Citoblastos atrapados y usos de los mismos.

Un método in vitro para inhibir la proliferación de al menos una parte de una población de células no atrapadas,

que comprende cultivar dicha población de células en presencia de una composición de materia que comprende una muestra de embriocitoblastos no humanos atrapados en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que el atrapamiento de dicha muestra de embriocitoblastos no humanos inhibe la proliferación de al menos una parte de los embriocitoblastos no humanos atrapados, en el que dicha población de células no atrapadas no se derivó usando embriones humanos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/025713.

Solicitante: THE ROGOSIN INSTITUTE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 505 East 70th Street New York, NY 10021 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: RUBIN, ALBERT L., SMITH, BARRY, STENZEL, KURT, CONN,BRYAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01N1/02 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01N CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES O DE PARTES DE ELLOS (conservación de alimentos o productos alimenticios A23 ); BIOCIDAS, p. ej. EN TANTO QUE SEAN DESINFECTANTES, PESTICIDAS O HERBICIDAS (preparaciones de uso médico, dental o para el aseo que eliminan o previenen el crecimiento o la proliferación de organismos no deseados A61K ); PRODUCTOS QUE ATRAEN O REPELEN A LOS ANIMALES; REGULADORES DEL CRECIMIENTO DE LOS VEGETALES (mezclas de pesticidas con fertilizantes C05G). › A01N 1/00 Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes de ellos. › Conservación de partes vivas.
  • A61K35/14 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sangre; Sangre artificial (perfluorocarbonos A61K 31/02; sangre del cordón umbilical A61K 35/51; hemoglobina A61K 38/42).
  • A61K35/48 A61K 35/00 […] › Organos de reproducción.
  • A61K48/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
  • C12N5/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00).
  • C12N5/071 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos de vertebrados, p.ej. células o tejidos humanos.
  • C12N5/074 C12N 5/00 […] › Células madre adultas.
  • C12N5/0789 C12N 5/00 […] › Células madre; Células progenitoras multipotentes.

PDF original: ES-2537755_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Citoblastos atrapados y usos de los mismos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método in vitro para inhibir la proliferación de al menos una parte de una población de células no atrapadas, en el que dicha población de células no atrapadas no se derivó usando embriones humanos. Las células atrapadas, cuando se cultivan en el material de atrapamiento, producen un producto que, cuando está en contacto con otras células que crecen libremente no atrapadas in vitro o in vivo, inhibe su proliferación. Además, el atrapamiento de los citoblastos actúa inhibiendo la proliferación de al menos algunos de los citoblastos atrapados, y puede inhibir la diferenciación de al menos una parte de los citoblastos atrapados.

La invención se refiere además a:

el uso de un medio para la fabricación de un medicamento para tratar trastornos proliferativos de células, un método in vitro para inhibir la proliferación de una población no atrapada de embriocitoblastos no humanos, y un método in vitro para inhibir la diferenciación de al menos una parte de una población de embriocitoblastos no humanos.

Antecedentes y estado de la técnica

El atrapamiento de materiales biológicos, tales como células, es una técnica que se ha usado para diversos fines. A modo de ejemplo de la bibliografía de patentes en esta área están las patentes de EE.UU. nº 6.303.151 (Asina, et al.) ; 6.224.912 (Asina, et al.) ; 5.888.497 (Jain, et al.) ; 5.643.569 (Jain, et al.) y RE38.027 (Jain, et al.) .

Esta familia de patentes relacionadas muestra que las células cancerosas e islotes pueden quedar atrapados en una matriz biocompatible, tal como agarosa, mezclas de agarosa/colágeno y mezclas de agarosa/gelatina, y entonces recubrirse con agarosa. Las células atrapadas resultantes producen materiales que, entre otros, difunden fuera de las matrices biocompatibles permeables en las que están retenidas, y tienen propiedades biológicas útiles. En el caso de los islotes, se produce insulina. En el caso de células cancerosas, el material difunde de la matriz, y este material tiene un efecto sobre el crecimiento y proliferación de células cancerosas. Como mostrará la revisión de las patentes '912 y '151, citada arriba, este efecto cruza especies, es decir, células cancerosas atrapadas o encapsuladas de una especie dada producen material que inhibe el crecimiento y/o proliferación de células cancerosas de otras especies, además de las especies de las que se originaron las células cancerosas.

Ejemplos adicionales de técnicas de atrapamiento incluyen, por ejemplo, las patentes de EE.UU. nº

5.227.298 (Weber, et al.) ; 5.053.332 (Cook, et al.) ; 4.997.443 (Walthall, et al.) ; 4.971.833 (Larsson, et al.) ; 4.902.295 (Walthall, et al.) ; 4.798.786 (Tice, et al.) ; 4.673.566 (Goosen, et al.) ; 4.647.536 (Mosbach, et al.) ; 4.409.331 (Lim) ;

4.392.909 (Lim) ; 4.352.883 (Lim) ; y 4.663.286 (Tsang, et al.) .

El atrapamiento no siempre produce un impacto positivo sobre las células atrapadas. Por ejemplo, véanse 45 Lloyd-George, et al., Biomat. Art. Cell & Immob. Biotech., 21 (3) :323-333 (1993) ; Schinstine, et al., Cell Transplant, 41 (1) :93-102 (1995) ; Chi-cheportiche, et al., Diabetologica, 31:54-57 (1988) ; Jaeger, et al., Progress In Braid Research, 82:41-46 (1990) ; Zekorn, et al., Diabetologica, 29:99-106 (1992) ; Zhou, et al., Am. J Physiol., 274:C13561362 (1998) ; Darquy, et al., Diabetologica, 28:776-780 (1985) ; Tse, et al., Biotech. & Bioeng., 51:271-280 (1996) : Jaeger, et al., J Neurol., 21-469-480 (1992) ; Hortelano, et al., Blood, 87 (12) :5095-5103 (1996) : Gardinar, et al., Transp. Proc., 29:2019-2020 (1997) .

Ninguna de las referencias tratadas arriba trata la clase de células conocidas como citoblastos, que incluye embriocitoblastos. El documento US 2003/0119107 enseña la encapsulación de embriocitoblastos para formar esferoides. Weber M et al., Biomateriales, vol. 23, p 2003-2013, 2002, describen la encapsulación de células de una 55 línea de citoblastos mesenquimatosos de ratón en alginato purificado. 1 ml de alginato al 0, 5 por ciento es suficiente para una producción de aproximadamente 15.000 perlas que contiene cada una aproximadamente 50 células. Además, Citrone P et al., Human Gene Therapy, vol. 13, p 1157 -1166, 2002, desvelan el uso de microcápsulas que contienen células de una línea de células de mioblasto de ratón genéticamente modificada para secretar interleucina 2 ligada a una región de un anticuerpo humanizado con afinidad por un antígeno de la superficie tumoral. Las células encapsuladas se usan para la inhibición de la progresión tumoral.

Una definición de citoblastos, avanzada por Reya, et al., Nature, 414:105-111 (2001) , se refiere a citoblastos como células que tienen la capacidad de perpetuarse mediante auto-renovación y de generar células maduras de tejidos particulares mediante diferenciación. Pueden obtenerse diferentes tipos de citoblastos, que 65 incluyen neurales, hematolinfoides, mieloides, y otros tipos de citoblastos de diversos órganos. Todos estos tienen la posibilidad de desarrollarse en órganos o tejidos específicos. Determinados citoblastos, tales como los

embriocitoblastos, son pluripotentes, porque su ruta de diferenciación no se ha determinado en absoluto, y pueden desarrollarse en diversos órganos y tejidos.

Las discusiones de los diversos usos terapéuticos a los que los citoblastos pueden exponerse son muy conocidas, y no necesitan tratarse en este documento. Merece la pena mencionar, ya que pesa sobre la invención descrita en el presente documento, que los citoblastos son muy poco comunes, su purificación y separación de otros tipos de células es laboriosa y difícil, y los citoblastos se diferenciarán en célula madura a menos que se traten de alguna forma para prevenir esto.

Ahora se ha encontrado que los procedimientos de atrapamiento, en línea con los desvelados por Jain et al. y Iwata et al., Journ. Biomedical Material y Res., 26:967 (1992) , afectan a los citoblastos de una forma muy deseable. Para la elaboración, los citoblastos atrapados producen materiales que inhiben la proliferación de diversos tipos de células, que incluyen citoblastos y células cancerosas. El efecto de este material cruza líneas de especies. Además, se ha encontrado que los citoblastos, cuando se atrapan como se describe en el presente documento, retienen sus capacidades de diferenciación, que incluyen su pluripotencialidad, durante un periodo de tiempo indefinido.

Estas características, además de otras, se observarán en la divulgación que sigue ahora.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

Según la presente invención, se proporciona:

Un método in vitro para inhibir la proliferación de al menos una parte de una población de células no atrapadas 25 según la reivindicación 1, [0013] Una composición de materia de la reivindicación 1 para su uso en un método según la reivindicación 8, [0014] Un método in vitro para inhibir la proliferación de una población de células no atrapadas según la reivindicación 15, [0015] Uso de un medio para el fabricante de un medicamento para tratar trastornos proliferativos de células según la reivindicación 20, [0016] Un método in vitro para inhibir la proliferación de una población no atrapada de embriocitoblastos no humanos según la reivindicación 22, [0017] Un método in vitro para inhibir la proliferación de embriocitoblastos no humanos no atrapados según la reivindicación 25, y [0018] Un método in vitro para inhibir la diferenciación de al menos una parte de una población de embriocitoblastos no humanos según la reivindicación 28.

Ejemplo 1

Se obtuvieron dos líneas de embriocitoblastos (ES) murinos diferentes (es decir, ES-D3 y SCCPSA1, que están ambas públicamente disponibles) de la Colección Americana de Cultivos Tipo ("ATCC") .

Ambas líneas se cultivaron bajo condiciones de cultivo estándar, que incluyeron crecimiento como una monocapa, encima de células alimentadoras de fibroblastos embrionarios "STO". Éstas también se obtuvieron de la ATCC. Los citoblastos se cultivaron en medio DMEM que se había complementado con 100 % de suero bovino fetal limitado para ES, factor inhibidor de la leucemia (LIF) y p-mercaptoetanol (conjuntamente, "medio A") . Las células, que se criopreservaron cuando se recibieron, se descongelaron y se establecieron como cultivos después de al menos 3 pases antes de cultivarse como se ha descrito, arriba.

Después de tres días, las células ES fueron confluentes al 70-80 %, y se tripsinaron y a continuación se atraparon en perlas de agarosa, se recubrieron con agarosa, según... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método in vitro para inhibir la proliferación de al menos una parte de una población de células no atrapadas, que comprende cultivar dicha población de células en presencia de una composición de materia que comprende una muestra de embriocitoblastos no humanos atrapados en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que el atrapamiento de dicha muestra de embriocitoblastos no humanos inhibe la proliferación de al menos una parte de los embriocitoblastos no humanos atrapados, en el que dicha población de células no atrapadas no se derivó usando embriones humanos.

2. El método in vitro de la reivindicación 1, en el que dicha población de células es una población de citoblastos con la condición de que no sea una población de embriocitoblastos humanos.

3. El método in vitro de la reivindicación 1, en el que dicha población de células es de una especie diferente de la

especie de origen de las células atrapadas en dicha composición de materia, o en el que dicha población de células 15 es de la misma especie que la especie de origen de las células atrapadas en dicha composición de materia.

4. El método in vitro de la reivindicación 1, en el que dicha población de células es una población de células cancerosas.

5. El método in vitro de la reivindicación 1, en el que dicha población de células es una población de células de mamífero.

6. El método in vitro de la reivindicación 1, en el que dicha población de células es una población de células

hiperproliferativas. 25

7. El método in vitro de la reivindicación 5, en el que dicha población de células de mamífero es una población de células humanas, o una población de células murinas.

8. Una composición de materia que comprende una muestra de embriocitoblastos no humanos atrapados en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en la que el atrapamiento de dicha muestra de embriocitoblastos no humanos inhibe la proliferación de al menos una parte de los embriocitoblastos no humanos atrapados, para su uso en un método de tratamiento de trastornos proliferativos de células.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que dicha población de células es una población de citoblastos, o en el que

dicha población de células comprende células neoplásicas, o en el que dicha población de células es una población de células hiperproliferativas.

10. El uso de la reivindicación 8, en el que las células atrapadas en dicha composición de materia son de una especie diferente de dicho sujeto.

11. El uso de la reivindicación 8, en el que las células atrapadas en dicha composición de materia son de la misma especie que dicho sujeto.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que dichas células son autólogas para dicho sujeto. 45

13. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho sujeto es un ser humano.

14. El uso de la reivindicación 11, en el que dicho sujeto es un ser humano.

15. Un método in vitro para inhibir la proliferación de una población de células no atrapadas, que comprende cultivar una composición de materia que comprende una muestra de embriocitoblastos no humanos atrapados en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que el atrapamiento de dicha muestra de embriocitoblastos no humanos inhibe la proliferación de al menos una parte de los embriocitoblastos no humanos atrapados, en un medio durante un tiempo suficiente para permitir la difusión de un material inhibidor de la

proliferación celular en dicho medio, y poner en contacto dicho medio con dicha población de células no atrapadas durante un tiempo suficiente para inhibir la proliferación de dicha población de células no atrapadas, en el que dicha población de células no atrapadas no se derivó usando embriones humanos.

16. El método in vitro de la reivindicación 15, en el que dicha población de células no atrapadas es una población de citoblastos con la condición de que no sea una población de embriocitoblastos humanos.

17. El método in vitro de la reivindicación 15, en el que dicha población de células no atrapadas y las células atrapadas en dicha composición de materia son de especies diferentes.

18. El método in vitro de la reivindicación 15, en el que dicha población de células no atrapadas y las células atrapadas en dicha composición de materia son de la misma especie.

19. El método in vitro de la reivindicación 16, en el que dicha población de citoblastos es una población de células de mamífero, preferentemente una población de células humanas, o una población de células murinas.

20. Uso de un medio para la fabricación de un medicamento para tratar trastornos proliferativos de células en el que

el medio es obtenible cultivando la composición de materia que comprende una muestra de embriocitoblastos no humanos atrapados en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que el atrapamiento de dicha muestra de embriocitoblastos no humanos inhibe la proliferación de al menos una parte de los embriocitoblastos no humanos atrapados en un medio durante un tiempo suficiente para permitir la difusión de un material inhibidor de la proliferación celular en dicho medio.

21. Uso de la reivindicación 20, en el que dicha población de células es una población de citoblastos, o en el que dicha población de células comprende células neoplásicas.

22. Un método in vitro para inhibir la proliferación de una población no atrapada de embriocitoblastos no humanos

que comprende cultivar dichos citoblastos en presencia de una composición de materia que comprende una muestra de células cancerosas atrapadas en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que dicha muestra de células cancerosas produce material que inhibe la proliferación de dichos citoblastos.

23. El método de la reivindicación 22, en el que dichos citoblastos son citoblastos de mamífero, preferentemente 20 citoblastos murinos.

24. El método de la reivindicación 22, en el que dichos citoblastos y células cancerosas se originan a partir de la misma especie, o en el que dichos citoblastos y células cancerosas se originan a partir de especies diferentes.

25. Un método in vitro para inhibir la proliferación de embriocitoblastos no humanos no atrapados, que comprende cultivar una composición de materia que comprende una muestra de células cancerosas atrapadas en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que dicha muestra de células cancerosas produce material que inhibe la proliferación de citoblastos y que difunde en un medio de cultivo, y poner en contacto dicho medio de cultivo con dichos citoblastos.

26. El método in vitro de la reivindicación 25, en el que dichos citoblastos son citoblastos de mamífero, preferentemente citoblastos murinos.

27. El método in vitro de la reivindicación 25, en el que dichos citoblastos y células cancerosas se originan a partir de 35 la misma especie, o en el que dichos citoblastos y células cancerosas se originan de diferente especie.

28. Un método in vitro para inhibir la diferenciación de al menos una parte de una población de embriocitoblastos no humanos, que comprende atrapar dichos embriocitoblastos no humanos en una estructura biocompatible, selectivamente permeable, en el que tal atrapamiento hace que al menos una parte de dichos embriocitoblastos permanezca en un estado no diferenciado.


 

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