Diagnóstico de linfoma de linfocitos B.

Un procedimiento para el diagnóstico de un linfoma de linfocitos B,

caracterizado por la detección de aberraciones genéticas del gen NAV3 en una muestra biológica, indicando la presencia de aberraciones un linfoma de linfocitos B.

Diagnóstico de linfoma de linfocitos B Campo de la invención

La presente invención se refiere a los campos de la genética y la oncología y proporciona procedimientos y medios para el diagnóstico y seguimiento de pacientes que tienen linfomas de linfocitos B, tales procedimientos y medios permiten un diagnóstico precoz del linfoma de linfocitos B. Específicamente la invención se refiere a un nuevo procedimiento y un biomarcador para diagnosticar linfomas de linfocitos B y para diferenciar los linfomas de linfocitos B en grupos de pronóstico de linfomas de linfocitos B indolentes y agresivos.

Antecedentes de la invención

El concepto actual del desarrollo del cáncer incluye el desarrollo de la inestabilidad cromosómica, aneuploidía y una serie de aberraciones genéticas adquiridas que afectan genes importantes para el crecimiento y la supervivencia de la célula. Se ha sugerido que las células madre tienen un papel crítico en el desarrollo del cáncer, y que la regulación epigenética es relevante para la expresión genética asociada con pluripotencia. También las aberraciones genéticas únicas pueden tener influencia en el proceso completo de la patogénesis, y además, pueden ser útiles como marcadores de cáncer. Durante los pasados años se han encontrado aberraciones genéticas adquiridas en varios cánceres (por ejemplo HER/neu en cáncer de mama) y los ensayos citogenéticos moleculares basados en estos genes se encuentran en el mercado y son de uso rutinario en el diagnóstico de cáncer en los laboratorios clínicos.

Los linfomas son cánceres del tejido linfoide. Comprenden un grupo de cánceres heterogéneos, divididos en linfomas no Hodgkin (NHL) y linfomas de Hodgkin (HL). Hay más de 4 subgrupos, dependiendo del tipo y madurez de la célula linfoide maligna subyacente. El NHL se origina habitualmente en tejidos linfoides y se puede clasificar como linfoma de linfocitos T o linfocitos B. La mayoría de los NHL (es decir, el 8-9%) son de origen de linfocitos B. Los linfomas no Hodgkin de linfocitos B incluyen el linfoma de Burkitt, el linfoma difuso de linfocitos B grandes, el linfoma folicular, linfoma de células ¡nmunoblásticas grandes, linfoma linfoblástico precursor B, y el linfoma de células del manto. Los linfomas no Hodgkin de linfocitos T incluyen micosis fungoides, linfoma de células anaplásicas grandes, y linfoma linfoblástico precursor T. Los linfomas relacionados con los trastornos linfoproliferativos después del trasplante de médula ósea o células madre son normalmente linfomas no Hodgkin de linfocitos B.

El pronóstico del NHL depende del tipo histológico, estadio, y tratamiento. Basándose en estas variables, los NHL se pueden dividir en dos grupos pronósticos: los linfomas indolentes y los linfomas agresivos. Los tipos de linfoma NHL indolente tienen un pronóstico relativamente bueno pero no son curables en estadios avanzados. La mayoría de los tipos indolentes son de morfología nodular (o folicular). El linfoma folicular (FL) es con mucho el más común de los NHL indolentes y representa casi el 25% de todos los nuevos casos de NHL. El tipo de NHL agresivo (por ejemplo el linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL)) tiene una expectativa de vida más corta. Con el tratamiento moderno de los pacientes con NHL, la supervivencia total a los 5 años es del 5% al 6% aproximadamente. De los pacientes con NHL agresivo, del 3% al 6% se pueden curar pero la gran mayoría de recaídas se producen en los primeros 2 años tras la terapia.

La incidencia de los distintos linfomas aumenta continuamente y actualmente es alrededor de 363. nuevos casos anualmente por todo el mundo.

En el tratamiento de los linfomas, es crucial un diagnóstico precoz, debido a que la enfermedad tiende a recidivar en estados más tardíos. En el diagnóstico de linfoma, se obtiene una biopsia de un ganglio linfático y se lleva a cabo un análisis histopatológico. El tipo de linfoma se puede identificar por la apariencia física de las células cancerosas bajo el microscopio o por la utilización de marcadores que identifican moléculas especiales de las células de linfoma. La graduación del linfoma folicular se basa en el número medio de células grandes transformadas en 1 folículos neoplásicos en un campo de examen de alta potencia a x1-4. La reproductibilidad de la graduación del linfoma folicular depende de la experiencia del observador; por lo tanto, se producen variaciones significativas.

Actualmente, no hay biomarcadores biológicos moleculares disponibles en el ámbito clínico para identificar pacientes con NHL lo antes posible, o para identificar pacientes en los que persisten clones celulares malignos a pesar de una terapia clínicamente eficaz.

Frecuentemente se ven aberraciones cromosómicas en los linfomas y bastante a menudo tales aberraciones se producen en la región 12q (Bea y col., 1996, Benz y col., 1996, Horsman y col, 21, Hernández y col., 21, Lestou y col., 23, Chui y col., 23, Hallerman y col., 24). La anormalidad cromosómica más común que se asocia con el NHL es la translocación t( 14; 18)(q32;q21) que se encuentra en el 85% de los linfomas foliculares y en el 25-3% de NHL de grado intermedio. Esta translocación da como resultado la yuxtaposición del oncogén inhibidor apoptótico bel-2 en la banda cromosómica 18q21 a la región de cadena pesada del locus de ¡nmunoglobulina (Ig) en la banda cromosómica 14q32, lo que da como resultado su sobre-expresión. La translocación t( 11; 14)(q 13;q32) da como resultado la sobre-expresión de bel-1 (ciclina-D1 IPRAD1), un gen de control de ciclo celular en la banda

cromosómica 11 q13, y es diagnóstico del linfoma de células del manto. En los linfomas foliculares se ha revelado un aumento de la frecuencia de ganancia cromosómica que implica al cromosoma 12 entre otros, por análisis MFISH (Benz y col., 1996, Horsman y col., 21, Lestou y col., 23), y se observó el aumento de expresión genética de las bandas cromosómicas con ganancia, que Incluyen el gen SAS en 12q 13-q 14 (Lestou y col., 23). Se considera que los acontecimientos de translocación son responsables primariamente del Inicio de la enfermedad FL, mientras que las ganancias y pérdidas cromosómicas desequilibradas (que también reflejan los patrones de expresión genética) caracterizan la evolución de los clones y la progresión de la enfermedad. En consecuencia, se ha demostrado que la eliminación (17p) y la ganancla/ampllflcaclón del cromosoma 12 se correlacionan con un resultado clínico adverso o la trasformación en linfoma difuso de células grandes (DLCL) (Martinez-Cllment y col., 23, Hóglund y col., 24). Hasta ahora, sin embargo, se desconoce cuál gen o genes son los que están afectados por los cambios cromosómlcos en el cromosoma 12 mencionados anteriormente.

Recientemente, se demostró que un nuevo gen NAV3 supuesto supresor tumoral está eliminado/ translocado en la mayoría de los tipos de linfoma de linfocitos T cutáneos comunes (CTCL) (Karenko y col., 25, documento WO366898). En los linfomas de linfocitos B, se han descrito aberraciones en Bcl-2, CD2, PAX-5, y BCL-6 pero no han conseguido aplicaciones clínicas amplias.

Por lo tanto, están justificados los nuevos biomarcadores para proporcionar diagnósticos más eficaces y precoces de linfomas de linfocitos B susceptibles de terapias dirigidas. Se necesitan también nuevos marcadores para diferenciar linfomas.

Breve descripción de la invención

La invención se define por las reivindicaciones adjuntas.

El objeto de la invención por tanto es proporcionar nuevos procedimientos y medios para el diagnóstico y seguimiento de pacientes que tienen síntomas de linfoma de linfocitos B, permitiendo tales procedimientos y medios un diagnóstico precoz y específico del linfoma de linfocitos B e identificando linfomas de linfocitos B susceptibles a las terapias dirigidas.

Otro objeto de la invención es proporcional nuevos procedimientos y medios que permitan la identificación prematura de pacientes con un aumento del riesgo de desarrollar un linfoma agresivo y así posibilitar una prevención eficaz del cáncer.

Un objeto más de la invención es proporcionar nuevos procedimientos y medios para el desarrollo de nuevas directrices para el seguimiento de intervenciones terapéuticas. También se describe en el presente documento, aunque no se reivindica, el desarrollo de nuevas modalidades de tratamiento para los linfomas de linfocitos B, tales procedimientos y medios prolongan el estadio de remisión de la enfermedad e introducen nuevas posibilidades para combatir la enfermedad y para la recuperación del paciente.

Otro objeto de la invención es proporcionar nuevos procedimientos y medios para diferenciar linfomas de linfocitos B en grupos... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para el diagnóstico de un linfoma de linfocitos B, caracterizado por la detección de aberraciones genéticas del gen NAV3 en una muestra biológica, indicando la presencia de aberraciones un linfoma de linfocitos B.

2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque las aberraciones genéticas son

cambios en el número de copias del gen NAV3.

3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la pérdida o ganancia de NAV3 permite la diferenciación de los linfomas de linfocitos B en grupos de pronóstico.

4. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que los grupos de pronóstico son las formas indolente 1 y agresiva de linfomas de linfocitos B.

5. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las aberraciones se determinan por hibridación fluorescente in situ (FISH).

6. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el linfoma de linfocitos B es un linfoma folicular.

7. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el

linfoma de linfocitos B es un linfoma difuso de linfocitos B grandes.

8. El uso del gen NAV3 como un biomarcador para los linfomas de linfocitos B.

9. El uso según la reivindicación 8, caracterizado porque la pérdida o ganancia del gen NAV3 es un marcador de la malignidad del linfoma de linfocitos B.