(2R)-enantiómero de cloruro de DOTAP.

Cloruro de (2R)-1,2-dioleoiloxi-3-trimetilamoniopropano (cloruro de (2R)-DOTAP) enantioméricamente puro.

(2R)-enantiómero de cloruro de DOTAP

La presente invención hace referencia al cloruro de (2R)-DOTAP enantioméricamente puro, así como a su utilización para preparar composiciones farmacéuticas.

En cuanto a lo antes mencionado, así como a continuación, el término cloruro de DOTAP hace referencia al cloruro de N,N,N-trimetil-2,3-bis[[(9Z)-1-oxo-9-octadecenil]oxi]-1- propanaminio, denominado también cloruro de (Z,Z)- N,N,N-trimetil-2,3-bis[(1-oxo-9-octadecenil)oxi]-1-propanaminio o cloruro de 1,2-dioleoiloxi-3-tri-metilamoniopropano, y a sus hidratos.

C42HwCINO<, M*, 698.54

N° de CAS: 132172-61-3 y 477274-39-8 (racemato),

197974-73-58 (racemato, monohidrato)

42856-51-8 (forma 2S), 32825-28-8 (forma 2R)

Los liposomas son vesículas artificiales de varias capas (esféricas en membranas cerradas en sí mismas) en base a sustancias ambifílicas, por lo general lípidos naturales, en donde pueden incorporarse tanto sustancias hidrofílicas encapsuladas en el espacio interior acuoso, así como también pueden incorporarse sustancias lipófilicas en el área interior de la membrana lipídica.

Los liposomas se utilizan principalmente en el área de la cosmética y la medicina, en especial en la dermatología. En los mismos se incorporan ante todo vitaminas, coenzimas, protectores para la piel y protectores solares. Los liposomas se utilizan por lo general de forma tópica.

Mediante los liposomas puede alcanzarse una distribución más específica del órgano, como si los componentes activos se utilizaran de forma disuelta.

Cuando se incluye ADN, ARN o proteínas, se obtienen entonces lipoplexos.

Añadiendo aceites y utilizando homogeneizadores de alta presión, a partir de liposomas puede forzarse la formación de las así llamadas nanopartículas (Nanoparts). Éstas consisten en partículas de aproximadamente el mismo orden de magnitud que los liposomas, las cuales sin embargo no poseen una fase acuosa en el interior, sino una fase oleosa. Dichas partículas son apropiadas en particular para el encapsulado de sustancias lipófilicas.

Las microemulsiones son sistemas homogéneos de dispersión coloidal en base a componentes acuosos, similares a los lípidos y surfactantes. Las mismas presentan un tamaño de las partículas de1-5 nm y se comportan de modo similar a los líquidos.

En particular en combinación con los componentes activos peptídicos, nucleótidos, vacunas y otros productos biofarmacéuticos que normalmente se disuelven con dificultad, el efecto que facilita la dispersión es de gran importancia en el caso de las utilizaciones antes descritas.

De este modo, puede también frenarse la degradación de los componentes activos en el organismo, logrando un efecto de liberación sostenida.

El cloruro de DOTAP pertenece a la categoría de los lípidos catiónicos. A diferencia de los fosfolípidos que se presentan de forma natural, éstos no poseen un carácter zwitteriónico. Los liposomas en base a lípidos catiónicos, solos o combinados con fosfolípidos u otros compuestos a modo de lípidos, presentan una superficie cargada de

forma positiva. Además, resulta una elevada afinidad con respecto a aquellas células que hacia el exterior poseen una superficie cargada de forma negativa, por ejemplo las células del endotelio.

No obstante, en los liposomas y lipoplexos a base de DOTAP y en otros liposomas catiónicos se considera especialmente importante la capacidad de poder penetrar en células, transportando de este modo hacia el interior de las células los componentes activos que se encuentran encapsulados dentro de los mismos (transfección).

Todas las propiedades mencionadas hacen que el cloruro de DOTAP también sea de gran interés para la terapia del cáncer. A través de esas propiedades se presenta la posibilidad de aplicar agentes citotóxicos tradicionales incorporados en liposomas de DOTAP catiónicos.

Las propiedades de transfección del cloruro de DOTAP y de otras sales de DOTAP, como por ejemplo del acetato, bromuro, dihidrógeno fosfato, hidrógeno sulfato, yoduro, mesilato, metilsulfato, trifluoracetato, sulfato o disulfato y triflato son conocidas de forma suficiente a través de las publicaciones.

El dihidrógeno fosfato de DOTAP y el mesilato de DOTAP se mencionan en las publicaciones sólo como racematos. Todas las otras sales antes indicadas se mencionan respectivamente como racemato y enantiómero 2S, donde con respecto al cloruro y al metilsulfato se mencionan adicionalmente también los enantiómeros 2R.

En algunos estudios in vitro, otras sales, como por ejemplo el metilsulfato de DOTAP, han alcanzando mejores tasas de transfección que el cloruro de DOTAP.

Sin embargo, aplicado in vivo, en el organismo viviente tiene lugar un intercambio de aniones en la superficie del liposoma, de manera que las ventajas de otras sales no se consideran en este caso. Por ello, especialmente en la aplicación medicinal en el ser humano y en particular para la aplicación parenteral se prefieren las sales de DOTAP con aniones fisiológicamente aceptables, como por ejemplo el cloruro correspondiente o el acetato.

Las aplicaciones en el ámbito de la medicina, en particular las aplicaciones parenterales, implican las exigencias más elevadas en cuanto a la calidad y a la pureza de los componentes activos y de los coadyuvantes utilizados. De este modo, por parte de las autoridades existen reglamentaciones muy estrictas en cuanto a la producción, la reproducibilidad de la producción, así como del perfil de subproductos de los compuestos mencionados. En el caso de las sustancias utilizadas de forma parenteral se añade el hecho de que deben evitarse y controlarse estrictamente contaminaciones microbiológicas a través de gérmenes patógenos y endotoxinas.

El cloruro de DOTAP y otras sales de DOTAP son extremadamente inestables y es dificultoso producirlos con una pureza aceptable, de manera que sean adecuados para una utilización para preparar la fórmula de un medicamento.

Como todos los lípidos que portan residuos de ácidos oleicos, como por ejemplo los fosfolípidos naturales DOPC y DOPE, todas las sales de DOTAP son muy sensibles a la oxidación. No obstante, los productos de la oxidación de derivados insaturados de los ácidos grasos presentan generalmente una toxicidad elevada.

En ese caso se requieren métodos de producción y de purificación adecuados. A modo de ejemplo, el acetato de DOTAP se presenta como un aceite de alto punto de ebullición y por eso, técnicamente, puede obtenerse con una calidad suficiente sólo con gran dificultad.

Los métodos tradicionales para superar la inestabilidad, como por ejemplo la adición de antioxidantes en forma de ácido ascórbico o L-glutatión reducido, limitan en alto grado la aplicabilidad general del cloruro de DOTAP, puesto que no pueden excluirse interacciones con los componentes activos que deben incorporarse de forma posterior. Es muy difícil excluir completamente el oxígeno durante la producción, almacenamiento y utilización, y esto sólo es posible además realizando una gran inversión.

El cloruro de DOTAP sólo puede obtenerse a través del comercio como solución de cloroformo o como sustancia sólida amorfa.

Junto con su sensibilidad a la oxidación, el cloruro de DOTAP amorfo también es extremadamente higroscópico y con la humedad normal del aire se derrite rápidamente formando una película grasosa. Esto dificulta enormemente la manejabilidad de ese compuesto.

De este modo, para el cloruro de DOTAP amorfo es recomendado por el fabricante generalmente un almacenamiento bajo gas protector a -2°C y se garantiza sólo una duración del compuesto de aproximadamente 6 meses.

Por las publicaciones se conocen solamente diferentes vías de síntesis para la producción de cloruro de DOTAP racémico amorfo:

Eibel y Unger, en DE413632A1, describen la síntesis de cloruro de DOTAP a partir de bromuro de DOTAP a través del intercambio de iones en el sistema de disolventes cloroformo/metanol/HCI acuoso y una purificación subsiguiente mediante cromatografía. El bromuro de DOTAP se obtiene previamente in situ a partir de 1-bromo-2,3-dioleoil-oxipropano.

Leventis y Silvius, en Biochim. Biophys. Acta, 123 (199) 124-132, informan sobre la síntesis de cloruro de DOTAP a partir de yoduro de DOTAP a través del intercambio de iones en el sistema de dos fases de disolvente/solución de NaCI. El yoduro de DOTAP se obtiene previamente a través de la metilación del compuesto de dimetilamino correspondiente mediante yoduro de metilo.

Nantz y otros, en Biochim. Biophys. Acta, 1299 (1996) 281-283, J. Med. Chem. 4 (1997) 469-478, describen la síntesis de cloruro de... [Seguir leyendo]

1. Cloruro de (2R)-1,2-dioleoiloxi-3-tr¡metilamon¡opropano (cloruro de (2R)-DOTAP) enantioméricamente puro

2. Utilización de cloruro de (2R)-DOTAP enantioméricamente puro como constituyente para la preparación de medicamentos.

3. Composición farmacéutica que contiene cloruro de (2R)-DOTAP enantioméricamente puro junto con componentes

activos farmacéuticos, coadyuvantes o un disolvente.

4. Composición farmacéutica que contiene cloruro de (2R)-DOTAP enantioméricamente puro según la reivindicación

3. caracterizada porque como componente activo farmacéutico se utiliza un componente activo seleccionado del grupo de los péptidos, nucleótidos, vacunas y agentes citostáticos.

5. Composición farmacéutica que contiene cloruro de (2R)-DOTAP enantioméricamente puro según la reivindicación

3, caracterizada porque la misma presenta liposomas, lipoplexos, nanopartículas o microemulsiones.