Una microdeleción en BCAN canino asociada con Síndrome de Caída Episódica.

Un procedimiento de determinación de la predisposición genética para síndrome de caída episódica en un mamífero caracterizado porque la presencia o ausencia de una deleción en el gen brevican (BCAN) se detecta en una muestra.

Una microdeleción en BCAN canino asociada con Síndrome de Caída Episódica Campo de la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento para detectar síndrome de caída episódica (EFS) o predisposiciones al mismo en mamíferos.

El síndrome de calda episódica (EFS) es un trastorno paroxístico bien reconocido encontrado en los Cavalier King Charles spaniels (CKCS). Los episodios comienzan entre las catorce semanas y los cuatro años de edad y se activan por ejercicios, estrés, aprensión o excitación (Herrtage y Palmer, 1983). Los episodios son de frecuencia y gravedad variables pero se caracterizan por hipertonicidad progresiva que involucra a los miembros torácicos y pélvicos (Figura 1a) hasta que los perros se inmovilizan definitivamente en una posición característica de "rececho de venado" o de "rezo" (Figura 1b). La rigidez de todos los cuatro miembros durante el ejercicio causa caída (Figura 1c), aunque no hay ninguna pérdida de consciencia o cianosis. Otros signos clínicos pueden incluir rigidez muscular facial, tropezar, una marcha de "conejo saltando", arqueado de la espalda o vocalización. Curiosamente, entre episodios, los perros parecen ser completamente normales neurológicamente. No se observó actividad espontánea en realización de pruebas de electrodiagnóstico muscular, descartando miotonía congénita (Wright et al. 1986, 1987). Las biopsias musculares son típicamente normales a nivel de microscopía óptica, excluyendo muchas miopatías congénitas. Sin embargo, EFS se ha ligado a defectos ultraestructurales en el músculo esquelético incluyendo dilatación y proliferación del retículo sarcoplásmico, hinchazón y degeneración mitocondriales (Wright etal. 1986, 1987). EFS se ha comparado también (Rusbrldge, 2005) con enfermedad del sobresalto/hiperekplexia, caracterizada típicamente por hipertonicidad neonatal provocada por sonido o por toque debida a defectos en el receptor de glicina inhibitorio (GLRA1, GLRB; Shiang et al. 1993; Rees et al. 2002) o en genes del transportador de glicina GlyT2 (SLC6A5) (Rees et al. 2006; Harvey et al. 2008). Sin embargo, una microdeleción en el gen GlyT2 en loberos irlandeses da como resultado rigidez muscular neonatal grave y temblor en respuesta a manipulación (Gilí et al. 2011), lo que no es consistente con los signos clínicos observados de EFS. Se han podido realizar comparaciones con la enfermedad del sobresalto debido a que los perros afectados a menudo respondían bien a la benzodiacepina clonazepam (Garosi et al. 2002), un antlconvulslvante, anslolítlco y relajante muscular efectivo que es el tratamiento más efectivo conocido para la hlperekplexla humana (Thomas et al. 2011). Sin embargo, el Inhibidor de anhidrasa carbónica acetolamida, usado para tratar ciertos tipos de ataxia episódica humana (Tomllnson etal. 2009) y la parálisis periódica hipercalémica (Matthews y Hanna 2010), también parece tener valor terapéutico en el tratamiento de EFS ( http://www.cava- llerhealth.org/eplsodlc_falling ).

Dado que una investigación dirigida por criadores de diez años de la herencia de EFS sugirió un modelo autosómico recesivo de herencia f http://caval¡erep¡sodicfallina.com/ 1. los inventores presentes usaron una estrategia de asociación del genoma completo (Karlsson et al. 2007) para mapear el locus de EFS en una región definida del cromosoma 7 canino. El análisis de los genes candidatos permitió a los inventores presentes identificar una microdeleción que afecta al gen brevican (BCAN), confirmar el punto de ruptura de la deleción y desarrollar pruebas de genotipado rápidas para EFS.

Es, por lo tanto, un objeto de la presente invención proporcionar un análisis de un genotipo de un mamífero con respecto a síndrome de caída episódica por medio de una prueba genética. Por medio de una prueba genética tal se puede analizar la predisposición genética de un mamífero.

Este objetivo se logra por las invenciones según las reivindicaciones independientes. Se describen realizaciones ventajosas en las reivindicaciones dependientes.

Incluso si no se recogen referencias de apoyo múltiples, se desvelarán en las reivindicaciones todas las combinaciones razonables de las características.

Este objetivo se logra por una prueba genética para la identificación de la presencia o ausencia de una deleción en el gen brevican (BCAN).

El término "deleción", cuando se hace referencia a una secuencia de ácidos nucleicos, tiene el significado usual en genética de un alelo en el que una o más bases están perdidas en comparación con una secuencia de referencia o de tipo silvestre. Las deleciones pueden ser tan cortas como un par de bases. Las deleciones detectadas en la presente invención pueden ser más largas. Una deleción en un gen puede no comprender una secuencia del gen en sí mismo como es el caso de una deleción dentro de un gen. Una deleción en un gen puede también extenderse a secuencias próximas al gen. Por ejemplo la deleción puede comprender el comienzo del gen y prolongarse adicionalmente corriente arriba. Como un resultado se pierde el comienzo completo del gen junto con las secuencias corriente arriba. El gen está truncado. Una deleción tal se refiere también a una deleción de un gen específico, dado que el gen está afectado por la deleción. Adicionalmente la región corriente arriba de un gen comprende usualmente elementos reguladores importantes del gen.

En otra realización de la invención la deleción es una microdeleción. Una microdeleción es la pérdida de un pedazo diminuto de un cromosoma, un pedazo tan pequeño que su ausencia no es patente en examen ordinario (usando un

microscopio óptico regular para mirar a los cromosonas preparados de modo usual). La detección de mlcrodeleclones requiere usualmente técnicas especiales tales como bandeo de cromosomas de alta resolución, análisis molecular de cromosoma (con FISH), o análisis de ADN. Por lo tanto una microdeleción tal es de un tamaño de solo varias kllobases, por ejemplo 15,7 kb (kilobases).

En un análisis tal la presencia de la deleción indica la predisposición genética para síndrome de caída episódica (EFS).

La presencia o ausencia de la deleción puede detectarse de varias formas. Por ejemplo la secuencia sin la deleción o la secuencia que comprende la deleción puede detectarse. Especialmente si la deleción se hereda en un modo autosómico recesivo un análisis cuantitativo puede revelar no solo mamíferos afectados y no afectados, sino también portadores de la deleción solo de un cromosoma por una detección reducida de la secuencia analizada.

El procedimiento más común para la detección de la presencia o ausencia de la deleción es PCR. La presencia o ausencia de un producto amplificado puede estar relacionada con la presencia o ausencia de la deleción.

Para un análisis cuantitativo, se pueden usar los procedimientos modernos como PCR cuantitativa o amplificación de sonda dependiente de ligación múltiple (MLPA).

La invención se refiere al síndrome de caída episódica. Hay enfermedades con presentaciones clínicas similares al síndrome de caída episódica. En el caso de trastornos humanos esto es por ejemplo las dlsclneslas inducidas por el ejercicio. Típicamente estos son trastornos nerviosos de los mamíferos.

En otra realización de la invención la deleción comprende al menos uno de los siguientes elementos de BCAN: secuencias reguladoras, exón 1, exón 2 y/o exón 3. El exón 1 según se usa en esta memoria descriptiva se refiere a la región UTR 5'.

Las secuencias reguladoras son promotores y sitios de unión u otras secuencias reguladoras del gen BCAN, que se localiza corriente arriba del exón 1.

En otra realización de la invención la deleción comprende al menos exón 1, exón 2 y exón 3.

En otra realización de la invención la deleción comprende al menos exón 1, exón 2 y exón 3, pero no exón 4 del gen BCAN. La deleción por lo tanto comprende solamente una parte del gen que incluye los tres primeros exones.

En otra realización de la Invención la deleción comprende al menos una de las secuencias de acuerdo con SEC ID N.°: 14, SEC ID N.°; 15 y/o SEC ID N.°: 16, preferentemente SEC ID N.°: 11, SEC ID N.°: 8, SEC ID N.°: 9 y/o SEC ID N.°: 12.

En otra realización la deleción comprende una secuencia de acuerdo con SEC ID N.°: 13. Esta secuencia comprende el comienzo del gen BCAN que Incluye los tres primeros exones así como secuencias corriente arriba del gen BCAN.

En otra realización la deleción consiste en una secuencia de acuerdo con SEC ID N.°: 13.

En otra realización de la Invención la deleción es del tamaño de 15,7 kb, preferentemente 15722 bases.

En otra... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de determinación de la predisposición genética para síndrome de caída episódica en un mamífero caracterizado porque la presencia o ausencia de una deleción en el gen brevican (BCAN) se detecta en una muestra.

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la deleción comprende al menos uno de

los siguientes elementos de BCAN: secuencias reguladoras, exón 1, exón 2 y/o exón 3.

3. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque la deleción comprende al menos exón 1, exón 2 y exón 3.

4. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la deleción es del tamaño 10 de 15,7 kbases.

5. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la deleción comienza 1,56 kb corriente abajo de HAPLN2 y termina 85 pb corriente abajo del exón 3 de BCAN.

6. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 to 5, caracterizado porque la deleción conduce a una secuencia de acuerdo con la SEC ID N.°: 1 o la SEC ID N.°: 2.

7. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicacionesl to 6, caracterizado porque el mamífero es un perro.

8. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el mamífero es un Cavalier King Charles spaniel.