolizado de bonito (medio de alimentación).

La figura 3 es un gráfico que muestra las concentraciones (g/l) de una proteína producida en medios de cultivo por células CHO que se cultivaron en un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con 5 g/l de hidrolizado de bonito (medio inicial) y un medio libre de componentes derivados de mamífero complementado con... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

Método de cultivo de una célula animal distinta de una célula productora de IgM que comprende comenzar el cultivo en un medio Inicial que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo y alimentar el medio al menos una vez con un medio de alimentación que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado durante el cultivo.

Método según la reivindicación 1, en el que la célula se cultiva mediante cultivo discontinuo alimentado.

Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la célula es una célula en la que se ha transferido un gen que codifica para una proteína de interés.

Método según la reivindicación 3, en el que la proteína de interés es un anticuerpo.

Método según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la célula es una célula de mamífero.

Método según la reivindicación 5, en el que la célula de mamífero es una célula CHO.

Método de producción de una proteína cultivando una célula animal distinta de una célula productora de IgM que comprende comenzar el cultivo en un medio inicial que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido al mismo y alimentar el medio al menos una vez con un medio de alimentación que contiene un producto de degradación enzimática de carne de pescado durante el cultivo.

Método según la reivindicación 7, en el que la célula se cultiva mediante cultivo discontinuo alimentado.

Método según la reivindicación 7 u 8, en el que la célula es una célula en la que se ha transferido un gen que codifica para una proteína de interés.

Método según la reivindicación 9, en el que la proteína de interés es un anticuerpo.

Método según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 1, en el que la célula es una célula de mamífero.

Método según la reivindicación 11, en el que la célula de mamífero es una célula CHO.

Método según la reivindicación 2 u 8, en el que la concentración del producto de degradación enzimática de carne de pescado añadido en el medio inicial es de 3 a 2 g/l y en el medio de alimentación de 5 a 15 g/l.

Método según la reivindicación 4 ó 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo IgG.


 

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