Marcadores para su utilización en la producción de líneas restauradoras doble cero de Brassica napus con un buen valor agronómico.

Composición de cinco marcadores, siendo dichos marcadores PGlol,

PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418, en la que el marcador PGlol presenta la secuencia de SEC ID nº: 1, el marcador PGIUNT presenta la secuencia de SEC ID nº: 2, el marcador PGlint presenta la secuencia de SEC ID nº: 3, el marcador BolJon presenta la secuencia de SEC ID nº: 4, y el marcador CP418 presenta la secuencia de SEC ID nº:5.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E10183322.

Solicitante: INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 147, RUE DE L'UNIVERSITE 75007 PARIS FRANCIA.

Inventor/es: BUDAR, FRANCOISE, PELLETIER, GEORGES, RENARD, MICHEL, PRIMARD-BRISSET,CATHERINE, DELOURME,RÉGINE, POUPARD,JEAN-PIERRE, HORVAIS,RAYMONDE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01H1/00 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01H NOVEDADES VEGETALES O PROCEDIMIENTOS PARA SU OBTENCION; REPRODUCCION DE PLANTAS POR TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS.Procedimientos de modificación de los genotipos (A01H 4/00 tiene prioridad).
  • A01H1/02 A01H […] › A01H 1/00 Procedimientos de modificación de los genotipos (A01H 4/00 tiene prioridad). › Métodos o aparatos de hibridación; Polinización artificial.
  • A01H1/06 A01H 1/00 […] › Procedimientos de mutación, p. ej. tratamientos por productos químicos o irradiaciones (mutaciones específicas preparadas por ingeniería genética sobre celulas o tejidos vegetales C12N 15/00).
  • A01H5/00 A01H […] › Plantas con flores, es decir, angiospermas.
  • A01H5/10 A01H […] › A01H 5/00 Plantas con flores, es decir, angiospermas. › Granos.
  • C12N15/11 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2532641_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Marcadores para su utilización en la producción de líneas restauradoras doble cero de Brassica napus con un buen valor agronómico.

La divulgación se refiere a un procedimiento para producir líneas restauradoras doble cero de Brassica napus para esterilidad masculina citoplásmica Ogura (eme) que presentan una introgresión del rábano portadora del gen restaurador Rfo suprimido del alelo Pgi-2 de rábano y recombinado con el gen PGI- 2 de Brassica olerácea, y que tiene un buen valor agronómico caracterizado por la fertilidad femenina, una buena tasa de transmisión de Rfo y un gran vigor vegetativo. La divulgación se refiere también a un procedimiento de formación de semillas híbridas de Brassica napus y su descendencia. La presente invención se refiere a la utilización de marcadores para la selección y a la composición de estos marcadores.

Las líneas restauradoras de cultivo para el sistema de esterilidad masculina citoplásmica (eme) Ogu-INRA en semillas de colza (Brassica napus L.) ha sido un objetivo importante durante los últimos años. El retrocruzamiento común y el cultivo genealógico fueron necesarios para mejorar su fertilidad femenina y para obtener líneas restauradoras doble cero. Las denominadas variedades "doble cero" son las que tienen poco ácido erúcico en el aceite y pocos glucosinolatos en la harina sólida que queda tras la extracción del aceite. Sin embargo, algunas dificultades que aún se pueden encontrar en el cultivo de estas líneas (reestructuraciones por introgresión, posible enlace con rasgos negativos) debido al gran tamaño de la introgresión del rábano.

El objetivo en el contexto de la presente invención es el de proporcionar una nueva y mejorada línea restauradora doble cero con un buen valor agronómico.

Este objetivo se consigue mediante un nuevo procedimiento de producción de una línea restauradora doble cero recombinada para la eme Ogu-INRA en semillas de colza.

Una primera divulgación se refiere a un procedimiento de producción de líneas restauradoras doble cero de Brassica napus para esterilidad masculina citoplásmica (eme) Ogura que presentan introgresión en el rábano portadora del gen restaurador Rfo suprimido del alelo Pgi-2 del rábano y recombinado con el gen Pgi-2 de Brassica olerácea, y que tiene un buen valor agronómico caracterizado por la fertilidad femenina, una buena tasa de transmisión de Rfo y un gran vigor vegetativo, incluyendo dicho procedimiento las etapas siguientes:

a) cruzar líneas eme doble cero de Brassica napus primaveral que comprende una inserción suprimida de rábano con la línea doble cero de Drakkar primaveral para formar plantas heterocigóticas restauradas de

Brassica napus,

b) irradiar antes de la meiosis las plantas heterocigóticas restauradas obtenidas en la etapa a) con radiación de rayos gamma,

c) cruzar el polen de las flores obtenido en la etapa b) con la línea Wesroona de primavera eme doble cero,

d) probar en la descendencia el vigor, la fertilidad femenina y la tasa de transmisión del gen eme,

e) seleccionar líneas de descendencia.

En la presente divulgación, el término "línea(s)" significa una planta que es esencialmente homocigótica y que es reproducible por autopolinización.

La divulgación se refiere asimismo al procedimiento anterior, en el que la dosis de radiación en la etapa b) es 65 Gray durante 6 min.

En particular, la línea eme doble cero de Brassica napus primaveral de la etapa a) del procedimiento divulgado en la presente memoria es R211.

La R211 es una línea restauradora primaveral INRA.

La Drakkar es una variedad francesa de primavera registrada.

La Wesroona es una variedad australiana de primavera registrada.

Ventajosamente, la prueba del procedimiento divulgado en la presente memoria se realiza con la combinación de cinco marcadores seleccionados de entre PGIol, PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418.

Otro objeto de la presente invención se refiere a las líneas restauradoras doble cero de Brassica napus para Ogura eme que presentan una inserción Rfo suprimida del alelo Pgi-2 de rábano y recombinada con el gen Pgi-2 de

Brassica olerácea, y que tiene un buen valor agronómico caracterizada por la fertilidad femenina, una buena tasa de transmisión de Rfo y un gran vigor vegetativo.

Ventajosamente, las líneas restauradoras doble cero divulgadas en la presente memoria presentan una combinación única de cinco marcadores seleccionados de entre PGIol, PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418.

Otro objeto de la presente divulgación se refiere a un procedimiento para formar plantas híbridas de Brassica napus y de su descendencia obtenidas por las etapas siguientes:

a) proporcionar una línea restauradora producida según la reivindicación 1 y cultivada para ser homocigótica,

b) utilizar dicha línea restauradora en un campo de producción de híbridos como el polinizador,

c) utilizar plantas estériles eme en un campo de producción de híbridos como la planta de productora de semillas híbridas, y

d) recolectar la semilla híbrida de la planta masculina estéril.

Otro objeto de la presente divulgación se refiere a las semillas de la planta Brassica obtenidas por los procedimientos divulgados en la presente memoria.

Todavía otro objeto de la divulgación se refiere a las semillas de Brassica napus depositadas en NCIMB Limited, 23 St Machar Drive, Aberdeen, Escocia, AB24 3RY, Reino Unido, el 4 de julio de 2003, con el número de referencia

NCIMB41183.

La presente invención se refiere a la utilización de cinco marcadores PGIol, PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418, o cualquier parte de los mismos que comprende por lo menos un sitio polimórfico, para la caracterización de líneas restauradoras recombinadas de Brassica napus para Ogura eme que presentan una inserción Rfo suprimida del alelo Pgi-2 de rábano y recombinada con el gen Pgi-2 de Brassica olerácea, y con un buen valor agronómico caracterizado por la fertilidad femenina, una buena tasa de transmisión de Rfo y un alto vigor vegetativo.

En la presente invención, la expresión cualquier parte de los mismos que comprende por lo menos un sitio polimórfico se refiere a cualquier parte de la secuencia que presenta por lo menos una diferencia entre la secuencia de tipo B. olerácea y la secuencia de tipo B. rapa.

Dichos marcadores se representan en las siguientes figuras y en el listado de secuencias para la línea R2000.

Según una forma ventajosa de forma de realización, la presente invención se refiere a:

- El marcador PGIol que se amplía utilizando los cebadores: PGIol U y L PGIol:

(PGIol U: 5'TCATTTGATTGTTGCGCCTG3';

PGIol L: 5TGTACATCAGACCCGGTAGAAAA3 ')

- El marcador PGlint que se amplía utilizando los cebadores: PGlint U y PGlint L:

(PGlint U: 5'CAGCACTAATCTTGCGGTATG3';

PGlint L: 5'CAATAACCCTAAAAGCACCTG3')

- El marcador PGIUNT que se amplía utilizando los cebadores: PGIol U y PGlint L:

(PGIol U: 5TCATTT GATT GTT GCGCCTG3';

PGlint L: 5'CAATAACCCTAAAAGCACCTG3')

El BolJon marcador que se amplía utilizando los cebadores: BolJon U y BolJon L:

(BolJon U: 5'GATCCGATTCTTCTCCTGTTG3';

BolJon L: 5'GCCTACTCCTCAAATCACTCT3')

- El marcador CP418 que se amplía utilizando los cebadores: SG129 U y L pCP418:

(SG129 U: cf.Giancola et al., 2003 Theor. Appl. Genet. ( en imprenta ) pCP418 L: 51AATTTCTCCATCACAAGGACC3')

Otro objeto de la presente invención se refiere a los marcadores PGIol, PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418 cuyas secuencias son las siguientes:

marcador PGIol R2000:

TCATTTGATT GTTGCGCCTG TCGCCTTGTT GTGTTATGAT GAATGAACAG CAGTCATTTA 60

ACATGTGGTT AACTTAACAG GGCTCCGGCT GTTGCAAAAC ACATGGTTGC TGTCAGCACT 120

AATCTTGCGG TATGAATTTG TGATTAAATT TGTTTGTTTG TGACTCTTTC TTCATTGTTC 180

GTTTTCGTAC AATAAACCGA ATGTATAATC TTTTTACAAA CTGAATTTTC TACCGGGTCT 240

GATGTACA 248

marcador PGIUNT R2000:

TCATTTGATT GTTGCGCCTG TCGCCTTGTT GTGTTATGAT GAATGAACAG CAGTCATTTA 60 ACATGTGGTT AACTTAACAG GGCTCCGGCT GTTGCAAAAC ACATGGTTGC TGTCAGCACT 120 AATCTTGCGG TATGAATTTG TGATTAAATT TGTTTGTTTG TGACTCTTTC TTCATTGTTC 180 GTTTTCGTAC AATAAACCGA ATGTATAATC TTTTACAAAC TGAATTTTCT ACCGGGTCTG 240 ATGTACAATG CTAGTCTCCA TGTTCTTGGG GATCATGATT TATTTTCTAC ATGTATTCAG 300 ACAGTACAGA AGAAAGTGTT CAAAACTCTG GATGTTTTAA TTTACAGTTA GTGGAGAAGT 360 TCGGCATTGA TCCGAACAAT GCATTTGCAT TTTGGGACTG GGTTGGTGGA AGGTACAGTG 420 GTAAGTGCTT GTTTATTTGG TTGTATAAAT TTCTCGTCCA TTTCCGCTTG CTTAGTGTAT 480 AACTGAAATT CTTTTGCAGT TTGCAGTGCT GTTGGAGTCT TACCATTGTC TCTACAGTAT 540 GGCTTCTCTG TGGTTGAGAA GTACGGTACC TTCTACTTTA TCAGCCATCT CATAAAATGT 600 CTTAGGCATA TTCTTTCTAT TTTATTTCCC... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Composición de cinco marcadores, siendo dichos marcadores PGIol, PGIUNT, PGlint, BolJon y CP418, en la que el marcador PGIol presenta la secuencia de SEC ID n°: 1, el marcador PGIUNT presenta la secuencia de SEC ID n°:

2, el marcador PGlint presenta la secuencia de SEC ID n°: 3, el marcador BolJon presenta la secuencia de SEC ID

n°: 4, y el marcador CP418 presenta la secuencia de SEC ID n°:5.

2. Utilización de la composición de los cinco marcadores según la reivindicación 1, para detectar unas líneas restauradoras doble cero recombinadas de Brassica napus para la eme Ogura que presentan una introgresión de

rábano portadora del gen restaurador Rfo de la fertilidad masculina suprimido del alelo Pgi-2 de isoenzima de rábano y recombinado con el gen Pgi-2 de Brassica olerácea, y que presentan un buen valor agronómico de la fertilidad femenina, una buena tasa de transmisión de Rfo y un vigor vegetativo elevado.

3. Utilización según la reivindicación 2, que comprende ampliar dichos cinco marcadores según la reivindicación 1. 15


 

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