Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (PD-L1) de muerte programada.

Un anticuerpo monoclonal humano aislado o una porción de enlace a antígeno del mismo que se enlazan específicamente a PD-L1,

que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 22;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 32;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 42;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 52;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 62

y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID nº 72.

Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (PD-L1) de muerte programada Antecedentes

La muerte programada 1 (PD-1) es un miembro de la familia de receptores CD28, que incluye CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 y BTLA. Los miembros iniciales de la familia, CD28 e ICOS, se descubrieron por efecto funcional al aumentar la proliferación de células T después de la adición de anticuerpos monoclonales (Hutloff et al. (1999) Nature 397:263266: Hansen et al. (198) Immunogenics 1:247-26). Se han identificado dos ligandos de glicoproteína de superficie celular para PD-1, PD-L1 y PD-L2, y se ha demostrado que subregulan la activación de células T y la secreción de citoquina al enlazarse a PD-1 (Freeman et al (2) J Exp Med 192:127-34: Latchman et al (21) Nat Immunol 2:261 -8; Cárter et al. (22) Eur J Immunol 32:634-43; Ohigashi et al. (25) Clin Cáncer Res 11:2947- 53). Tanto PD-L1 (B7-H1) como PD-L2 (B7-DC) son homólogos de B7 que se enlazan a PD-1, pero no se enlazan a otros miembros de la familia CD28 (Blank et al. (24). La expresión de PD-L1 en la superficie celular también ha demostrado suprarregularse a través de la estimulación de IFN-y.

La expresión de PD-L1 se ha encontrado en varios cánceres humano y murinos, que incluyen pulmón humano, carcinoma de colón y ovario y varios mielomas (Iwai et al (22) PNAS 99:12293-7; Ohigashi et al. (25) Clin Cáncer Res 1J_:2947-53). Se ha sugerido que PD-L1 juega un papel en la inmunidad tumoral al incrementar la apoptosis de clones de células T específicas de antígeno (Dong et al. (22) Nat Med 8:793-8). Se ha sugerido que PD-L1 puede involucrarse en la inflamación mucosa intestinal y la inhibición de PD-L1 suprime la enfermedad consuntiva asociada con colitis (Kanai ef al, (23) J Immunol 171:4156-63).

Koga et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:257-262, 24 notifican que el bloqueo de la interacción entre PD- 1 y PD-L1 acelera la enfermedad de injerto arterial en aloinjerto cardiaco. Blank et al., Cáncer Research 64, 114- 1145, 24 notifican que PD-L1/B7H-1 inhibe la fase efectora del rechazo del tumor mediante linfocitos T CD8+ transgénicos para el receptor de linfocitos T (TCR).

El documento se refiere a composiciones inmunopotenciadoras que comprenden un inhibidor de la señal inmunosupresora de PD-1, PD-L1 o PD-L2. El inhibidor puede ser un anticuerpo.

Barber et al., Nature 439, 682-687, 26 describe la restauración de la función en linfocitos T CD8 agotados durante la infección vírica crónica. La administración vivo de anticuerpos que cloquean la interacción entre PD-1 y PD-L1 potenció las respuestas de los linfocitos T. Brown et al., J. Immunol. 17(3), 1257-1266 notifican que el bloqueo de los ligandos de PD-1 en células dendríticas potencia la activación e linfocitos T y la producción de citoquinas.

Sumario

La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales aislados, en particular anticuerpos monoclonales humanos que se enlazan a PD-L1 y exhiben numerosas propiedades deseables. Estas propiedades incluyen enlace de alta afinidad a PD-L1 humano. Aún además, se ha demostrado que los anticuerpos de la invención incrementan la proliferación de células T, secreción de IFN-y, y secreción de IL-2 en una reacción de linfocitos mezclada.

De acuerdo con ello, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado, o una porción de enlace a antígeno del mismo que tiene:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en laSEC ID N2:22;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en laSEC ID N2:32;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en laSEC ID N2:42;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en laSEC ID N2:52;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID N2:62; y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en laSEC ID N2:72.

Preferentemente el anticuerpo es un anticuerpo humano, aunque en realizaciones alternativas el anticuerpo puede ser, por ejemplo, un anticuerpo murino, un anticuerpo quimérico o humanizado.

En realizaciones particulares, el anticuerpo se enlaza a PD-L1 humano con un Kd de 5x1'8 M o menos, se enlaza a PD-L1 humano con un Kd de 1x1'8 M o menos, se enlaza a PD-L1 humano con un Kd de 5x1'9 M o menos, se enlaza a PD-L1 humano con un Kd de 5x1'9 M o menos, o se enlaza a PD-L1 humano con un Kd de entre 1x1'8M y 1x1'1°M.

En una realización preferida, los anticuerpos comprenden adicionalmente al menos una de las siguientes propiedades:

(a) el anticuerpo incrementa la proliferación de células T en un ensayo de reacción de linfocitos mezclada (MLR);

(b) el anticuerpo incrementa la producción de interferón-y en un ensayo MLR; o

(c) el anticuerpo incrementa la secreción de IL-2 en un ensayo MLR.

En realizaciones preferidas, el anticuerpo de la invención, o porción de enlace a antígeno del mismo, comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID n2:2; y seleccionada del grupo que consiste de las SEC ID Nos:21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, y 3;

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID n2:12.

Los anticuerpos invención pueden ser, por ejemplo, anticuerpos de longitud completa, por ejemplo de un isotipo de lgG1 o lgG4. Alternativamente, los anticuerpos pueden ser fragmentos de anticuerpo, tales como fragmentos Fab o Fab'2, o anticuerpos de cadena única.

La invención también proporciona un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal de la invención, o porción de enlace a antígeno del mismo, enlazado a un agente terapéutico, como una citotoxina o un isótopo radioactivo. La invención también proporciona una molécula biespecífica que comprende un anticuerpo monoclonal, o porción de enlace a antígeno del mismo, de la invención, enlazada a un segundo residuo funcional que tiene una especificidad de enlace diferente que dicho anticuerpo, o porción de enlace a antígeno del mismo.

Las composiciones que comprenden un anticuerpo monoclonal, o porción de enlace a antígeno del mismo, o inmunoconjugado o molécula biespecífica de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable también se proporcionan.

Moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos, o porciones de enlace a antígeno de los mismos, de la invención también se comprenden por la invención, así como también vectores de expresión que comprenden tales ácidos nucleicos y células hospedadoras que comprenden tales vectores de expresión. Además, la invención proporciona un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina humana, en donde el ratón expresa un anticuerpo la presente descripción de la invención, así como también hibridomas preparadas de tal un ratón, en donde el hibridoma produce el anticuerpo de la invención.

En todavía otro aspecto, la invención proporciona anticuerpo monoclonal, o una porción de enlace a antígeno del mismo, de la invención para su uso en la modulación de una respuesta inmune en un sujeto se modula. Preferentemente, el anticuerpo de la invención mejora, estimula o incrementa la respuesta inmune en el sujeto.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal , o porción de enlace a antígeno del mismo de la invención para utilizarse en un método de inhibición del crecimiento de células tumorales en un sujeto. Otros anticuerpos anti-PD-L1 pueden utilizarse en su lugar o en combinación con un anticuerpo anti-PD-L1 de la invención. Por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-L1 quimérico, humanizado o completamente humano puede utilizarse en el método para inhibir el crecimiento tumoral.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal, o porción de enlace a antígeno del mismo para utilizarse en un método para tratar una enfermedad infecciosa en un sujeto. Otros anticuerpos anti-PD- L1 pueden utilizarse en su lugar o en combinación con un anticuerpo anti-PD-L1 de la invención. Por ejemplo, un anticuerpo anti-PD-L1 quimérico, humanizado o completamente humano puede utilizarse en el método para tratar una enfermedad infecciosa.

Además, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal, o porción de enlace a antígeno del mismo, de la invención, para utilizarse en un método para mejorar una respuesta inmune a un antígeno en un... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humano aislado o una porción de enlace a antígeno del mismo que se enlazan específicamente a PD-L1, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 22;

(b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 32;

(c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 42;

(d) una región variable de cadena ligera CDR1 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 52;

(e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 62

y

(f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID n2 72.

2. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, que comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una homología de al menos un 8 % con la secuencia definida en la SEC ID N2 2 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una homología de al menos un 8 % con la secuencia definida en la SEC ID N212.

3. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, que comprenden una región variable de cadena pesada que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID N2 2 y una región variable de cadena ligera que comprende aminoácidos que tienen la secuencia definida en la SEC ID N212.

4. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un anticuerpo de un isotipo lgG1, lgG2 o lgG4, o una porción de enlace a antígeno del mismo.

5. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un anticuerpo de un isotipo lgG4, o una porción de enlace a antígeno del mismo.

6. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es un fragmento de anticuerpo o un anticuerpo monocatenario.

7. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el anticuerpo se enlaza a PD-L1 con una Kd de 5 x 1-9 M o menos.

8. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 7, en donde el anticuerpo se enlaza a PD-1 con una Kd de 2 x 1-9 M o menos.

9. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que aumenta:

(a) la proliferación de células T en un ensayo de reacción de linfocitos mezclada (MLR);

(b) la producción de interferón-y en un ensayo MLR; y

(c) la secreción de IL-2 en un ensayo MLR.

1. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del reivindicaciones anteriores, siendo el anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

11. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del reivindicaciones 1-9, siendo el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

12. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del reivindicaciones 1-9, siendo anticuerpo es un anticuerpo humano.

13. Un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores unidos a un agente terapéutico.

14. El inmunoconjugado de la reivindicación 13, en el que el agente terapéutico es una citotoxina o un isótopo radioactivo.

15. Una molécula biespecífica que comprende el anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 unidas a un segundo resto funcional que tiene una especificidad de enlace diferente que dichos anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo.

16. Una composición que comprende (a) el anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, (b) el inmunoconjugado de las reivindicaciones 13 o 14 o (c) la molécula biespecífica de la reivindicación 15 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

17. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.

18. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 17.

19. Una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de la reivindicación 18.

2. Un ratón transgénico que comprende transgenes de cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina humana, en donde el ratón expresa el anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12.

21. Un hibridoma preparado del ratón de la reivindicación 2, en donde el hibridoma produce dichos anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo.

22. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse en un método para modular una respuesta inmune en un sujeto.

23. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse en un método para inhibir el crecimiento de células tumorales en un sujeto.

24. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 23, en donde las células tumorales son células de un cáncer seleccionado entre melanoma, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer ovárico y cáncer de pulmón.

25. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 23, en donde las células tumorales son de un cáncer seleccionado de cáncer óseo, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de la cabeza o el cuello, melanoma maligno intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer estomacal, cáncer testicular, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello del útero, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemias crónica o aguda incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos de la infancia, linfoma linfocítico, cáncer de la vejiga, cáncer del riñón o del uréter, carcinoma de la pelvis renal, neoplasia del sistema nervioso central (SNC), linfoma del SNC primario, angiogénesis tumoral, tumor del eje espinal, glioma del tronco encefálico, adenoma pituitario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de célula escamosa, linfoma de células T, cánceres inducidos por el medio ambiente, incluyendo aquellos inducidos por amianto, y combinaciones de dichos cánceres.

26. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse en un método para tratar una enfermedad infecciosa en un sujeto.

27. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 26, en donde la enfermedad infecciosa es:

(a) una enfermedad seleccionada entre gripe, herpes, giardia, malaria y leishmania;

(b) una infección patogénica por un virus seleccionado entre el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), virus de la hepatitis, virus del herpes, adenovirus, virus de la gripe, flavivirus, ecovirus, rinovirus, virus Coxsackie, cornovirus, virus sincitial respiratorio, virus de paperas, rotavirus, virus de sarampión, virus de rubéola, parvovirus, virus vaccinia, virus HTLV, virus del dengue, virus de papiloma, virus molluscum, poliovirus, virus de rabia, virus JC y virus de encefalitis arboviral;

(c) una infección patogénica por bacterias seleccionadas entre clamidia, bacteria rickettsia, micobacteria, estafilococos, estreptococos, neumococos, meningococos y conococos, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionella, difteria, salmonella, bacilo, cólera, tétanos, botulismo, ántrax, peste, leptospirosis y bacteria de enfermedad de Lyme,

(d) una infección patogénica por hongos seleccionada entre Candida, Cryptococcus neoformans, Aspergillus,

género Mucorales , Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatunr, o

(e) una infección patogénica por parásitos seleccionados entre Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naeglería fowlerí, Acanthamoeba sp., Giardia lambía, Cryptosporídium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi y Nippostrongylus brasiliensis.

28. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 27, en donde:

(a) el virus de la hepatitis es Hepatitis A, Hepatitis B o Hepatitis C;

(b) el virus del herpes es VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II y CMV, o virus de Epstein Barr;

(c) el hongo Candida es Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata o Candida tropicaiis\

(d) el hongo Aspergillus es Aspergillus fumigatus o Aspergillus niger, y

(e) el hongo Mucorales es mucor, absidia o rhizophus.

29. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 12 y un antígeno para utilizarse en un método para potenciar una respuesta inmune frente al antígeno en un sujeto

3. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 29 en el que el antígeno es un antígeno tumoral, un antígeno viral, un antígeno bacteriano o un antígeno de un patógeno.

31. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse en un método para tratar o prevenir una enfermedad inflamatoria en un sujeto.

32. El anticuerpo monoclonal o una porción de enlace a antígeno del mismo de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 12 para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 31, en donde la enfermedad inflamatoria es liquen plano (LP).