Composición acuosa de lactoferrina estable térmicamente y su preparación y uso.

Composición acuosa que contiene lactoferrina, 35 - 70 % en peso de estabilizadores de carbohidrato y/o poliol,

en base al peso total de la composición acuosa, dicha composición muestra un pH superior a 2, inferior a 5.

Composición acuosa de lactoferrina estable térmicamente y su preparación y uso

Campo de la invención 5

La presente invención pertenece a un método para calentar lactoferrina sin que pierda actividades fisiológicas, y alargar su tiempo de almacenamiento en formulaciones líquidas. Más particularmente, la presente invención se refiere a un método para calentar lactoferrina en condiciones ácidas hasta llegar a una temperatura superior a 60 °C. La invención también pertenece al uso de la lactoferrina así tratada. 10

Antecedentes de la invención

La lactoferrina es conocida como una proteína enlazante de hierro distribuida en lágrima, saliva, sangre periférica, leche y similares. Se ha conocido que la lactoferrina tiene diferentes actividades fisiológicas, por ejemplo, 15 actividad antibacteriana contra bacterias nocivas, actividad para promover la absorción de hierro en el intestino, actividad anti-inflamatoria, etcétera. Una revisión de la utilidad de lactoferrina se da en el documento US-A-2007/161541.

Por lo tanto es deseable la adición de lactoferrina a alimentos, alimentos procesados, medicinas, cosméticos 20 y similares o la ingesta directa como suplemento. Estos productos generalmente necesitan ser tratados térmicamente, por ejemplo pasteurizados o esterilizados, para hacerlos seguros a nivel microbiano y estables en el almacenamiento durante más tiempo.

No obstante, si no se toma ninguna de las medidas, la lactoferrina se mostrará inestable térmicamente, y el 25 tratamiento térmico de la lactoferrina puede suponer la desnaturalización de la lactoferrina a pH fisiológico. Se dice en la técnica que las actividades fisiológicas de la lactoferrina casi se pierden al calentarla a 62, 5°C durante 30 minutos, y la desnaturalización completa se produce al calentarla a 70°C durante 15 minutos.

Como queda claro anteriormente, el tratamiento térmico suficiente podría no aplicarse a la lactoferrina como 30 ingrediente para la utilización de sus actividades fisiológicas. Se tiene que someter a esterilización a una formulación líquida o una solución madre de lactoferrina, para obtener un tiempo de almacenamiento mayor (varias semanas o meses antes del consumo) .

Ambos documentos EP 454, 084 y EP 1, 040, 766 divulgan bebidas de lactoferrina enriquecidas con hierro. La 35 fortificación con hierro es necesaria para personas con un cambio anémico, mujeres embarazadas o madres nodriza.

Aunque puede no ser mencionado explícitamente en ellos, el experto en la materia reconoce inmediatamente el efecto de la saturación de hierro en la recuperación de la lactoferrina que se pretende en los EP'084 y EP'766. Según Brisson et al. "Effect of iron saturation on the recover y of lactoferrin in rennet whey coming from heat-treated 40 skim milk" J. Dair y Sci. 90: 2655-2664, la lactoferrina se asocia con hierro, este complejo mejora su termoestabilidad. No obstante, el uso de hierro en campos nutricionales no es deseable frecuentemente, por ejemplo desde el punto de vista del sabor. Además, el complejo de hierro puede añadir estabilidad de la lactoferrina, pero la desnaturalización aún puede ocurrir conforme pasa el tiempo. Por lo tanto, existe una necesidad de métodos adicionales y mejorados para conseguir la estabilización térmica. 45

El documento GB 2, 361, 703 divulga la estabilización de la vitamina B12 y/o ácido fólico mediante la asociación de éstos con lactoferrina, aumentando así el tiempo de conservación del ácido fólico y vitamina B12, de lo contrario muestran calor y estabilidad de almacenamiento bajos en presencia de oxígeno. La lactoferrina se usa de cualquier fuente, incluyendo lactoferrinas estabilizadas con hierro. No obstante, si se mira desde una perspectiva 50 diferente, es decir buscando maneras de estabilizar lactoferrina, la solución para enlazarla a ácido fólico y vitamina B12 para su uso en productos alimenticios es indeseable. Estos compuestos son costosos, interfieren en todo tipo de vías metabólicas; relacionado con ello, la administración de estos compuestos a la gente no es ilimitada.

Para dirigir su estabilidad al calor, en el documento EP-A-437, 958, a nombre de Morinaga Milk Industr y , se 55 sugiere calentar lactoferrina a una temperatura superior a 60°C a un pH entre 1, 0 - 6, 5. De los resultados de la cromatografía en fase líquida enumerados en la tabla 1, se concluye que la lactoferrina es estable cuando se calienta durante 5 minutos a 60 °C bajo condiciones ácidas. La misma tabla también muestra que la ventana de éxito se restringe espectacularmente cuando se aumenta la temperatura a 70, 80, 90 o incluso 100 °C. Por encima de 100 °C, toda lactoferrina se desnaturaliza. Todas las mediciones se toman poco después del tratamiento térmico. El 60 documento EP-A-437, 958 no se pronuncia en cuanto a la estabilidad de la lactoferrina en el tiempo y temperatura de almacenamiento.

En un intento de reproducir los resultados proporcionados en el documento EP-A-437, 958, los inventores descubrieron que la HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento por sus siglas en inglés) es de hecho 65 inapropiada para determinar el grado de desnaturalización. Se ha descubierto que una mejor técnica implica la FPLC

(cromatografía líquida de rendimiento rápido por sus siglas en inglés) y/o ELISA, y que la HPLC sobreestima fácilmente el grado de "desnaturalización". Por lo tanto, los resultados en la tabla 1 del documento EP-A-437, 958 en realidad no son tan buenos como se reivindica. Además, se ha descubierto que la lactoferrina termoestable en el documento EP-A-437, 958, si se llega a conseguir, duró poco tiempo. La desnaturalización aún ocurría durante semanas bajo un tiempo de almacenamiento prolongado bajo ciertas temperaturas. El documento EP-A-437, 958 5 mismo no se pronuncia en cuanto al efecto del tratamiento térmico sobre la tiempo de almacenamiento. Además, el éxito limitado del método defendido por Morinaga disminuye espectacularmente cuando se alargan los tiempos de calentamiento. De hecho esto se reconoce en la patente nombrada misma. Las observaciones en este párrafo se basan en los ejemplos comparativos que anexos a la presente invención. Finalmente, los presentes inventores observaron que el método del documento EP-A-437, 958 produce lactoferrina acuosa que contiene composiciones 10 que son sólo estables durante periodos de tiempo más largos si se mantienen a 7° C o menos, así que necesitan un sistema de refrigeración.

En conclusión, la presunta estabilidad térmica de la lactoferrina mediante el tratamiento térmico en condiciones ácidas conforme al documento EP-A-437, 958 es bastante limitada, ya que las líneas de producto en la 15 práctica implican frecuentemente combinaciones más severas de tiempo y temperatura de calentamiento, en la pasteurización. Frecuentemente se usa agua en ebullición, y especialmente en los tiempos de calentamiento de producción en lote se puede alargar fácilmente. Además, si esto debe requerirse para mantener la composición de lactoferrina acuosa estable durante más tiempo, por ejemplo meses, implica sistemas de refrigeración costosos y difíciles de operar logísticamente. Muchas aplicaciones o formulaciones nutricionales que contienen lactoferrina 20 deberían tener un tiempo de almacenamiento de semanas, incluso meses. El método anterior no puede cumplir esta condición.

Los inventores de la presente invención se han esforzado para desarrollar un método mejorado para calentar lactoferrina sin perder sus actividades fisiológicas, y dando como resultado una lactoferrina tratada térmicamente 25 que permanece estable durante periodos de tiempo alargados, incluyendo temperaturas de almacenamiento por encima de 7°C. Además, los inventores querían evitar restringirse a asociar lactoferrina con hierro o compuestos tales como vitamina B12 y ácido fólico.

Resumen de la invención 30

Es objeto de la presente invención proporcionar un método para el tratamiento térmico de lactoferrina (LF) sin que pierda actividades fisiológicas, tales como actividad antibacteriana, actividad enlazante de hierro, antigenicidad. Tal método de estabilización térmica debería mantenerse durante tiempos de calentamiento alargados y a temperaturas altas, y la lactoferrina resultante debería permanecer estable durante tiempos alargdos, en términos de 35 semanas o incluso meses.

Es también objeto proporcionar un método para calentar lactoferrina que produce la estabilización térmica de la lactoferrina en el almacenamiento durante periodos alargados a temperaturas más altas, por encima de 7 °C.

Se ha descubierto que estos objetos se consiguen si la lactoferrina se calienta bajo condiciones ácidas... [Seguir leyendo]

1. Composición acuosa que contiene lactoferrina.

35. 70 % en peso de estabilizadores de carbohidrato y/o poliol, en base al peso total de la composición acuosa, dicha composición muestra un pH superior a 2, inferior a 5.

2. Composición según la reivindicación 1, que se ha sometido a una temperatura de al menos 60 °C.

3. Composición según la reivindicación 2, que ha sido esterilizada o hervida.

4. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dichos estabilizadores de carbohidrato 10 y/o poliol se seleccionan del grupo consistente en monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, tetrasacáridos, pentasacáridos, hexasacáridos, oligosacáridos, manitol, galactitol, inositol, xilitol, sorbitol, glicerol y lactitol, y sus mezclas derivadas.

5. Composición según la reivindicación 4, dicho estabilizador de carbohidrato contiene al menos el 45% de 15 monosacáridos de glucosa y fructosa.

6. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicha lactoferrina está presente en una cantidad de 0, 05 - 20% en peso, en base al peso total de la composición acuosa.

7. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que muestra un pH en el rango de 2, 5 - 4.

8. Método de estabilización de lactoferrina con calor, a) proporcionando una composición acuosa que contiene lactoferrina.

35. 70% en peso de estabilizadores de carbohidrato y/o poliol, en base al peso total de la composición acuosa, dicha composición muestra un pH superior a 2, inferior a 5, y donde dicha composición excluye geles, y b) 25 sometiendo dicha composición acuosa a un tratamiento térmico.

9. Método según la reivindicación 8, donde dicho tratamiento térmico implica una temperatura de al menos 60 °C.

10. Uso de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 7 o la composición obtenida mediante el 30 método según cualquiera de las reivindicacione.

8. 9 en alimentos (saludables) , comida para animales, suplementos nutricionales, cosméticos o medicinas.

11. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 7 o composición obtenida mediante el método según cualquiera de las reivindicacione.

8. 9 para su uso en el tratamiento (profiláctico) del acné. 35

12. Alimento, comida para animales, suplemento nutricional, cosmético o producto médico que contiene lactoferrina estabilizada térmicamente mediante el método según cualquiera de las reivindicacione.

8. 9.

13. Alimento, comida para animales, suplemento nutricional, cosmético o producto médico según la reivindicación 40 12, que contiene lactoferrina en una cantidad de 0, 05 - 10% en peso, en base al peso total.

14. Equipo de partes que comprenden: i) una formulación líquida que contiene lactoferrina estabilizada térmicamente mediante el método según cualquiera de las reivindicacione.

8. 9, y ii) una composición alimentaria líquida, preferiblemente una fórmula infantil. 45