Utilización de precursores de taquicininas y/o de sus fragmentos en diagnóstico médico.

Utilización de protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10,

sus fragmentos o sus precursores o combinaciones para diagnósticos médicos en una enfermedad,

· en la que se determina la presencia o concentración de los componentes mencionados en una muestra de líquido corporal ex vivo y

· en la que dicha utilización implica por lo menos un anticuerpo o combinaciones de anticuerpos que se unen específicamente a la protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10; sus fragmentos, y en la que dicha enfermedad es seleccionada de entre el grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, infecciones bacterianas, meningitis, septicemia, traumatismo y politraumatismo que comprende el traumatismo craneoencefálico, accidente cerebrovascular, y trastornos de la barrera hematoencefálica, enfermedades inflamatorias, neumonía, trastornos cerebrales, cardiopatía coronaria e infección local.

Utilización de precursores de taquicininas y/o de sus fragmentos en diagnóstico médico.

La presente invención se refiere a la utilización de la protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones en el diagnóstico médico.

Se puede utilizar la protaquicinina para diagnosticar una variedad de enfermedades que comprenden enfermedades/trastornos del sistema nervioso central, que comprenden la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad 10 de Parkinson, depresión y/o afecciones de dolor, enfermedades neurológicas, endocrinológicas, cerebrales, musculares, locales, generales, crónicas, inflamatorias, enfermedades infecciosas que comprenden las infecciones bacterianas y víricas, meningitis, septicemia, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, anemia depranocítica, isquemia, esclerosis lateral amiotrófica, artritis que comprende la artritis reumatoide, bronquitis, hiperalgesia, asma, la intoxicación que comprende la intoxicación bacteriana, trastornos inmunológicos, poli/traumatismo que comprende el traumatismo craneoencefálico, tumores/cáncer, accidente cerebrovascular, estrés, dermatitis atópica, VIH, enfermedad de Huntington, quemaduras, fibromialgia, esquizofrenia, la enfermedad de Hirschsprung, alergias, disautonomía familiar (síndrome de Riley Day) , trastornos hematopoyéticos, gliomas que comprenden los glioblastomas y los astrocitomas, los trastornos de la barrera hematoencefálica.

Antecedentes de la invención En 1931, Von Euler y Gaddum (Von Euler y Gaddum, 1931) aislaron el undecapéptido sustancia P. Se denominó sustancia P debido a su consistencia pulverulenta (Gaddum y Schild, 1934) . La sustancia P (SP) está codificada por el gen preprotaquicinina A (PPT-A) , que también comprende las secuencias génicas de otras taquicininas como neurocinina A (NKA) , neuropéptido K (NPK) y neuropéptido γ (NPγ) (Carter y Krause, 1990) . La neurocinina B está codificada por el gen TPP II o PPT-B. La sustancia P se expresa en el sistema nervioso central (SNC) , así como en el sistema nervioso periférico (SNP) (Otsuka y Yoshioka, 1993) .

Las taquicininas presentan diversas funciones. Tienen propiedades vasodilatadoras, son responsables de la contracción y relajación de los músculos lisos en el aparato digestivo y genitourinario, así como en los bronquios. Además, las taquicininas desempeñan una función importante en los reflejos de defensa provocados por lesiones o enfermedades dolorosas. Estos son, por ejemplo, el aumento de la tonicidad cardiovascular, la vasodilatación y activación de la biosíntesis de NO. La sustancia P tiene una influencia sobre diferentes células inflamatorias, sirve como neurotransmisor para transmitir el dolor y tiene función reguladora en la formación de sangre. Las taquicininas sin sustancia P Neurocinina A, Neuropéptido γ, así como el Neuropéptido K son propensas a desempeñar una función como reguladores de funciones endocrinas.

La concentración de sustancia P en los líquidos corporales se altera en varias enfermedades. En el plasma de pacientes de septicemia un aumento significativo de la concentración de sustancia P se muestra también en el plasma y el líquido sinovial de pacientes con artritis reumatoide (Joyce, Yood y Carraway, 1993) .

La sustancia P también parece desempeñar una función en las enfermedades inflamatorias intestinales como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.

La expresión de ARNm en la sustancia P aumenta significativamente en los macrófagos infectados por el VIH, lo que indica un efecto de esta taquicinina en infecciones por el VIH.

En el líquido de los pacientes de Alzheimer (de aparición tardía) y los pacientes que padecen esclerosis lateral amiotrófica se observa un aumento significativo de sustancia P.

En la enfermedad de Parkinson se observó una reducción o un aumento de sustancia P en el globo pálido medio en función del grado de reducción de dopamina en el putamen.

Los pacientes que padecen corea de Huntington, una enfermedad neurodegenerativa genéticamente dependiente, 55 presentaban una pérdida selectiva de neuronas que contienen preprotaquicinina en el cerebro.

En el suero de los pacientes con isquemia cerebral (inhibición temporal de la circulación sanguínea, así como accidente cerebrovascular) , se pudo determinar un aumento significativo en las concentraciones de la sustancia P.

Los pacientes con tumores carcinoides presentaban un aumento de la concentración de sustancia P y neuroquinina A en la circulación sanguínea, así como un aumento significativo en la inmunorreactividad de los metabolitos similares a la taquicinina en la orina. La sustancia P y la neuroquinina A posiblemente desempeñan también una función en la jaqueca, otros trastornos por sustancias farmacéuticas, en el desarrollo de glioma y tienen una fuerte influencia en la secreción en los bronquios y en la circulación bronquial, lo que sugiere que podrían desempeñar una 65 posible función como mediadores en el asma.

En los fumadores que padecen bronquitis crónica podría presentarse un aumento de diez veces en la concentración de PPT-A-ARNm en las células epiteliales de los pulmones.

En la fibromialgia y la depresión aumenta la concentración de la sustancia P en el suero y el líquido, así como aumenta en el suero de pacientes que padecen anemia depranocítica, especialmente en las fases dolorosas.

El aumento de las concentraciones de la sustancia P se mide en pacientes que padecen dermatitis atópica lo que se correlaciona con la gravedad de la enfermedad.

Las taquicininas tales como la sustancia P y neuroquinina A, desempeñan además una función en la regulación de las respuestas de citocinas proinflamatorias.

La biosíntesis de las taquicininas comienza como preprohormona. Durante la biosíntesis después de la separación de la secuencia N-terminal hidrófoba por la llamada peptidasa señal y el plegamiento de las proteínas en el lumen del retículo endoplásmico, los propéptidos migran en las vesículas del aparato de Golgi y son transportados a la membrana celular. Durante el transporte, los propéptidos se procesan a hormonas maduras por prohormonaconvertasas en secuencias de aminoácidos generalmente dibásicos. Mediante diferentes estímulos los péptidos se segregan en el espacio extracelular o en el plasma. Los péptidos maduros se inactivan rápidamente después de la secreción por proteólisis. La sustancia P y la neuroquinina A in vivo tienen una vida media sumamente baja inferior a 2 minutos en la sangre. El neuropéptido K presenta una degradación bifásica con una vida media de 0, 9 minutos (degradación a neuropéptido γ) y 6 minutos en el plasma (degradación adicional) .

La taquicinina sustancia P, neuroquinina A, neuropéptido K y neuropéptido γ están codificadas por el gen preprotaquicinina A (PPT-A) . El corte y empalme alternativo del transcrito del gen PPT-A produce 4 moléculas diferentes de ARNm: αPPT-A, βPPT-A, γPPT-A y ÎPPT-A. Las cuatro moléculas de ARNm contienen la secuencia de la sustancia P. Sólo el ARNm βPPT-A contiene todos los 7 exones del gen PPTA y por lo tanto codifica las 4 taquicininas. El exón 6 no se encuentra en el mRNA αPPT-A y los exones 4 y 6 están desapareciendo en el mRNA ÎPPT-A. Por lo tanto, sólo estos dos tipos de ARNm codifican la secuencia completa de la sustancia P. El exón 4 ha desapareciendo en el ARNm γPPT-A, por lo tanto el neuropéptido K puede no puede transcribirse a partir de este ARNm. La producción de la sustancia P por las 4 variantes de corte y empalme sugiere que cuando se expresa el gen PPT-A, también se produce la sustancia P. La expresión del ARNm αPPT-A se produce predominantemente en el cerebro, mientras que T moléculas de ARNm βPPT-A y γPPT-A se expresan predominantemente en el tejido periférico.

El fragmento 1-37 de PTK-A desempeña una función fundamental en esta invención y se denomina péptido-A en la presente memoria.

Descripción detallada de la invención La sustancia P y otras taquicininas pueden detectarse en diferentes líquidos corporales, tejidos y otros biomateriales.

La corta vida media de taquicininas en la sangre, sin embargo, ha impedido hasta el momento la utilización de taquicininas, especialmente de la sustancia P, en el diagnóstico de rutina. Debido a la corta vida media de taquicininas, no es posible en la rutina clínica tomar muestras, obtener el plasma, transportar la muestra al laboratorio y hacer el diagnóstico en el laboratorio, incluyendo las pruebas necesarias antes que la degradación de taquicinina alcance un nivel crítico.

Por lo tanto debido a la baja estabilidad in vivo de las taquicininas... [Seguir leyendo]

1. Utilización de protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones para diagnósticos médicos en una enfermedad, 5

â?¢ en la que se determina la presencia o concentración de los componentes mencionados en una muestra de líquido corporal ex vivo y

â?¢ en la que dicha utilización implica por lo menos un anticuerpo o combinaciones de anticuerpos que se unen

específicamente a la protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10; sus fragmentos, y en la que dicha enfermedad es seleccionada de entre el grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, infecciones bacterianas, meningitis, septicemia, traumatismo y politraumatismo que comprende el traumatismo craneoencefálico, accidente cerebrovascular, y trastornos de la barrera hematoencefálica, enfermedades inflamatorias, neumonía, trastornos cerebrales, cardiopatía coronaria e infección local.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que se utiliza una variante de corte y empalme seleccionada de entre los ID de secuencia 1, 2, 5 u 8 o una mezcla de dos o más variantes.

3. Utilización según la reivindicación 1, en la que se utiliza un fragmento seleccionado de entre uno o más de los ID 20 de secuencia 3, 4, 6, 7, 9 o 10.

4. Utilización según la reivindicación 1, en la que se utiliza un derivado de la protaquicinina que comprende aminoácidos alterados o adicionales o fragmentos/componentes aptos para elevar las respuestas inmunitarias o fragmentos/componentes que proporcionan las secuencias aptas para la detección mediante anticuerpos específicos.

5. Utilización según las reivindicaciones 1 a 4 en combinación con un marcador, que es apto para detectar cualquier protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones o un compuesto que se une específicamente a la misma.

6. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que comprende determinar la concentración de cualquier protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones en una muestra de líquido corporal ex vivo seleccionada de entre el grupo que comprende sangre, plasma o líquido de un individuo, ser humano o animal.

7. Utilización según las reivindicaciones 1 a 6, en la que dicho por lo menos un anticuerpo está marcado con un marcador detectable.

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que el marcador es un marcador luminiscente. 40

9. Procedimiento in vitro de diagnóstico de una enfermedad, comprendiendo dicho procedimiento determinar la concentración de protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones en líquidos corporales ex vivo y en el que dicha enfermedad es seleccionada de entre enfermedad de Alzheimer, infecciones bacterianas, meningitis, septicemia, traumatismo y politraumatismo que comprende el 45 traumatismo craneoencefálico, accidente cerebrovascular, y trastornos de la barrera hematoencefálica, enfermedades inflamatorias, neumonía, trastornos cerebrales, cardiopatía coronaria e infección local, comprendiendo dicho procedimiento:

- utilizar un anticuerpo o combinaciones de anticuerpos que se unen específicamente a la protaquicinina 1-37 50 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o combinaciones, -determinar la concentración de protaquicinina 1-37 (péptido A) según SEC ID nº 10, sus fragmentos o sus precursores o combinaciones en la muestra respectiva, 55 -deducir a partir de la concentración la presencia y/o evolución y/o gravedad y/o pronóstico de dicha enfermedad o trastorno, -incluir unos datos clínicos adicionales para determinar la presencia y/o evolución y/o gravedad y/o pronóstico de enfermedades o trastornos. 60

10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicho líquido corporal es seleccionado de entre el grupo que comprende sangre, plasma o líquido.