Una nueva cepa de Bifidobacterium y péptidos activos contra infecciones por rotavirus.

Una cepa de Bifidobacterium longum biovariedad infantis depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con el número de registro CECT 7210,

o un mutante de la misma que tiene una actividad de inhibición de rotavirus y que tiene la capacidad de producir un péptido a partir de la fermentación de la β-caseína de la leche de vaca, teniendo el péptido una longitud de 11 a 17 aminoácidos y una secuencia de aminoácidos que comprende la SEC ID Nº: 1.

Una nueva cepa de Bifidobacteríum y péptidos activos contra infecciones por rotavirus

[1] La presente invención se refiere a una nueva cepa de Bifidobacteríum que tiene actividad anti-rotavirus. Por tanto, la invención se refiere al uso de estos agentes para el tratamiento o la profilaxis de la diarrea producida por rotavirus.

Técnica anterior

[2] El rotavirus pertenece a la familia Reovirídae y recibió el nombre de "rota" debido a su doble cápside que se parece a una rueda de carro. Desde que se descubrió se ha confirmado, mediante muchos estudios epidemiológicos realizados en todo el mundo, que el rotavirus es una causa principal de diarrea aguda en bebés y en niños pequeños. Los rotavirus se dividen en 6 grupos antigénicos diferentes (A-F). Los rotavirus del grupo A, B y C se

encuentran tanto en seres humanos como en animales, y los rotavirus de los grupos D, E y F solo se encuentran en animales. Los rotavirus del grupo A se distribuyen principalmente entre cepas derivadas de ser humano y los subgrupos se determinan por su proteína de la cápside interna VP6 y los tipos serológicos se determinan por las proteínas de la cápside externa VP7 y VP4. Dentro del grupo A, se han diferenciado 4 subgrupos. Existen al menos 14 serotipos G, de G1 a G14, en base a la antigenicidad de la proteína VP7, y 12 serotipos P, en base a las 2 propiedades antigénicas de la proteína VP4.

[3] Se sabe que los rotavirus son la causa principal de diarrea aguda y enteritis en niños y en animales jóvenes de ganado, caballos, cerdos y monos. La transmisión de la infección se produce principalmente mediante la vía fecal-oral. Los rotavirus producen frecuentemente una diarrea acuosa aguda en niños menores de 5 años.

[4] Esta diarrea inducida por rotavirus es el resultado de alteraciones en la absorción de células epiteliales de la mucosa intestinal causadas por la infección viral. Una vez infectados los enterocitos del intestino delgado, el virus prolifera en su citoplasma y ocasiona una disfunción en diversos sistemas de transporte (iones y/o solutos y agua). Las células dañadas sufren descamación y desprenden hacia el exterior el virus en el lumen intestinal, de tal manera

que el virus puede encontrarse en las heces. Cuando los rotavirus se replican, las células de las vellosidades dañadas se reemplazan por células inmaduras de la cripta que no tienen capacidad de absorción, produciendo una mala absorción del sodio y la glucosa, lo que da como resultado la diarrea. Además, se ha identificado una proteína de rotavirus no estructural, la NSP4, como una enterotoxina viral. La NSP4 aumenta los niveles de calcio intracelular y afecta a la permeabilidad de las membranas plasmáticas, produciendo una salida de cloro, sodio y agua, 35 induciendo por lo tanto una diarrea secretora.

[5] La Organización Mundial de la Salud calcula que cinco millones de niños menores de 5 años mueren de diarrea cada año, y el 2 % de ellos mueren por diarrea inducida por rotavirus. La diarrea inducida por rotavirus prevalece durante el invierno y es una de las causas principales de mortalidad infantil en países desarrollados. La

mejor medida para prevenir la enfermedad es la lactancia materna. Dado que la leche de la madre contiene IgA que actúan contra rotavirus, la lactancia materna puede impedirla diarrea infantil causada por rotavirus.

[6] En los últimos años las investigaciones se han centrado en el posible uso de agentes probióticos. Los probióticos se definen como microorganismos vivos que, cuando se administran en cantidades adecuadas, confieren

al hospedador un beneficio saludable. Los beneficios que se conocen sobre la administración enteral de microorganismos probióticos incluyen defensa potenciada del hospedador contra la enfermedad mejorando las propiedades de la microflora endógena y aumento de la resistencia a la colonización contra la microflora perjudicial. Se ha sugerido que los probióticos desempeñan una importante función en la formación o establecimiento de una microflora intestinal bien equilibrada, indígena, en niños recién nacidos o en adultos que reciben altas dosis de 5 antibióticos. Se han recomendado bacterias acidolácticas, especialmente cepas específicas de Lactobacillus y de especies de los géneros Streptococcus, Enterococcus y Bifidobacteríum para su uso como probióticos.

[7] Desde 196 el género bacteriano Lactobacillus se ha estudiado frecuentemente en niños con respecto a sus propiedades antidiarreicas. Estudios publicados en la bibliografía mundial han llegado a la conclusión de que el

Lactobacillus es de hecho inocuo y eficaz en el tratamiento y prevención de la diarrea infecciosa, diarrea asociada con antibióticos y diarrea en niños que son muy susceptibles como resultado de una mala nutrición, estado inmunitario alterado, o frecuente exposición a patógenos. A pesar de estos informes, médicos de los Estados Unidos no recomiendan rutinariamente el uso Lactobacillus, pensando quizás que su eficacia aún no se ha probado (consúltese, C.W. Christakis et al., "Lactobacillus therapy for acute infectious diarrhea in children: A meta-analysis" 6 Pediatrics 22, vol. 19, págs. 678-84). J.M. Saavedra et al., "Feeding of Bifidobacteríum bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention of diarrhea and shedding of rotavirus" Lancet 1994, vol. 344, págs. 146-9, analizaron una fórmula con Bifidobacteríum bifidum y Streptococcus thermophilus con niños hospitalizados.

[8] Diversos estudios han mostrado la eficacia de otros agentes probióticos, incluyendo Lactobacillus

rhamnosus GG (LGG), en la prevención de la diarrea. Diversos ensayos clínicos pediátricos mostraron la eficacia del LGG en el tratamiento de la gastroenteritis por rotavirus (consúltese, Guandalini et al., "Lactobacillus GG administered in oral rehydration solution to children wlth acute diarrhea: a multicenter European study", J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2, vol. 3, págs. 54-6).

[9] Se han propuesto otras estrategias para el tratamiento de la diarrea, por ejemplo:

[1] El documento EP 1571213 A1 desvela una nueva cepa de Bifidobacterium longum AR81 (KCCM-1492) y una proteína activa separada de la cepa con la secuencia de 1 aminoácidos HLDLAVENT, que tiene actividad

inhibidora de rotavirus.

[11] Todos los ejemplos y datos que figuran en el documento EP 1571213 A1 se realizan con una proteína citoplasmática, una proteasa presente en las células. Por tanto, para obtener el ingrediente activo en primer lugar las células deben procesarse (lisarse) para obtener los componentes citoplasmáticos o los componentes de la pared

celular.

[12] El documento JP 8259597 desvela una proteína preparada a partir del cultivo de la cepa SBT 2928 de Bifidobacterium longum capaz de interferir con la adhesión de patógenos (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, etc.) a la asialo-GM1. La proteína presenta un peso molecular de 1,4 kDa (filtración en gel) o de 52

kDa (SDS-PAGE) y un pl de 5,8. Sus aminoácidos N-terminales se definen como VDPHAIVPSNFDFAFL.

[13] El documento EP 1353681 A1 describe el uso de la cepa CNCM-2168 de Bifidobacterium para prevenir la

infección de células intestinales por rotavirus.

[14] El documento WO 231297 A1 describe cepas probióticas de Bifidobacterium, AH28, AH29, AH21, AH211, AH212 o AH214, y su uso en el tratamiento de diversas enfermedades.

[15] El documento WO 42168 A1 describe una cepa de Bifidobacterium (Bifidobacterium longum infantis UCC35624) con efectos significativamente inmunomodulares, útiles en la profilaxis y/o tratamiento de la actividad

inflamatoria no deseable, especialmente actividad inflamatoria gastrointestinal tal como enfermedad inflamatoria intestinal o síndrome del intestino irritable.

[16] El documento US 5922375 describe una cepa de Bifidobacterium longum (JBL 28-1/33) y su uso contra la diarrea.

[17] Por otro lado, el documento EP1359157 desvela péptidos derivados de caseína, obtenidos por hidrólisis de caseína por Lactobacillus helveticus y que tienen el efecto de inhibir una metaloproteinasa. Los péptidos se usan en productos alimenticios para la inhibición de metaloproteinasas de la matriz y por lo tanto se aplican para la inhibición de invasión y metástasis cancerosa, ulceración tisular, artritis y periodontitis, así como para la inhibición de

osteoclastos.

[18] El documento WO 23958 desvela el decapéptido de secuencia HQPHQPLPPT que, una vez aislado por hidrólisis enzimática de caseína bovina, influye en el crecimiento de una línea de células de insecto (en concreto la línea de células de insecto IPLB-Sf-21).

[19] Hay una necesidad urgente, tanto... [Seguir leyendo]

1. Una cepa de Bifidobacterium longum biovariedad infantis depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con el número de registro CECT 721, o un mutante de la misma que tiene una actividad de inhibición de

rotavirus y que tiene la capacidad de producir un péptido a partir de la fermentación de la p-caseína de la leche de vaca, teniendo el péptido una longitud de 11 a 17 aminoácidos y una secuencia de aminoácidos que comprende la

SEC ID N°: 1.

2. La cepa de acuerdo con la reivindicación 1, depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con el 1 número de registro CECT 721.

3. Una preparación bacteriana que comprende la cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2.

4. Un producto alimenticio que comprende una cantidad nutricionalmente eficaz de la cepa tal como se define en 15 cualquiera de las reivindicaciones 1-2, junto con cantidades apropiadas de otros ingredientes comestibles.

5. Una composición nutricional que comprende una cantidad nutricionalmente eficaz de la cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, junto con cantidades apropiadas de otros ingredientes comestibles.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 5, que se selecciona del grupo constituido por un complemento dietético, un aditivo, y una fórmula láctea infantil.

7. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de la cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, junto con cantidades apropiadas de excipientes y/o vehículos

farmacéuticos aceptables.

8. La cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para su uso como un probiótico.

9. El uso de la cepa como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para la fabricación de un producto

alimenticio.

1. El uso de la cepa como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para la fabricación de una composición nutricional.

11. El uso de la cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o preventivo de la diarrea en un animal, incluyendo un ser humano.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la diarrea está causada por un rotavirus.

13. El uso de la cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, para la preparación de un péptido que tiene una longitud de 11 a 17 aminoácidos y una secuencia de aminoácidos que comprende la SEC ID N°: 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

14. Un procedimiento para la preparación de un péptido que tiene una longitud de 11 a 17 aminoácidos y una 45 secuencia de aminoácidos que comprende la SEC ID N°: 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el procedimiento la fermentación de la (5-caseína de la leche de vaca que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N°: 1 con una cepa tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-2, y opcionalmente aislar el péptido y/o convertirlo en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.