Diagnóstico y predicción precoces basados en la detección de IL-6 del síndrome de respuesta inflamatoria sistémica y sepsis en pacientes asintomáticos.

Método para la detección o diagnóstico del riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) o sepsis en un paciente humano asintomático tras un tratamiento invasivo,

comprendiendo dicho método las etapas de:

a) determinar el nivel de IL-6 o de una variante de la misma, que presenta una identidad de secuencia respecto a la molécula de la IL-6 humana de por lo menos 80% a lo largo de la longitud completa de la IL-6 humana en una muestra de sangre, plasma o suero aislada de un paciente después de dicho tratamiento invasivo,

b) comparar el nivel de IL-6 o de dicha variante de la misma determinada en la etapa a) con un nivel de referencia, en el que dicho nivel de referencia se calcula multiplicando un nivel de línea base de IL-6 por un factor de por lo menos 50, en el que dicho nivel de línea base se ha obtenido del paciente antes, durante o en las seis horas posteriores a dicho tratamiento invasivo, y

c) detectar o diagnosticar el riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) o sepsis,

en el que las etapas a) y b) se repiten para cada muestra, y en el que dichas muestras en la etapa a) se aísla a intervalos periódicos durante un periodo de entre 3 y 10 días, encontrándose comprendidos dichos intervalos entre 15 minutos +/- 20% y 12 horas +/- 20%, y

en el que el nivel determinado en la etapa a) superior al nivel de referencia indica que el paciente humano presenta un riesgo elevado de desarrollar SRIS o sepsis.

Diagnóstico y predicción precoces basados en la detección de IL-6 del síndrome de respuesta inflamatoria sistémica y sepsis en pacientes asintomáticos

A pesar de los avances de la medicina moderna, el SRIS y la sepsis representan un síndrome común y devastador de frecuencia creciente en todo el mundo. Es una de las causas más frecuentes de muerte entre pacientes bajo cuidados intensivos.

Las evaluaciones epidemiológicas han encontrado que varias condiciones pueden describirse como en riesgo de desarrollo de sepsis y sepsis grave. Los factores de riesgo descritos son género (hombre), raza (negra), etnicidad (hispana), edad avanzada y las comorbilidades siguientes: diabetes mellitus, neoplasias, alcoholismo, infección por VIH, tratamiento con agentes inmunosupresores (Hodgin K.E., Moss M., The epidmeiology of Sepsis, Current Pharm. Design 14:1833-1839, 28). Además, un suceso real, por ejemplo cirugía mayor, traumatismos o quemaduras que resultan en heridas en grandes superficies representan un riesgo adicional. El SRIS sin infección puede producirse en sucesos tales como la pancreatitis, el choque, la isquemia y los politraumatismos.

Desde el 1991, el American College of Chest Physicians (ACCP) y la Society of Critical Care Medicine (SCCM) ha proporcionado un marcado conceptual y práctico para definir la respuesta inflamatoria sistémica a la infección (American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine Consensus Conference: definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis, Crit. Care Med. 2(6):864-74, junio de 1992). Anteriormente se utilizaban intercambiablemente diversas terminologías, causando mucha confusión. La contribución principal de la conferencia fue el desarrollo de definiciones uniformes para los diversos estadios de la sepsis que pudiesen aplicarse universal e uniformemente a los pacientes que sufren de estos trastornos.

En el momento en que aparecen los signos clínicos, ya se ha iniciado el desarrollo y agravamiento del SRIS.

IL-6 pertenece a una familia de citoquinas gp 13. Todos los miembros de la familia comparten una estructura proteica de 4 hélices y ejercen su señalización mediante un complejo de receptores que contiene por lo menos una subunidad de la glucoproteína receptora transductora de señales gp13. IL-6 se une al receptor de IL-6 (IL-6R) en primer lugar y este complejo IL-6/IL-6R se une a gp13, conduciendo a una homodimerización y posterior activación de la ruta de transducción de señales de Jak/Stat y Ras/Map/Akt (Taga T., Kishimoto T. Gp13 and the lnterleukin-6 Family of Cytokines, Annu. Rev. Immunol. 15:797-819, 1997; Drucker C., Gewiese J., Malchow S., Scheller J., Rose- John S., Impact of lnterleukin-6 Classic- and Trans-signaling on Liver Damage and Regeneration, J. Autimm., 29, en prensa). Se han descrito dos rutas de señalización diferentes, una en la que IL-6 se une al receptor de IL-6 unido a membrana que conduce a la dimerización y activación de la proteína transductora de señales gp13. Esta ruta se encuentra restringida a las células que expresan el receptor de IL-6 sobre su superficie, lo que sólo se produce en algunas poblaciones celulares. Sin embargo, existe una ruta alternativa en la que IL-6 se une a un IL-6R soluble natural (IL-6R_s) y este complejo IL-6/IL-6R_s activa gp13. De esta manera, las células sin el receptor de IL-6 unido a membrana pueden responder a IL-6. Esta segunda ruta denominada de señalización trans también afecta a células que expresan receptores de IL-6 unidas a membrana, por ejemplo hepatocitos. En este contexto, la activación de la señalización trans de IL-6 puede incrementar los efectos de estimulación de IL-6. En 1988 se propuso denominar la citoquina IL-6, ya que algunos estudios adicionales demostraron que la proteína muestra actividades no sólo sobre las células B sino también sobre las células T, las células madre hematopoyéticas, hepatocitos y células cerebrales (Kishimoto T., Hirano T., A New Interleukin with Pleiotropic Activities, BioEssays 9(1 ):11-15, julio de 1988).

Ya en 1989 se había informado de que los líquidos corporales de pacientes con infección aguda local y el suero de los pacientes con bacteremia Gram-negativa y Gram-positiva contenía niveles elevados de IL-6 biológicamente activa. Se consideró que la presencia de IL-6 en el suero durante la infección aguda sugería que esta citoquina probablemente participaba en una cascada de sucesos locales y sistémicos que ayudaban a limitar el daño a los tejidos (Helfgott D.C., TatterS.B., Santhanam U., Clarick R.H., Bhardwaj N., May L.T., Sehgal P.B., Múltiple Forms of IFN-p2/IL-6 in Serum and Body Fluids during Acute Bacterial Infection, J. Immunology 142:948-953, 1989).

Las mediciones secuenciales de IL-6 en suero o plasma de pacientes ingresados en la UCI (unidad de cuidados intensivos) que ya presentaban signos clínicos de sepsis demostraron ser útiles en la evaluación de la gravedad del SRIS (síndrome de respuesta inflamatoria sistémica), la sepsis y el choque séptico y en la predicción del resultado clínicos de estos pacientes (Pinsky M.R., Vincent J.L., Alegre M., Dupont E., Serum Cytokine Levels in Human Septic Shock. Relation to Múltiple Organ Failure and Mortality, Chest 13:565-575, 1993; Oda S., Hirasawa H., Shiga H., Nakanishi K., Matsuda K., Nakamura M., Sequential measurements of IL-6 blood levels in patients with SIRS/sepsis, Cytokine 29:169-175, 25; Marti L., Cervera C., Filella X., Martin J.L., Almela M., Moreno A., Cytokine- release patterns in elderly patients with systemic inflammatory response syndrome, Gerontology 53(5):239-44, 27).

Mokart et al. (British Journal of Surgery 89:145-1456, 22) dan a conocer la determinación de IL-6 en muestras obtenidas antes de la cirugía y 1, 2, 3, 4 o 5 días después de la cirugía.

Mokart D. et al. (Br. J. Anaesth. 94(6):767-7, junio de 25) dan a conocer que, basándose en la detección de PCT e IL-6 en pacientes sometidos a cirugía para el cáncer, en la que se muestrea IL-6 durante la mañana previa a la cirugía además de la mañana después de la cirugía, es decir, un intervalo de tiempo superior a por lo menos 2 h. Basándose en las mediciones de PCT e IL-6 se predice la sepsis en pacientes que manifiestan SRIS y 1 día después de la cirugía, es decir, los niveles de IL-6 no permiten diagnosticar o predecir el riesgo de sufrir SRIS o sepsis en pacientes que no manifiestan síntomas de SRIS el día 1 después de la cirugía.

Mokart D. et al. (World J. Surgery 33:558-566, 29) dan a conocer un método de identificación de pacientes en riesgo de desarrollar sepsis basado en IL-6 y PCT con una muestra de sangre recogida una vez al día.

En resumen, ninguna de las publicaciones anteriormente indicadas permite un diagnóstico de SRIS y sepsis, o la predicción del riesgo de sufrir o desarrollar SRIS y sepsis, antes de la aparición de signos y síntomas clínicos generalmente reconocidos de SRIS y sepsis, es decir, en un paciente asintomático. En consecuencia, existe una necesidad de un método diagnóstico y un método de seguimiento del tratamiento que permitan una detección sensible y precoz de SRIS o sepsis y para predecir el riesgo de sufrir o desarrollar SRIS y sepsis antes de la aparición de los signos y síntomas clínicos de SRIS.

De acuerdo con lo anterior, uno de los objetivos subyacentes a la presente invención se encuentra en la provisión de un método que resuelva por lo menos una de las desventajas de los enfoques anteriormente conocidos para la predicción de SRIS y sepsis.

El problema se resuelve mediante el objeto de las reivindicaciones 1 a 7.

De acuerdo con lo anteriormente expuesto, la presente invención se refiere a un método para la detección o diagnóstico del riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) o sepsis en un paciente humano asintomático tras un tratamiento invasivo, comprendiendo dicho método las etapas de:

a) determinar el nivel de IL-6 o de una variante de la misma, que presenta una identidad de secuencia respecto a la molécula de la IL-6 humana de por lo menos 8% a lo largo de la longitud completa de la IL-6 humana en una muestra de sangre, plasma o suero aislada de un paciente después de dicho tratamiento invasivo,

b) comparar el nivel de IL-6 o de dicha variante de la misma determinada en la etapa a) con un nivel de referencia, en el que dicho nivel de referencia se calcula multiplicando un nivel de línea base de IL-6 por un factor de por lo menos 5, en el que dicho nivel de línea base se ha obtenido del paciente antes, durante o en las seis horas posteriores a dicho tratamiento invasivo, y

c) detectar o diagnosticar el riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria... [Seguir leyendo]

1. Método para la detección o diagnóstico del riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) o sepsis en un paciente humano asintomático tras un tratamiento invasivo, comprendiendo dicho método las etapas de:

a) determinar el nivel de IL-6 o de una variante de la misma, que presenta una identidad de secuencia respecto a la molécula de la IL-6 humana de por lo menos 8% a lo largo de la longitud completa de la IL-6 humana en una muestra de sangre, plasma o suero aislada de un paciente después de dicho tratamiento invasivo,

b) comparar el nivel de IL-6 o de dicha variante de la misma determinada en la etapa a) con un nivel de referencia, en el que dicho nivel de referencia se calcula multiplicando un nivel de línea base de IL-6 por un factor de por lo menos 5, en el que dicho nivel de línea base se ha obtenido del paciente antes, durante o en las seis horas posteriores a dicho tratamiento invasivo, y

c) detectar o diagnosticar el riesgo de desarrollar un síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) o sepsis,

en el que las etapas a) y b) se repiten para cada muestra, y en el que dichas muestras en la etapa a) se aísla a intervalos periódicos durante un periodo de entre 3 y 1 días, encontrándose comprendidos dichos intervalos entre 15 minutos +/- 2% y 12 horas +/- 2%, y

en el que el nivel determinado en la etapa a) superior al nivel de referencia indica que el paciente humano presenta un riesgo elevado de desarrollar SRIS o sepsis.

2. Método según la reivindicación 1, en el que el paciente humano asintomático es un paciente que manifiesta menos de 2, preferentemente menos de 1 síntoma de entre a) a d) a continuación, preferentemente de entre a) a e) a continuación:

a) recuento de glóbulos blancos superior a 12./pl +/- 2% o inferior a aproximadamente 4./pl +/-2%,

b) temperatura corporal superior a 38°C +/- 2% o inferior a 36°C +/- 2%,

c) tasa cardíaca superior a 9 latidos/minuto +/- 2% o una presión parcial de C2 inferior a aproximadamente 32 mmHg +/- 2%, y

d) tasa respiratoria superior a 2 respiraciones/minuto +/- 2%,

e) más de 1% de glóbulos blancos inmaduros entre los glóbulos blancos en el recuento, opclonalmente el paciente no manifiesta una Infección diagnosticada.

3. Método según la reivindicación 1 o 2, en el que el intervalo habitual es de entre 1 y 6 horas +/- 2%, preferentemente es de entre 1 hora +/- 2% y 3 horas +/- 2%.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el nivel de referencia se obtiene multiplicando el nivel de línea base de IL-6 o de dicha variante del mismo por un factor de por lo menos 1 +/- 2%, preferentemente por un factor de por lo menos 5 +/- 2% o por un factor de por lo menos 1. +/- 2%.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de IL-6 o de de dicha variante de la misma en la muestra se determina con un anticuerpo que se une a IL-6, o con un fragmento Fav, Fab o F(ab)2 del mismo.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el paciente humano asintomático es un paciente que se somete a un intervención quirúrgica.

7. Utilización de un anticuerpo que se une a IL-6, o un fragmento Fv, Fab o F(ab)2 del mismo, en un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.