Vacuna antigripal.

Una composición de vacuna antigripal monovalente que comprende un antígeno de virus de la gripe o preparación antigénica a partir de una cepa del virus de la gripe H5,

H2, H9, H7 o H6 para su uso, en combinación con un adyuvante, en la protección contra infecciones gripales causadas por una cepa de la gripe H5, H2, H9, H7 o H6 variante, en la que la cantidad de antígeno no supera los 4 μg de hemaglutinina por dosis, en la que dicha adyuvante es una emulsión de aceite en agua que comprende un agente metabolizable, un tocoferol y un agente emulsionante, en la que el antígeno o preparación antigénica está en forma de un virus de la gripe fraccionado y en la que dicha cepa variante es una variante de deriva de la cepa a partir de la cual se prepara el antígeno o preparación antigénica.

Vacuna antigripal

Campo técnico La presente invención se refiere a formulaciones de vacuna antigripal y regímenes de vacunación para inmunizar contra la enfermedad de la gripe, a su uso en medicina, en particular a su uso para aumentar las respuestas inmunitarias a varios antígenos y a procedimientos de preparación. En particular, la invención se refiere a composiciones inmunógenas monovalentes de la gripe que comprenden una cantidad baja del antígeno del virus de la gripe o preparación antigénica del mismo a partir de una cepa del virus de la gripe que está asociada con una pandemia o tiene el potencial de estar asociada con una pandemia, en combinación con una emulsión de aceite en agua adyuvante.

Antecedentes de la técnica Los virus de la gripe son unos de los virus más ubicuos presentes en el mundo que afectan tanto a seres humanos como a ganado. La gripe da como resultado una carga económica, morbilidad e incluso mortalidad significativas.

El virus de la gripe es un virus de ARN encapsulado con un tamaño de partícula de aproximadamente 125 nm de diámetro. Consiste básicamente en una nucleocápside interna o núcleo de ácido ribonucleico (ARN) asociado con nucleoproteína, rodeado por una cubierta viral con una estructura de bicapa lipídica y glucoproteínas externas. La capa interna de la cubierta viral está compuesta predominantemente por proteínas de la matriz y la capa externa principalmente por material lipídico derivado del huésped. El virus de la gripe comprende dos antígenos de superficie, las glucoproteínas neuraminidasa (NA) y hemaglutinina (HA) , que aparecen como espigas, de 10 a 12 nm de longitud, en la superficie de las partículas. Son estas proteínas de superficie, en particular la hemaglutinina, las que determinan la especificidad antigénica de los subtipos de la gripe. Las cepas de virus se clasifican de acuerdo con las especies huésped de origen, el sitio geográfico y el año de aislamiento, el número de serie y para la gripe A, según las propiedades serológicas de los subtipos de HA y NA. Se han identificado 16 subtipos de HA (H1-H16) y nueve subtipos de NA (N1-N9) para los virus de la gripe A [Webster RG et al. Evolution and ecology of influenza A viruses. Microbiol.Rev. 1992; 56:152-179; Fouchier RA et al., Characterization of a Novel Influenza A Virus Hemagglutinin Subtype (H16) Obtained from Black-Headed Gulls. J. Virol. 2005; 79:2814-2822) ]. Los virus de todos los subtipos de HA y NA se han recuperado de aves acuáticas, pero solo tres subtipos de HA (H1, H2 y H3) y dos subtpos de NA (N1 y N2) han establecido linajes estables en la población humana desde 1918. Solo un subtipo de HA y uno de NA son reconocidos por los virus de la gripe B.

Los virus de la gripe A evolucionan y sufren variabilidad antigénica de forma continua [Wiley D, Skehel J. The structure and the function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus. Ann. Rev. Biochem. 1987:56:365-394]. Una falta de una corrección eficaz por parte de la ARN polimerasa del virus conduce a una elevada tasa de errores de transcripción que pueden dar lugar a sustituciones de aminoácidos en las glucoproteínas Esto se denomina “deriva antigénica”. El genoma viral segmentado permite un segundo tipo de variación antigénica. Si dos virus de la gripe infectan de forma simultánea a una célula huésped, reorganización genética, denominada “cambio antigénico”, pueden generar nuevos virus con una superficie nueva o proteínas internas nuevas. Estas variaciones antigénicas, tanto las “derivas” como los “cambios” son impredecibles y pueden tener un impacto espectacular desde un punto de vista inmunológico, ya que en última instancia conducen a la aparición de nuevas cepas de la gripe y permiten que el virus se escape del sistema inmunológico y produzca las bien conocidas y casi anuales epidemias. Estas modificaciones genéticas han producido nuevas variantes virales responsables de pandemias en seres humanos.

La HA es el antígeno más importante en la definición de la especificidad serológica de las diferentes cepas de gripe. Esta proteína de 75-80 kDa contiene numerosos determinantes antigénicos, varios de los que están en las regiones que sufren cambios de secuencia en diferentes cepas (determinantes específicos de cepas) y otros en regiones que son comunes a muchas moléculas de HA (común a los determinantes) .

Los virus de la gripe producen epidemias casi todos los inviernos, con tasas de infección para los virus de tipo A o B tan elevadas como del 40% en un periodo de seis semanas. La infección por gripe da como resultado varios estados de enfermedad, desde una infección subclínica a través de la infección de las vías respiratorias altas hasta una neumonía viral grave. Las epidemias típicas de gripe producen incrementos de la incidencia de neumonía y enfermedad de las vías respiratorias bajas como atestiguan las mayores tasas de hospitalización o mortalidad. La gravedad de la enfermedad viene determinada principalmente por la edad del huésped, su estado inmunitario y el lugar de la infección.

Los ancianos, de 65 años de edad y mayores, son especialmente vulnerables y constituyen el 89-90% de todas las muertes relacionadas con la gripe en los países desarrollados. Los individuos con enfermedades crónicas subyacentes también tienen una probabilidad mayor de experimentar dichas complicaciones. Los lactantes jóvenes también pueden sufrir enfermedad grave. Por tanto se tiene que proteger a estos grupos en concreto. Además de estos grupos “de riesgo”, las autoridades sanitarias también recomiendan vacunar a los profesionales sanitarios.

La vacunación desempeña un papel crucial en el control de la epidemia anual de la gripe. Las vacunas antigripales disponibles actualmente son vacunas con virus de la gripe inactivados o vivos atenuados. Las vacunas con virus de la gripe inactivados están compuestas por tres posibles formas de preparación antigénica: Virus enteros inactivados, subviriones donde las partículas víricas purificadas se han alterado con detergentes u otros reactivos para solubilizar la cubierta lipídica (la denominada vacuna “fraccionada”) o HA y NA purificadas (vacuna de subunidades) . Estas vacunas inactivadas se administran por vía intramuscular (i.m.) , subcutánea (s.c) o intranasal (i.n.) .

Las vacunas de la gripe para uso interpandémico, de todos los tipos, normalmente sin vacunas trivalentes. Generalmente contienen antígenos derivados de dos cepas del virus de la gripe A y una cepa de la gripe B. Una dosis inyectable estándar de 0, 5 ml en la mayoría de los casos contiene (al menos) 15 μg de componente antigénico de hemaglutinina de cada cepa, medido mediante inmunodifusión radial sencilla (SRD) (J.M. Wood y col.: An improved single radial immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: adaptation for potency determination of inactivated whole virus and subunit vaccines. J. Biol. Stand. 5 (1977) 237-247; J. M. Wood et al., International collaborative study of single radial diffusion and immunoelectrophoresis techniques for the assay of haemagglutinin antigen of influenza virus. J. Biol. Stand. 9 (1981) 317-330) .

Las cepas del virus de la gripe interpandémicas que se van a incorporar en la vacuna antigripal cada estación las determina la Organización Mundial de la Salud en colaboración con las autoridades sanitarias nacionales y los fabricantes de vacunas. Las vacunas de la gripe interpandémicas disponibles actualmente se consideran seguras en todos los grupos de edad (De Donato y col., 1999, Vaccine, 17, 3094-3101) . No obstante, existen pocas pruebas de que las vacunas actuales de la gripe funcionen en niños pequeños menores de dos años de edad. Adicionalmente, las tasas notificadas de eficacia de la vacuna en la prevención de enfermedades de gripe típicas confirmadas son de 23-72 % para los ancianos, que son significativamente menores que las tasas de eficacia del 60-90 % notificadas para adultos más jóvenes (Govaert, 1994, J. Am. Med. Assoc., 21, 166-1665; Gross, 1995, Ann Intern. Med. 123, 523-527) . Se ha demostrado que la eficacia de una vacuna de la gripe correlaciona con títulos séricos de anticuerpos de inhibición de la hemaglutinación frente a la cepa viral y en varios estudios se ha descubierto que los adultos mayores exhiben títulos de HI más bajos después de la inmunización frente a la gripe que los adultos más jóvenes (Murasko, 2002, Experimental gerontology, 37, 427-439) .

Una vacuna antigripal de subunidad adyuvada con el adyuvante MF59 en forma de una emulsión de aceite en agua está disponible comercialmente para los ancianos y en la población de riesgo y se ha demostrado su capacidad... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna antigripal monovalente que comprende un antígeno de virus de la gripe o preparación antigénica a partir de una cepa del virus de la gripe H5, H2, H9, H7 o H6 para su uso, en combinación con un adyuvante, en la protección contra infecciones gripales causadas por una cepa de la gripe H5, H2, H9, H7 o H6 variante, en la que la cantidad de antígeno no supera los 4 μg de hemaglutinina por dosis, en la que dicha adyuvante es una emulsión de aceite en agua que comprende un agente metabolizable, un tocoferol y un agente emulsionante, en la que el antígeno o preparación antigénica está en forma de un virus de la gripe fraccionado y en la que dicha cepa variante es una variante de deriva de la cepa a partir de la cual se prepara el antígeno o preparación antigénica.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 en la que dicho tocoferol es alfa-tocoferol.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en la que dicho aceite metabolizable es escualeno.

4. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la que dicho aceite metabolizable está presente en una cantidad del 0, 5% al 20% del volumen total de dicha composión inmunógena.

5. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la que dicho aceite metabolizable está presente en una cantidad del 1, 0% al 10% del volumen total de dicha composición inmunógena.

6. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en la que dicho aceite metabolizable está presente en una cantidad del 2, 0 % al 6, 0 % del volumen total de dicha composición inmunógena.

7. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la que dicho tocoferol o alfa-tocoferol está presente en una cantidad del 1, 0% al 20% del volumen total de dicha composición inmunógena.

8. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la que dicho tocoferol o alfa-tocoferol está presente en una cantidad del 1, 0% al 5, 0% del volumen total de dicha composición inmunógena.

9. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la que la relación de escualeno:tocoferol o de escualeno:alfa-tocoferol es igual o menor que 1.

10. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la que dicho agente emulsionante es Tween 80.

11. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la que dicho agente emulsionante está presente en una cantidad del 0, 01 al 5, 0 % en peso (p/p) de dicha composición inmunógena.

12. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 en la que dicho agente emulsionante está presente en una cantidad del 0, 1 al 2, 0 % en peso (p/p) de dicha composición inmunógena.

13. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la que dicho antígeno gripal o dicha composición antigénica gripal es derivada de cultivo celular o se produce en huevos embrionarios.

14. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en la que la cepa de gripe variante está asociada con una pandemia o tiene el potencial de estar asociada con una pandemia.

Fig. 2B Datos medios de PCR de H5N1 (gráfico de la izquierda) y datos de titulación media de virus (gráfico de la derecha) de tejidos pulmonares de hurones FIG. 5 Hoja de flujo de la formulación para el volumen final del antígeno Tampón del vol. Final (S9b) + [Triton X-100 + Tiomersal]

+ → agitación 5-30 minutos a temperatura ambiente A/Vietnam/194/2004 NIBRG14 (H5N1) 60/30/15/7, 6 μg HA/ml

+ → agitación 15-30 minutos a temperatura ambiente pH 7, 2 ± 0, 3 ↓ Volumen final del antígeno

→ almacenado a +2 a +8º C

Fig. 6 Ensayo clínico humano: GMT (con IC del 95%) para anticuerpo anti-HA en los puntos de tiempo los días 0, 21 y 42