Utilización de precursores de taquicininas y/o de sus fragmentos en diagnóstico médico.

Utilización de protaquicinina según la SEC. ID. nº 10 para diagnósticos médicos,

en la que se determina la presencia o concentración de la protaquicinina según la SEC. ID. nº 10 en una muestra de líquido corporal ex vivo y en la que la correlación de la protaquicinina según la SEC. ID. nº 10 con la sustancia P se utiliza para determinar el estado de la enfermedad/trastorno en los líquidos corporales.

Utilizaciïn de precursores de taquicininas y/o de sus fragmentos en diagnïstico mïdico.

La presente invenciïn se refiere a la utilizaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10.

Se puede utilizar la protaquicinina para diagnosticar una variedad de enfermedades que comprenden enfermedades/trastornos del sistema nervioso central, que comprenden la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, depresiïn y/o afecciones de dolor, enfermedades neurolïgicas, endocrinolïgicas, cerebrales, musculares, locales, generales, crïnicas, inflamatorias, enfermedades infecciosas que comprenden las infecciones bacterianas y vïricas, meningitis, septicemia, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, anemia depranocïtica, isquemia, esclerosis lateral amiotrïfica, artritis que comprende la artritis reumatoide, bronquitis, hiperalgesia, asma, la intoxicaciïn que comprende la intoxicaciïn bacteriana, trastornos inmunolïgicos, poli/traumatismo que comprende el traumatismo craneoencefïlico, tumores/cïncer, accidente cerebrovascular, estrïs, dermatitis atïpica, VIH, enfermedad de Huntington, quemaduras, fibromialgia, esquizofrenia, la enfermedad de Hirschsprung, alergias, disautonomïa familiar (sïndrome de Riley Day) , trastornos hematopoyïticos, gliomas que comprenden los glioblastomas y los astrocitomas, los trastornos de la barrera hematoencefïlica.

La invenciïn se refiere ademïs a utilizaciones de anticuerpos producidos contra protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 y a utilizaciones de kits que implican a protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10.

Antecedentes de la invenciïn En 1931, Von Euler y Gaddum (Von Euler y Gaddum, 1931) aislaron el undecapïptido sustancia P. Se denominï sustancia P debido a su consistencia pulverulenta (Gaddum y Schild, 1934) . La sustancia P (SP) estï codificada por el gen preprotaquicinina A (PPT-A) , que tambiïn comprende las secuencias gïnicas de otras taquicininas como neurocinina A (NKA) , neuropïptido K (NPK) y neuropïptido y (NPy) (Carter y Krause, 1990) . La neurocinina B estï codificada por el gen TPP II o PPT-B. La sustancia P se expresa en el sistema nervioso central (SNC) , asï como en el sistema nervioso perifïrico (SNP) (Otsuka y Yoshioka, 1993) .

Las taquicininas presentan diversas funciones. Tienen propiedades vasodilatadoras, son responsables de la contracciïn y relajaciïn de los mïsculos lisos en el aparato digestivo y genitourinario, asï como en los bronquios. Ademïs, las taquicininas desempeïan una funciïn importante en los reflejos de defensa provocados por lesiones o enfermedades dolorosas. Estos son, por ejemplo, el aumento de la tonicidad cardiovascular, la vasodilataciïn y activaciïn de la biosïntesis de NO. La sustancia P tiene una influencia sobre diferentes cïlulas inflamatorias, sirve como neurotransmisor para transmitir el dolor y tiene funciïn reguladora en la formaciïn de sangre. Las taquicininas sin sustancia P Neurocinina A, Neuropïptido y, asï como el Neuropïptido K son propensas a desempeïar una funciïn como reguladores de funciones endocrinas.

La concentraciïn de sustancia P en los lïquidos corporales se altera en varias enfermedades. En el plasma de pacientes de septicemia un aumento significativo de la concentraciïn de sustancia P se muestra tambiïn en el plasma y el lïquido sinovial de pacientes con artritis reumatoide (Joyce, Yood y Carraway, 1993) .

La sustancia P tambiïn parece desempeïar una funciïn en las enfermedades inflamatorias intestinales como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.

La expresiïn de ARNm en la sustancia P aumenta significativamente en los macrïfagos infectados por el VIH, lo que indica un efecto de esta taquicinina en infecciones por el VIH.

En el lïquido de los pacientes de Alzheimer (de apariciïn tardïa) y los pacientes que padecen esclerosis lateral amiotrïfica se observa un aumento significativo de sustancia P.

En la enfermedad de Parkinson se observï una reducciïn o un aumento de sustancia P en el globo pïlido medio en funciïn del grado de reducciïn de dopamina en el putamen.

Los pacientes que padecen corea de Huntington, una enfermedad neurodegenerativa genïticamente dependiente, presentaban una pïrdida selectiva de neuronas que contienen preprotaquicinina en el cerebro.

En el suero de los pacientes con isquemia cerebral (inhibiciïn temporal de la circulaciïn sanguïnea, asï como accidente cerebrovascular) , se pudo determinar un aumento significativo en las concentraciones de la sustancia P.

Los pacientes con tumores carcinoides presentaban un aumento de la concentraciïn de sustancia P y neuroquinina A en la circulaciïn sanguïnea, asï como un aumento significativo en la inmunorreactividad de los metabolitos similares a la taquicinina en la orina. La sustancia P y la neuroquinina A posiblemente desempeïan tambiïn una funciïn en la jaqueca, otros trastornos por sustancias farmacïuticas, en el desarrollo de glioma y tienen una fuerte influencia en la secreciïn en los bronquios y en la circulaciïn bronquial, lo que sugiere que podrïan desempeïar una posible funciïn como mediadores en el asma.

En los fumadores que padecen bronquitis crïnica podrïa presentarse un aumento de diez veces en la concentraciïn de PPT-A-ARNm en las cïlulas epiteliales de los pulmones.

En la fibromialgia y la depresiïn aumenta la concentraciïn de la sustancia P en el suero y el lïquido, asï como aumenta en el suero de pacientes que padecen anemia depranocïtica, especialmente en las fases dolorosas.

El aumento de las concentraciones de la sustancia P se mide en pacientes que padecen dermatitis atïpica lo que se correlaciona con la gravedad de la enfermedad.

Las taquicininas tales como la sustancia P y neuroquinina A, desempeïan ademïs una funciïn en la regulaciïn de las respuestas de citocinas proinflamatorias.

La biosïntesis de las taquicininas comienza como preprohormona. Durante la biosïntesis despuïs de la separaciïn de la secuencia N-terminal hidrïfoba por la llamada peptidasa seïal y el plegamiento de las proteïnas en el lumen del retïculo endoplïsmico, los propïptidos migran en las vesïculas del aparato de Golgi y son transportados a la membrana celular. Durante el transporte, los propïptidos se procesan a hormonas maduras por prohormonaconvertasas en secuencias de aminoïcidos generalmente dibïsicos. Mediante diferentes estïmulos los pïptidos se segregan en el espacio extracelular o en el plasma. Los pïptidos maduros se inactivan rïpidamente despuïs de la secreciïn por proteïlisis. La sustancia P y la neuroquinina A in vivo tienen una vida media sumamente baja inferior a 2 minutos en la sangre. El neuropïptido K presenta una degradaciïn bifïsica con una vida media de 0, 9 minutos (degradaciïn a neuropïptido y) y 6 minutos en el plasma (degradaciïn adicional) .

La taquicinina sustancia P, neuroquinina A, neuropïptido K y neuropïptido y estïn codificadas por el gen preprotaquicinina A (PPT-A) . El corte y empalme alternativo del transcrito del gen PPT-A produce 4 molïculas diferentes de ARNm: aPPT-A, ºPPT-A, yPPT-A y oPPT-A. Las cuatro molïculas de ARNm contienen la secuencia de la sustancia P. Sïlo el ARNm ºPPT-A contiene todos los 7 exones del gen PPTA y por lo tanto codifica las 4 taquicininas. El exïn 6 no se encuentra en el mRNA aPPT-A y los exones 4 y 6 estïn desapareciendo en el mRNA oPPT-A. Por lo tanto, sïlo estos dos tipos de ARNm codifican la secuencia completa de la sustancia P. El exïn 4 ha desapareciendo en el ARNm yPPT-A, por lo tanto el neuropïptido K puede no puede transcribirse a partir de este ARNm. La producciïn de la sustancia P por las 4 variantes de corte y empalme sugiere que cuando se expresa el gen PPT-A, tambiïn se produce la sustancia P. La expresiïn del ARNm aPPT-A se produce predominantemente en el cerebro, mientras que T molïculas de ARNm ºPPT-A y yPPT-A se expresan predominantemente en el tejido perifïrico.

El fragmento 1-37 de PTK-A desempeïa una funciïn fundamental en esta invenciïn y se denomina pïptido-A en la presente memoria.

Descripciïn detallada de la invenciïn La sustancia P y otras taquicininas pueden detectarse en diferentes lïquidos corporales, tejidos y otros biomateriales.

La corta vida media de taquicininas en la sangre, sin embargo, ha impedido hasta el momento la utilizaciïn de taquicininas, especialmente de la sustancia P, en el diagnïstico de rutina. Debido a la corta vida media de taquicininas, no es posible en la rutina clïnica tomar muestras, obtener el plasma, transportar la muestra al laboratorio y hacer el diagnïstico en el laboratorio, incluyendo las pruebas necesarias antes que la degradaciïn de taquicinina alcance un nivel crïtico.

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1. Utilizaciïn de protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 para diagnïsticos mïdicos, en la que se determina la presencia o concentraciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 en una muestra de lïquido corporal ex vivo y en la que la correlaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 con la sustancia P se utiliza para determinar el estado de la enfermedad/trastorno en los lïquidos corporales.

2. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 1 en combinaciïn con un marcador, que es adecuado para detectar la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 mencionada en la reivindicaciïn 1 o un compuesto que se une especïficamente a la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10.

3. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 1 que comprende determinar la concentraciïn de protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 mencionada en la reivindicaciïn 1 en una muestra de un lïquido corporal de un individuo, ser humano o animal.

4. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 3 en la que la determinaciïn de la concentraciïn se realiza utilizando por lo menos un anticuerpo que se une especïficamente a la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 mencionada en la reivindicaciïn 1.

5. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 4 en la que dicho por lo menos un anticuerpo estï marcado con un marcador detectable.

6. Utilizaciïn segïn la reivindicaciïn 5 en la que el marcador es un marcador luminiscente.

7. Utilizaciïn segïn una de las reivindicaciones 3 a 6 en la que dicha utilizaciïn implica uno o mïs de los anticuerpos que se unen especïficamente a 1-37 de la protaquicinina (pïptido A) .

8. Utilizaciïn segïn una de las reivindicaciones 1 a 7 en la que las enfermedades que deben detectarse comprenden enfermedades/trastornos del sistema nervioso central, que comprenden la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, depresiïn y/o afecciones de dolor, enfermedades neurolïgicas, endocrinolïgicas, cerebrales, musculares, locales, sistïmicas, crïnicas, inflamatorias, enfermedades infecciosas que comprenden las infecciones bacterianas y vïricas, meningitis, septicemia, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, anemia depranocïtica, isquemia, esclerosis lateral amiotrïfica, artritis que comprende la artritis reumatoide, bronquitis, hiperalgesia, asma, intoxicaciïn que comprende la intoxicaciïn bacteriana, trastornos inmunolïgicos, poli/traumatismo que comprende el traumatismo craneoencefïlico, tumores/cïncer, accidente cerebrovascular, estrïs, dermatitis atïpica, VIH, enfermedad de Huntington, quemaduras, fibromialgia, esquizofrenia, la enfermedad de Hirschsprung, alergias, disautonomïa familiar (sïndrome de Riley Day) , trastornos hematopoyïticos, gliomas que comprenden los glioblastomas y los astrocitomas, trastornos de la barrera hematoencefïlica.

9. Utilizaciïn de un anticuerpo que es especïfico para 1-37 de protaquicinina (pïptido A) para diagnïsticos mïdicos en la que la correlaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 con la sustancia P se utiliza para determinar el estado de enfermedad/trastorno en los lïquidos corporales.

10. Procedimiento in vitro de diagnïstico que comprende la determinaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 en los lïquidos corporales que comprende:

-utilizar un anticuerpo especïfico o una combinaciïn de anticuerpos especïficos para la detecciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10,

-determinar la concentraciïn de protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 en la muestra respectiva,

-deducir a partir de la concentraciïn la presencia y/o evoluciïn y/o gravedad y/o pronïstico de una enfermedad o trastorno,

-incluir datos clïnicos suplementarios para determinar la presencia y/o evoluciïn y/o gravedad y/o pronïstico de enfermedades o trastornos, y en el que la correlaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 con la sustancia P se utiliza para determinar el estado de la enfermedad/trastorno en los lïquidos corporales.

11. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 10 en el que por lo menos un anticuerpo que se une especïficamente al compuesto respectivo estï inmovilizado sobre una superficie y se utiliza un segundo anticuerpo que se une especïficamente a otra parte del compuesto para la detecciïn del compuesto.

12. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 11 en el que el anticuerpo estï marcado con un marcador detectable.

13. Procedimiento segïn la reivindicaciïn 12 en el que el anticuerpo estï marcado con un marcador luminiscente.

14. Procedimiento segïn las reivindicaciones 10 a 13 siendo el anticuerpo o las combinaciones de anticuerpos anticuerpos que se unen especïficamente a 1-37 de protaquicinina (pïptido A) .

15. Utilizaciïn de un kit para un anïlisis inmunolïgico que comprende: 5

-por lo menos un anticuerpo que se une a la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10, que comprende un marcador detectable, o

-por lo menos un anticuerpo que se une a la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 y un marcador detectable, 10 en la que dicho por lo menos un anticuerpo es especïfico para la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10,

y en la que la correlaciïn de la protaquicinina segïn la SEC. ID. nï 10 con la sustancia P se utiliza para determinar el estado de la enfermedad/trastorno en los lïquidos corporales. 15