Uso de receptores semejantes a Toll y agonista para tratar cáncer.

Un vector que comprende un primer y segundo ácido nucleico, en el que el primer ácido nucleico codifica un receptor semejante a toll y el segundo ácido nucleico codifica un agonista del receptor semejante a toll seleccionado del grupo que consiste en proteínas de choque térmico,

alta movilidad del grupo de caja 1, fibrinógeno, fibronectina, proteína de fusión RSV, proteínas de la cubierta del virus de tumor mamario de ratón, flagelina y profilina.

Uso de receptores semejantes a Toll y agonista para tratar cáncer

Campo de la invención Esta invención se refiere a métodos para tratar cáncer y enfermedades infecciosas.

Antecedentes de la invención Los receptores semejantes a Toll son responsables del reconocimiento de los patrones más comunes de patógenos bacterianos y virales. Su activación resulta en el reclutamiento de la respuesta inmune innata y posteriormente adaptativa. Las células receptoras del sistema inmune en el sitio de la presencia de antígenos es una etapa clave en una respuesta inmune eficaz. Ésta es la razón por la que la inmunización implica el uso de diferentes tipos de adyuvantes. Aunque la mayoría de los tumores expresan antígenos específicos de tumor, usan varios mecanismos que les permiten escapar del reconocimiento inmune. Se ha demostrado recientemente en modelos de ratón que la activación de TLR5 por su ligando y agonista, flagelina bacteriana, resulta en la inducción de un efecto antitumoral frente a aquellos tumores que expresan TLR5 funcional. Esto abre una oportunidad general para considerar a los agonistas de TLR5 en la inmunoterapia del cáncer. Existen dos obstáculos principales en el camino de llevar esta idea a la práctica. En primer lugar, está la rara incidencia de tumores que expresan TLR5 funcional que limita la aplicabilidad de esta estrategia sólo a un subconjunto pequeño de tumores. En segundo lugar, la administración sistémica de agonista de TLR5 da lugar a la activación de la señalización de TLR5 es todas las células que tienen receptor funcional haciendo que la respuesta no esté centrada y no sea específica de tumor. De acuerdo con esto, existe una necesidad en la técnica de un mecanismo o método para la activación autocrina de la señalización del receptor TLR en células infectadas o tumorales con un efecto sistémico mínimo permitiendo así atraer la respuesta inmune innata específicamente a la célula infectada o tumoral.

Resumen de la invención La presente invención puede estar dirigida a un vector que comprende un primer y segundo ácido nucleico, en el que el primer ácido nucleico codifica un receptor semejante a toll y el segundo ácido nucleico codifica un agonista de receptor semejante a toll. El primer ácido nucleico puede codificar una forma secretada de un receptor semejante a toll. El segundo ácido nucleico puede ser una forma secretada de flagelina. El agonista de receptor semejante a toll puede ser flagelina. El vector puede ser un vector de expresión de mamíferos. El vector puede expresarse a partir de un adenovirus, un lentivirus o un liposoma. La forma secretada de flagelina puede ser CBLB502S. El receptor semejante a toll puede ser TLR-5.

La presente invención puede usarse para tratar cáncer en un mamífero que comprende administrar a un mamífero que lo necesite un agente que comprende el vector que comprende un primer y segundo ácido nucleico, en el que el primer ácido nucleico codifica un receptor semejante a toll y el segundo ácido nucleico codifica un agonista de receptor semejante a toll. El cáncer puede ser un tumor. El tumor puede derivar del grupo que consiste en próstata, mama, colon, esófago, estómago, pulmón, pancreático, renal, tiroides, ovarios garganta o el cuello uterino. El tumor puede derivar del grupo que consiste en sarcomas, melenomas, leucemias y linfomas. El agente puede administrarse en trans o fuera del tumor del mamífero. El agente puede administrarse directamente en un tumor del mamífero. El agente puede administrarse en combinación con un inmunoestimulador. El inmunoestimulador puede seleccionarse del grupo que consiste en hormona del crecimiento, prolactina y vitamina D. La hormona de crecimiento puede ser somatotrofina. El agente puede administrarse en combinación con una citoquina. La citoquina puede ser un factor de células madre.

La presente invención también puede usarse para tratar una infección en un mamífero que comprende administrar a un mamífero que lo necesite el agente del agente que comprende el vector que comprende un primer y segundo ácido nucleico, en el que el primer ácido nucleico codifica un receptor semejante a toll y el segundo ácido nucleico codifica un agonista de receptor semejante a toll. El cáncer puede ser un tumor. La infección puede derivar del grupo que consiste en virus, bacterias, parásitos protozoarios y hongos.

Descripción breve de los dibujos La Figura 1A-1C representa mapas esquemáticos de vectores adenovirales que expresan TLR5, CBLB502S y su combinación (TLR5 + CBLB502S) .

La Figura 2 representa los resultados de la proporción del volumen tumoral en ratones durante un número de días en células tumorales (A549) transducidas con un vector control (sin TLR5) o vector que expresa TLR5 en el que los ratones se tratan tres días bien con CBLB502S o PBS.

La Figura 3 representa la supresión del crecimiento tumoral por inyección de adenovirus que comprenden vector que coexpresa CBLB502S y receptor semejante a Toll en el que el adenovirus se inyecta en tumor de carcinoma de colon CT26 de ratones singénicos y se estudian los efectos en cis y en trans de las construcciones de vectores adenovirales.

La Figura 4 muestra la estructura de dominio de flagelina bacteriana. La traza del núcleo Ca, distribución del núcleo hidrofóbico e información estructural de F41. Cuatro núcleos hidrofóbicos distintos que definen los dominios D1, D2a, D2b y D3. Todos los átomos de cadena lateral hidrofóbicos se representan con el núcleo Ca. Los átomos de la cadena lateral están codificados por color: Ala, amarillo; Leu, Ile o Val, naranja; Phe y Tyr, morado (átomos de carbono) y rojo (átomos de oxígeno) . c, Posición y región de varias características estructurales en la secuencia de aminoácidos de la flagelina. Se muestran, de arriba a abajo: el fragmento F41 en azul; tres plegamientos en hoja b en marrón; la distribución de la estructura secundaria con una hélice a en amarillo, estructura b en verde y giro b en morado; la marca tic en cada 50 residuo en azul; los dominios D0, D1, D2 y D3; la región de contacto de la subunidad axial en el proto-elemento en magenta; la secuencia de aminoácidos bien conservada en rojo y la región variable en violeta; las mutaciones puntuales en F41 que producen los elementos de diferentes superenrrollamientos. Las letras en la parte inferior indican la morfología de elementos mutantes: L (D107E, R124A, R124S, G426A) , lineal tipo L; R (A449V) , lineal tipo R; C (D313Y, A414V, A427V, N433D) , curly33.

La Figura 5 muestra un esquema de los dominios de flagelina de Salmonella, sus fragmentos y su interacción con TLR5. Las barras oscuras indican regiones del gen de flagelina usadas para construir fragmentos que comprenden A, B, C, A' y B'.

La Figura 6 representa derivados de flagelina. La estructura de dominio y límites aproximados (coordenadas de aminoácidos) de derivados de flagelina seleccionados (listados a la derecha) . La flagelina FliC de Salmonella dublin está codificada en 505 aminoácidos (aa) .

La Figura 7 muestra la secuencia de nucleótidos y aminoácidos para las variantes de flagelina siguientes: AA' (SEQ ID NO: 7-8) , AB' (SEQ ID NO: 9-10) , BA' (SEQ ID NO: 11-12) , BB' (SEQ ID NO: 13-14) , CA' (SEQ ID NO: 15-16) , CB' (SEQ ID NO: 17-18) , A (SEQ ID NO: 19-20) , B (SEQ ID NO: 21-22) , C (SEQ ID NO: 23-24) , GST-A' (SEQ ID NO: 2526) , GST-B' (SEQ ID NO: 27-28) , AA'n1-170 (SEQ ID NO: 29-30) , AA'n1-163 (SEQ ID NO: 33-34) , AA'n54-170 (SEQ ID NO: 31-32) , AA'n54-163 (SEQ ID NO: 335-36) , AB'n1-170 (SEQ ID NO: 37-38) , AB'n1-163 (SEQ ID NO: 39-40) , AA'n1-129 (SEQ ID NO: 41-42) , AA'n54-129 (SEQ ID NO: 43-44) , AB'n1-129 (SEQ ID NO: 45-46) , AB'n54-129 (SEQ ID NO: 47-48) , AA'n1-100 (SEQ ID NO: 49-50) , AB'n1-100 (SEQ ID NO: 51-52) , AA'n1-70 (SEQ ID NO: 53-54) y AB'n1-70 (SEQ ID NO: 55-56) . La secuencia líder pRSETb se muestra en itálica (el líder incluye Met, que también es el aminoácido 1 de FliC) . El dominio constante N terminal está subrayado. La secuencia conectora de aminoácidos está en negrita. El dominio constante C terminal está subrayado. GST, si está presente, está resaltado.

La Figura 8 muestra una comparación de secuencias de aminoácidos del extremo conservado amino (Fig. 8A) y carboxi (Fig. 8B) de 21 especies de bacterias. Los 13 aminoácidos conservados importantes para la actividad TLR5 se muestran con sombreado. Las secuencias de aminoácidos se identifican por sus números de registro de TrEMBL (primera letra= Q) o Swiss-Prot (primera letra= P) .

La Figura 9 muestra la secuencia de ácido nucleico y aminoácidos para la proteína receptora semejante a Toll 5 humana.

Descripción detallada Los inventores han hecho el descubrimiento sorprendente de que la provisión... [Seguir leyendo]

1. Un vector que comprende un primer y segundo ácido nucleico, en el que el primer ácido nucleico codifica un receptor semejante a toll y el segundo ácido nucleico codifica un agonista del receptor semejante a toll seleccionado del grupo que consiste en proteínas de choque térmico, alta movilidad del grupo de caja 1, fibrinógeno, fibronectina,

proteína de fusión RSV, proteínas de la cubierta del virus de tumor mamario de ratón, flagelina y profilina.

2. El vector de la reivindicación 1, en el que el agonista del receptor semejante a toll es flagelina.

3. El vector de la reivindicación 1, en el que el vector es un vector de expresión.

4. El vector de la reivindicación 3, en el que el vector es un vector de expresión de mamíferos.

5. El vector de la reivindicación 3, en el que el vector se expresa a partir de un adenovirus, un lentivirus o un 10 liposoma.

6. El vector de la reivindicación 1, en el que el primer ácido nucleico es una forma secretada de un receptor semejante a toll.

7. El vector de la reivindicación 2, en el que la flagelina es una forma secretada de flagelina.

8. El vector de la reivindicación 1, en el que el receptor semejante a toll es TLR-5.

9. El vector de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso como un medicamento.

10. Un agente para uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero que lo necesita, en el que el agente comprende el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8.

11. El agente para uso de la reivindicación 10, en el que el cáncer es un tumor.

12. El agente para uso de la reivindicación 11, en el que el tumor deriva del grupo que consiste en próstata, mama,

colon, esófago, estómago, pulmón, pancreático, renal, tiroides, ovarios, garganta, cuello uterino, sarcomas, melenomas, leucemias y linfomas.

13. Un agente para uso en el tratamiento de una infección en un mamífero que lo necesita, en el que el agente comprende el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8.

14. El agente para uso de la reivindicación 13, en el que la infección es por un organismo seleccionado del grupo 25 que consiste en un virus, una bacteria, un parásito protozoario y un hongo.