Agentes de unión a TLR3.

Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido TLR3 humano,

en el que dicho anticuerpo inhibe la señalización por el polipéptido TLR3 sin bloquear la unión de un ligando de TLR3 ARNbc al polipéptido TLR3, en el que dicho anticuerpo se une específicamente al polipéptido TLR3 bajo condiciones neutras a un pH entre 6,6 y 7,4 y en condiciones ácidas a un pH de entre 4,5 y 6,5 con una KD sub-nanomolar por su afinidad de unión bivalente;

en el que dicho anticuerpo compite para unirse a un polipéptido TLR3 con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en:

(a) un anticuerpo que tiene respectivamente una región VH y VL de SEC ID Nº 34 y 35, y

(b) un anticuerpo que tiene respectivamente una región VH y VL de SEC ID Nº 2 y 3.

Agentes de unión a TLR3

Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales) , fragmentos de anticuerpos, y derivados de los mismos que se unen específicamente a TLR3, y que opcionalmente modulan adicionalmente, por ejemplo, inhiben, la señalización. La invención también se refiere a células que producen tales anticuerpos; métodos de preparación de tales anticuerpos; fragmentos, variantes y derivados de los anticuerpos; composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos; métodos de uso de los anticuerpos para diagnosticar, tratar o prevenir enfermedades, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias y similares.

Antecedentes Las proteínas toll de Drosophila controlan el establecimiento del patrón dorso-ventral y se cree que representar un antiguo mecanismo de defensa del huésped. En seres humanos, se cree que TLR es un componente importante de la inmunidad innata. Secuencias de proteínas toll humanas y de Drosophila muestran homología sobre la longitud entera de las cadenas de proteína. La familia de receptores del tipo toll humanos comprende diez proteínas de receptor altamente conservadas, TLR1-TLR10. Al igual que toll de Drosophila, los TLR humanos son proteínas transmembranarias de tipo I con un dominio extracelular que consiste en un dominio de repetición rica en leucina (LRR) que reconoce patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) , y un dominio citoplásmico que es homólogo al dominio citoplásmico del receptor de interleucina-1 (IL-1) humano. Similar a las vías de señalización para tanto toll de Drosophila como el receptor de IL-1, los receptores del tipo toll humanos señalizan mediante la vía de NF-κB.

Aunque los diferentes TLR de mamífero comparten muchas características y mecanismos de transducción de señales, sus funciones biológicas son muy diferentes. Esto es debido en parte al hecho de que cuatro moléculas adaptadoras diferentes (MyD88, TIRAP, TRIF y TRAF) están asociadas en diversas combinaciones con los TLR y median en diferentes vías de señalización. Además, diferentes ligandos para un TLR pueden activar preferencialmente diferentes rutas de transducción de señales. Además, los TLR se expresan diferencialmente en diversas células hematopoyéticas y no hematopoyéticas. Por consiguiente, la respuesta a un ligando de TLR depende no solo de la vía de señalización activada por el TLR, sino también de la naturaleza de las células en las que se expresa el TLR individual.

El receptor de tipo toll 3 (TLR3) ha recibido una atención considerable como diana terapéutica, ya que la señalización de TLR3 participa en afecciones inflamatorias y autoinmunitarias. La solicitud de patente WO98/50547 proporciona la secuencia de ácidos nucleicos y de aminoácidos de la proteína hTLR3. LeBouteiller et al. (2005) J. Biol. Chem. 280 (46) : 38133-38145) desvelan el uso de un anticuerpo anti-TLR3 que se une al TLR3 de superficie celular. Se ha expuesto que el anticuerpo C1130 es activador hacia TLR3 y se ha descrito en el documento WO 2007/051164. Los anticuerpos policlonales que inhibieron TLR3 se describieron en Cavassani et al. (2008) J. Exp. Med. 205: 2609-2621. El documento WO 03/106499 y Matsumoto et al. (2003) J. Immunol. 171:3154-3162 describen un anticuerpo correspondiente al clon de anticuerpo TLR3.7 (eBioScience Inc., San Diego) , que se informó que se unía e inhibía TLR3 de la superficie celular, pero no TLR3 del compartimento celular o en CD de linaje mieloide. El documento WO 06/060513 describe un anticuerpo C1068 que se informa que inhibe la producción de citocinas en células epiteliales, que se informa que expresan TLR3 sobre la superficie celular. Se ha expuesto que C1068 compite con el anticuerpo TLR3.7 para unirse a TLR3 (véase el documento WO2010/051470) . La solicitud de patente PCT WO2010/051470 proporciona anticuerpos anti-TLR3. Se ha expuesto que tales anticuerpos bloquean el ARNbc y se propone que previenen la unión del ARNbc a TLR3. Otros anticuerpos anti-TLR3 para uso en investigación incluyen anticuerpos anti-TLR3 policlonales de R&D Systems Corp., anticuerpo 40C1285 de Abcam y anticuerpos 619F7, 713E4, 716G10, IMG-5631 e IMG-5348, todos de Imgenex. Corp.

Sin embargo, aunque hasta la fecha se han generado algunos anticuerpos anti-TLR3, estos anticuerpos se han previsto generalmente para investigación solo, y no para uso terapéutico. Como se ha descrito adicionalmente en el presente documento, la presente divulgación muestra que entre los anticuerpos anti-TLR3 actualmente disponibles, aunque pueden ser útiles en algunos ámbitos de investigación para hacer observaciones experimentales, no son óptimamente aptos para uso como agentes terapéuticos, por ejemplo, para modular TLR3. Por tanto, existe la necesidad de proporcionar anticuerpos mejorados dirigidos a TLR3.

Resumen de la invención El alcance de la invención se determina por las reivindicaciones. La información proporcionada en el presente documento que no entra dentro del alcance de las reivindicaciones se proporciona solo para información.

En un aspecto, la presente memoria descriptiva proporciona novedosas composiciones que comprenden, y métodos de uso de anticuerpos monoclonales, que incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de anticuerpos, y derivados que

se unen específicamente a TLR3 humano. En un aspecto, los anticuerpos inhiben la señalización de TLR3 sin bloquear la unión de un ligando de TLR3 a un polipéptido TLR3. En un aspecto, los anticuerpos se unen al TLR3 humano en condiciones ácidas, y en particular en condiciones representativas de aquellas encontradas en un compartimento subcelular acidificado de una célula (por ejemplo, compartimentos de la vía endocítica endosómica, lisosómica) . Tales condiciones ácidas se caracterizan generalmente por un pH inferior a aproximadamente pH 6, 5, o entre aproximadamente pH 4, 5 y 6, 5, o aproximadamente pH 5, 6.

En un aspecto de la divulgación, los anticuerpos modulan, opcionalmente inhiben, la señalización de TLR3 en un compartimento subcelular acidificado de una célula (por ejemplo, compartimentos de la vía endocítica endosómica, lisosómica) .

En un aspecto de la divulgación, los anticuerpos modulan, opcionalmente inhiben, la señalización de TLR3 en una célula dendrítica (CD) (por ejemplo, una CD mieloide, CD derivada de monocitos) .

En un aspecto de la divulgación, los anticuerpos pueden opcionalmente caracterizarse por no tener afinidad sustancialmente menor por la unión a TLR3 humano en condiciones ácidas que bajo condiciones neutras, por ejemplo, si la KD para unirse a TLR3 disminuye no más de 0, 2-, 0, 3-, 0, 4-, 0, 5-, 1, 0-o 1, 5-log10. Condiciones neutras se caracterizan generalmente por un pH entre 6, 6 y 7, 4, por ejemplo, un pH ligeramente alcalino de 7, 2 encontrado en el citosol de la célula. Opcionalmente, los anticuerpos no tienen afinidad sustancialmente diferente (menor o mayor) por la unión a TLR3 humano en condiciones ácidas que bajo condiciones neutras, por ejemplo, si la KD para unirse a TLR3 bajo condiciones neutras y ácidas se diferencia no más de 0, 2-, 0, 3-, 0, 4-, 0, 5-, 1, 0-o 1, 5-log10.

En otros aspectos de la divulgación, la afinidad de unión bivalente de los anticuerpos por TLR3 en condiciones ácidas puede opcionalmente caracterizarse por una KD media no superior a aproximadamente (es decir, mejor afinidad que) 100, 50, 10, 5 o 1 nanomolar, preferentemente sub-nanomolar u opcionalmente no superior a aproximadamente 300, 200, 100 o 10 picomolar.

En otros aspectos de la divulgación, los anticuerpos inhiben la señalización de TLR3 sin bloquear la unión de un ligando de TLR3 a un polipéptido TLR3. El ligando de TLR3 será generalmente un ligando distinto de un anticuerpo anti-TLR3 y puede ser un ligando de TLR3 que se produce naturalmente o que no se produce naturalmente, opcionalmente un ligando basado en ARNbc tal como poliAU (ácido poliadenílico:ácido poliuridílico) o poliIC (ácido poliinosínico:policitidílico) . En particular, los inventores han establecido que los anticuerpos según la divulgación pueden inhibir la señalización de TLR3 incluso cuando un ligando de TLR3 tal como ARNbc ya está unido al polipéptido TLR3. Los anticuerpos según la divulgación también pueden inhibir la señalización de TLR3 incluso en una condición pre-activada, por ejemplo, en presencia de IFNα. Se cree que los anticuerpos según la divulgación son eficaces para tratar un paciente que tiene una enfermedad autoinmunitaria establecida, por ejemplo, ligando de TLR3 que se produce naturalmente tal como ARNbc y/o la presencia de, y en particular, altos niveles de, IFNα en las células enfermas. Los anticuerpos también tendrán la... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un polipéptido TLR3 humano, en el que dicho anticuerpo inhibe la señalización por el polipéptido TLR3 sin bloquear la unión de un ligando de TLR3 ARNbc al polipéptido TLR3, en el que dicho anticuerpo se une específicamente al polipéptido TLR3 bajo condiciones neutras a un pH entre 6, 6 y 7, 4 y en condiciones ácidas a un pH de entre 4, 5 y 6, 5 con una KD sub-nanomolar por su afinidad de unión bivalente; en el que dicho anticuerpo compite para unirse a un polipéptido TLR3 con un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en:

(a) un anticuerpo que tiene respectivamente una región VH y VL de SEC ID Nº 34 y 35, y

(b) un anticuerpo que tiene respectivamente una región VH y VL de SEC ID Nº 2 y 3.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo se une específicamente al polipéptido TLR3 en condiciones ácidas con una KD 100 picomolar o mejor por su afinidad de unión bivalente.

3. El anticuerpo de las reivindicaciones 1-2, en el que el anticuerpo está seleccionado del grupo que consiste en:

(a) un anticuerpo que tiene (i) las secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2, HCDR3) como se muestra en SEC ID Nº: 4, 5 y 6, y (ii) las secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2, LCDR3) como se muestra en SEC ID Nº: 7, 8 y 9, respectivamente; y

(b) un anticuerpo que tiene (i) las secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2, HCDR3) como se muestra en SEC ID Nº: 36, 37 y 38, y (ii) las secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2, LCDR3) como se muestra en SEC ID Nº: 39, 40 y 41, respectivamente.

4. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo quimérico, humano o humanizado.

5. El anticuerpo de la reivindicación 4, en el que el isotipo de dicho anticuerpo es una IgG4.

6. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el anticuerpo comprende una región Fc que se modifica para reducir su unión a FcγR.

7. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado de Fab, Fab', Fab'-SH, F (ab') 2, Fv, diacuerpos, fragmento de anticuerpo monocatenario o un anticuerpo multiespecífico que comprende múltiples fragmentos de anticuerpos diferentes.

8. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho anticuerpo está conjugado o covalentemente unido a un resto tóxico.

9. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho anticuerpo puede ser internalizado por una célula que expresa TLR3.

10. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicho anticuerpo está conjugado o covalentemente unido a un resto detectable.

11. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho anticuerpo se produce por inmunización de un animal no humano con un inmunogén que comprende un polipéptido TLR3.

12. Un hibridoma o célula huésped recombinante que produce el anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 11.

13. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica de la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en autoinmunidad, inflamación, alergia, asma, infección, cirrosis y septicemia.

15. Una composición farmacéutica de la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento o prevención de un cáncer.