Mejoras en la preparación de antígenos en vacuna de virus de la gripe.

Un proceso para interrumpir viriones de la gripe, que comprende las etapas de:

(i) obtención de una composición que comprende viriones de la gripe en presencia de un tampón de fosfato; (ii) inactivar los viriones de la gripe en presencia de un tampón de fosfato; y (iii) la división de los viriones inactivados en presencia de un tampón de fosfato.

ÁMBITO TÉCNICO

[1] Esta invención se encuentra en el ámbito de la preparación de la vacuna contra la gripe.

TÉCNICA ANTERIOR

[2] Actualmente, las vacunas de uso general contra la gripe se describen en los capítulos 17 y 18 de la referencia

1. Se basan en virus vivos o virus inactivados y las vacunas inactivadas pueden basarse en virus completos, virus fraccionados o en antígenos de superficie purificados (que contienen hemaglutinina y también, normalmente, neuraminidasa).

[3] Se conocen una gran variedad de diferentes procedimientos para la preparación de ambas vacunas fraccionadas y contra el antígeno de superficie. Por ejemplo, en las referencias 2-8 se divulgan varios procedimientos de fraccionamiento y en las referencias 9-14 se divulgan diferentes métodos para la preparación de vacunas contra el antígeno de superficie.

[4] [Página 1a]

[5] Uno de los objetivos de la Invención consiste en proporcionar más y mejores métodos para la preparación de vacunas fraccionadas y contra el antígeno de superficie. [Página 1b]

DIVULGACIÓN

[6] Los avances de los procesos ya existentes para la preparación de la vacuna contra antígenos, a partir de los virus desintegrados de la gripe que se divulgan aquí.

Modificación del momento en el uso del detergente

[7] En un proceso de purificación ya existente, los viriones de la gripe se exponen ante un primer detergente (p.ej., un polisorbato como el polisorbato 8) antes de fraccionarse por un segundo detergente (p.ej., CTAB). El primer detergente se utiliza antes de la inactivación del virus mientras que el segundo detergente se añade después de la inactivación. Más tarde en el proceso, se saca el segundo detergente pero el primer detergente permanece y de este modo facilita la solubilidad del antígeno.

[8] En comparación y según un aspecto de la presente divulgación, el primer detergente se utiliza más tarde en el proceso y, en particular, después de que el segundo detergente ya haya sido utilizado para el fraccionamiento de los viriones. Este cambio en el momento y en el orden se ha venido asociando con un incremento de 2 veces en el rendimiento del antígeno, en particular con un subtipo H5 del virus de la gripe A.

[9] Por tanto, la divulgación proporciona un proceso para alterar los viriones de la gripe y que comprende las fases de:

(i) obtención de una composición formada por los viriones de la gripe en ausencia de detergente,

(¡i) inactivación de los viriones de la gripe en ausencia de detergente;

(¡ii) fraccionamiento de los viriones inactivados con un reactivo formado por un primer detergente e (iv) intercambio del primer detergente por un segundo detergente. La fase del intercambio del detergente puede producirse en cualquier momento después de la fase del fraccionamiento pero lo ideal es que se produzca antes de la fase de la captura del virión, p.ej., por un proceso seleccionado a partir de la captura por afinidad, pseudo captura por afinidad, cromatografía o adsorción (véase más abajo). Por tanto, el segundo detergente puede añadirse después del fraccionamiento.

[1] La técnica anterior incluye también el WO94/1913. Esto divulga, entre otras cosas, unas posibilidades para la preparación de una vacuna contra la gripe de virus fraccionados que comprende las fases de: (i) inoculación de los huevos con virus, recogida de fluido alantoideo, obtención de un sedimento que contiene virus, resuspensión de dicho sedimento, concentración de virus, adición de un tampón fosfato; (ii) alteración de dicho concentrado de virus completo con sodio deoxicolato, concentración de hemaglutinina, adición de un tampón fosfato que contiene tiomersal y Tween 8 para diluir dicha fracción, filtración de dicha fracción para obtener material de virus fraccionado; (iii) incubación que permite la inactivación de los virus, adición de un tampón fosfato que contiene tiomersal y Tween 8 y adición de formaldehído. Se pueden llevar a cabo más ultrafiltraciones o filtraciones del material así obtenido.

[11] La técnica anterior incluye también el W27/5259. Esta divulga, entre otras cosas, más posibilidades para la preparación de virus fraccionados de la gripe mediante: (i) la recogida de viriones y (ii) el tratamiento de los

viriones con detergente que puede conllevar el uso consecutivo de sodio deoxlcolato y formaldehído y donde el fraccionamiento puede tener lugar durante la purificación inicial de viriones. Los viriones fraccionados pueden reaccionar en sodio tamponado de fosfato y cloruro sódico isotónico.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

[12] La presente invención describe lo siguiente:

1. Un proceso para alterar los viriones de la gripe y que comprende las fases de: (i) obtención de una composición formada por los viriones de la gripe en presencia de un tampón fosfato; (ii) inactivación de los viriones de la gripe en presencia de un tampón fosfato y (iii) fraccionamiento de los viriones inactivados en presencia de un tampón fosfato.

2. El proceso del apartado 1 que comprende más fases de: (i) obtención de la composición formada por los viriones de la gripe en ausencia de detergente; (ii) inactivación de los viriones de la gripe en ausencia de detergente; (iii) fraccionamiento de los viriones inactivados con un reactivo formado por un primer detergente con una fuerza iónica de 1 mM o más e (iv) intercambio del primer detergente por un segundo detergente.

3. El proceso del apartado 2 donde la fase de la obtención de la composición formada por los viriones de la gripe comprende: (i) la obtención de un medio líquido que contiene viriones de la gripe; (ii) opcionalmente, la concentración del medio; (iii) la diafiltración del medio líquido para proporcionar un virión que contenga material retenido y que incorpore un tampón de baja conductividad y (iv) captura de viriones del material retenido mediante un proceso seleccionado a partir de la captura por afinidad, pseudo captura por afinidad, cromatografía o adsorción.

4. Un proceso para la preparación de una vacuna contra la gripe que comprenda la alteración de los viriones de la gripe, según el proceso que se recoge en cualquiera de los apartados 1-3.

5. El proceso de cualquier apartado anterior donde los viriones de la gripe proceden del virus de la gripe A.

6. El proceso de cualquier apartado anterior donde los viriones de la gripe proceden del virus de la gripe A de

hemaglutinina del subtipo H5

7. El proceso de cualquier apartado anterior donde los viriones de la gripe se preparan a partir de huevos o de cultivo de células de mamíferos.

8. El proceso de cualquiera de los apartados del 4 al 7 donde la vacuna es una vacuna trivalente.

9. El proceso de cualquiera de los apartados del 4 al 9 donde la vacuna contiene 7,5 pg de hemaglutinina por cepa.

1. El proceso de cualquiera de los apartados del 4 al 8 donde la vacuna contiene alrededor de 15 pg de

hemaglutinina por cepa.

11. El proceso de cualquiera de los apartados del 4 al 1 donde la vacuna contiene un adyuvante.

12. El proceso del apartado 11 donde el adyuvante está formado por una emulsión de aceite en agua.

[13] Pero antes de la captura del virión. Tras la captura del virión, pueden añadirse mayores cantidades del segundo detergente, especialmente si la cantidad del segundo detergente previamente añadido fuera inferior a 1,5 g/L.

[14] Los viriones disgregados obtenidos mediante este proceso pueden utilizarse para la preparación de vacunas contra la gripe.

[15] En un proceso para alterar los viriones de la gripe, la divulgación también proporciona unos avances consistentes en: la inactivación de los viriones de la gripe en ausencia de detergente, el fraccionamiento de los viriones inactivados con un reactivo formado por un primer detergente y el intercambio, tras el fraccionamiento, del primer detergente por un segundo detergente.

[16] En el apartado alternativo del primer aspecto, el segundo detergente se añade tras la inactivación pero antes del fraccionamiento. Por tanto, la divulgación proporciona un proceso para alterar los viriones de la gripe que comprende las fases de: (i) obtención de una composición formada por los viriones de la gripe en ausencia de detergente; (ii) inactivación de los viriones de la gripe en ausencia de detergente; (iii) adición de un segundo detergente sin el fraccionamiento de los viriones inactivados; (iv) fraccionamiento de los viriones inactivados en presencia del segundo detergente con un reactivo formado por un primer detergente y (v) extracción del primer detergente mientras se mantiene el segundo detergente.

[17] Los viriones disgregados obtenidos... [Seguir leyendo]

1. Un proceso para interrumpir viriones de la gripe, que comprende las etapas de: (i) obtención de una composición que comprende viriones de la gripe en presencia de un tampón de fosfato; (ii) inactivar los viriones de la gripe en presencia de un tampón de fosfato; y (iii) la división de los viriones inactivados en presencia de un tampón de fosfato.

2. El proceso de la reivindicación 1, que comprende además las etapas de: (i) obtener la composición que comprende viriones de la gripe en ausencia de detergente; (ii) inactivar los viriones de la gripe en ausencia de detergente; (iii) la división de los viriones inactivados con un reactivo que comprende un primer detergente que tiene una fuerza iónica de 1mM o mayor; y (iv) el intercambio de la primera detergente por un segundo detergente.

3. El proceso de la reivindicación 2, en el que la etapa de obtención de la composición que comprende viriones de la gripe comprende: (i) la obtención de un medio líquido que contiene viriones de la gripe; (ii) opcionalmente concentrar el medio; (iii) diafiltrar el medio líquido para proporcionar un retenido que contiene virión, incluyendo un tampón de baja conductividad; y (iv) la captura de los viriones de la retenido por un proceso seleccionado de captura por afinidad, captura de pseudo-afinidad, cromatografía o adsorción.

4. Un procedimiento para preparar una vacuna contra la gripe, que comprende alteradores viriones de la gripe de acuerdo con el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

5. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que los viriones de la gripe son de un virus de influenza.

6. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que los viriones de la gripe son de un virus de influenza de hemaglutinina H5 subtipo.

7. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que los viriones de la gripe se preparan a partir de huevos o cultivo de células de mamífero.

8. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en donde la vacuna es una vacuna trivalente.

9. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que la vacuna contiene hemaglutinina en 7.5pg por cepa.

1. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que la vacuna contiene hemaglutinina a aproximadamente 15pg por cepa.

11. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 1, en el que la vacuna contiene un adyuvante.

12. El proceso de la reivindicación 11, en el que el adyuvante comprende una emulsión de acelte-en-agua.