Tratamiento del accidente cerebrovascular y otras enfermedades sin inhibir los canales de calcio de tipo N.

Un péptido quimérico aislado, en donde el péptido quimérico comprende un péptido activo que inhibe la unión dePSD-95 a un receptor de NMDA y un péptido de internalización que promueve la absorción del péptido quimérico enlas células y tiene una capacidad reducida para unirse a un canal de calcio de tipo N con respecto al péptido tatYGRKKRRQRRR (SEQ ID NO:

1), en donde el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende[T/S]-X[V/L] (SEQ ID NO: 14), opcionalmente, [E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L] (SEQ ID NO: 5) y el péptido deinternalización tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEC ID NO: 2), en donde Xes un aminoácido distinto de Y o nada.

Tratamiento del accidente cerebrovascular y otras enfermedades sin inhibir los canales de calcio de tipo N

Antecedentes de la invención Se prevé que el accidente cerebrovascular afectará a más de 600.000 personas al año en los Estados Unidos. En un informe de 1999, más de 167.000 personas murieron a causa de apoplejía, con una mortalidad total de 278.000. En 1998, se pagaron 3, 6 millardos solo a los beneficiarios de Medicare que fueron dados de alta de los hospitales de corta estancia, sin incluir la atención a largo plazo para >1.000.000 personas, que al parecer tienen limitaciones funcionales o dificultad con las actividades de la vida diaria como resultado de un accidente cerebrovascular (Heart and Stroke Stadistical Update, American Heart Association, 2002) . No se ha aprobado ningún agente terapéutico que reduzca el daño cerebral resultante de accidente cerebrovascular a través de la protección directa de la muerte de las neuronas.

El accidente cerebrovascular se caracteriza por la muerte de las células neuronales en zonas de isquemia, hemorragia cerebral y/o trauma. La muerte celular se desencadena por la sobreexcitación con glutamato de las neuronas, lo que lleva a un aumento de Ca2 intracelular y a un aumento del óxido nítrico debido a un aumento en la actividad de la nNOS (óxido nítrico sintasa neuronal) .

El glutamato es el principal neurotransmisor excitador en el sistema nervioso central (SNC) y media la neurotransmisión a través de la mayoría de las sinapsis excitadoras. Tres clases de receptores de canales de iones regulados por glutamato (N-metil-D-aspartato (NMDA) , ácido alfa-amino-3-hidroxi-5-metilisoxazol-4-propiónico (AMPA) y kainato) transducen la señal postsináptica. De estos, los receptores de NMDA (NMDAR) son responsables de una parte significativa de la excitotoxicidad del glutamato. Los receptores de NMDA son complejos que tiene una subunidad NR1 y una o más subunidades NR2 (2A, 2B, 2C o 2D) (véase, p. ej., McDain, C. y Caner, M. (1994) Physiol. Rev. 74:723-760) , y con menos frecuencia, una subunidad NR3 (Chatterton et al. (2002) Nature 415:793798) . Se ha demostrado que las subunidades NR1 se unen glicina, mientras que las subunidades NR2 se unen a glutamato. Se requiere la unión tanto a Glicina como a glutamato para abrir el canal iónico y permitir la entrada de calcio en la célula. Las cuatro subunidades del receptor NR2 parecen determinar la farmacología y las propiedades de los receptores de NMDA, con contribuciones adicionales de corte y empalme alternativo de la subunidad NR1 (Kornau et al. (1995) Science 269:1737-40) . Mientras las subunidades NR1 y NR2A se expresan de forma ubicua en el cerebro, la expresión NR2B se limita al cerebro anterior, NR2C al cerebelo, y NR2D es rara en comparación con los otros tipos.

Debido al papel clave de los receptores de NMDA en la respuesta de excitotoxicidad, estos han sido considerados como dianas para agentes terapéuticos. Se han desarrollado compuestos que se dirigen al canal iónico (cetamina, la fenciclidina, PCP, MK801, amantadina) , al canal exterior (magnesio) , al sitio de unión a glicina de las subunidades NR1, al sitio de unión a glutamato de las subunidades NR2, y a sitios específicos de las subunidades NR2 (Zinc-NR2A; Ifenprodilo, traxoprodilo-NR2B) . Entre éstos, los antagonistas no selectivos del receptor de NMDA han sido los agentes más neuroprotectores en modelos animales de accidente cerebrovascular. Sin embargo, las pruebas clínicas con estos fármacos en el accidente cerebrovascular y la lesión cerebral traumática han fracasado hasta ahora, en general, como resultado de graves efectos secundarios tales como alucinaciones e incluso coma.

Se ha informado de que la proteína de densidad postsináptica 95 (PSD-95) se acopla a los NMDAR en las rutas que median la excitotoxicidad y la lesión cerebral isquémica (Aarts et al., Science 298, 846-850 (2002) ) . Este acoplamiento se vio interrumpido por la transducción de las neuronas con péptidos del extremo C-terminal de NMDAR 2B que se unen a PSD-95 fusionada a un péptido de internalización tat convencional. Este tratamiento atenuó la señalización de NMDAR aguas abajo sin inhibir la actividad de NMDAR, protegió las neuronas corticales cultivadas de insultos excitotóxicos y redujo el volumen de infarto cerebral en ratas sometidas a isquemia cerebral focal transitoria.

Breve resumen de la invención La invención proporciona un péptido quimérico aislado en donde el péptido quimérico comprende un péptido activo que inhibe la unión de PSD-95 a un receptor de NMDA y un péptido de internalización que promueve la absorción del péptido quimérico en las células y tiene una capacidad reducida para unirse a un canal de calcio de tipo N con respecto al péptido tat YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 1) , y en donde el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende [T/S] X [V/L] (SEQ ID NO: 14) , opcionalmente, [E/D/N/Q] - [S/T] - [D/E/Q/N] - [V/L] (SEQ ID NO: 5) y el péptido de internalización tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2) , en donde X es un aminoácido distinto de Y o nada . Opcionalmente, X es F (SEQ ID NO: 135) . Opcionalmente, X es nada (SEQ ID NO: 136) . Opcionalmente, el péptido de internalización consiste en GRKKRRQRRRP (SEC ID NO: 3) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en GRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 4) .

Opcionalmente, el péptido activo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de ESDV (SEQ ID NO: 6) , ESEV (SEQ ID NO: 7) , ETDV (SEQ ID NO: 8) , ETEV (SEC ID NO: 9 ) , DTDV (SEQ ID NO: 10) , DTEV (SEQ ID NO: 11) . Opcionalmente, el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende KLSSIESDV (SEQ ID NO: 12) . Opcionalmente, el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende KLSSIETDV (SEQ ID NO: 13) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que comprende FGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 19) o FGRKKRRQRRRKLSSIETDV (SEQ ID NO: 16) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en FGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 19) o FGRKKRRQRRRKLSSIETDV (SEQ ID NO: 16) .

La invención proporciona adicionalmente una composición farmacéutica que comprende un péptido quimérico aislado como se ha descrito anteriormente y un portador farmacéuticamente aceptable.

La invención se puede utilizar en el tratamiento de los efectos dañinos del accidente cerebrovascular en un paciente que tiene o está en riesgo de tener un accidente cerebrovascular u otra lesión en el SNC, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un péptido quimérico o peptidomimético del mismo. El péptido quimérico comprende un péptido activo que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende T/SXV/L (SEQ ID NO: 14) y un péptido de internalización que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2) , en donde X es un aminoácido distinto de Y. Opcionalmente, X es F (SEQ ID NO: 135) . Opcionalmente, X es nada (SEQ ID NO: 136) . Opcionalmente, el péptido de internalización consiste en GRKKRRQRRRPQ (SEQ ID NO: 15) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que comprende GRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 4) . Opcionalmente, el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende [E/D/N/Q] -[S/T] - [D/E/Q/N] -[V/L) (SEC ID NO: 5) . Opcionalmente, el péptido activo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de ESDV (SEQ ID NO: 6) , ESEV (SEQ ID NO: 7) , ETDV (SEQ ID NO: 8) , ETEV (SEC ID NO: 9 ) , DTDV (SEQ ID NO: 10) , DTEV (SEQ ID NO: 11) . Opcionalmente, el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende KLSSIESDV (SEQ ID NO: 12) . Opcionalmente, el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende KLSSIETDV (SEQ ID NO: 13) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que comprende FGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 19) o FGRKKRRQRRRKLSSIETDV (SEQ ID NO: 16) . Opcionalmente, el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en FGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 19) o FGRKKRRQRRRKLSSIETDV (SEQ ID NO: 16) . Opcionalmente, la dosificación eficaz es una dosis única de 0, 05 a 500 mg, opcionalmente de 0, 1 a 100 mg, 0, 5 a 50 mg, o 1-20 mg del péptido o peptidomimético. Opcionalmente, el paciente tiene un accidente cerebrovascular isquémico. Opcionalmente, el paciente tiene un accidente cerebrovascular hemorrágico.

Opcionalmente, el paciente tiene una susceptibilidad por encima de la normal a los efectos secundarios mediados por los canales de calcio de tipo N. Opcionalmente, el paciente tiene una presión arterial normal... [Seguir leyendo]

1. Un péptido quimérico aislado, en donde el péptido quimérico comprende un péptido activo que inhibe la unión de PSD-95 a un receptor de NMDA y un péptido de internalización que promueve la absorción del péptido quimérico en las células y tiene una capacidad reducida para unirse a un canal de calcio de tipo N con respecto al péptido tat YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 1) , en donde el péptido activo tiene una secuencia de aminoácidos que comprende [T/S]-X[V/L] (SEQ ID NO: 14) , opcionalmente, [E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L] (SEQ ID NO: 5) y el péptido de internalización tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEC ID NO: 2) , en donde X es un aminoácido distinto de Y o nada.

2. El péptido quimérico aislado de la reivindicación 1, en donde X es F (SEQ ID NO: 135) .

3. El péptido quimérico aislado de la reivindicación 1, en donde el péptido de internalización consiste en GRKKRRQRRRP (SEC ID NO: 3) .

4. El péptido quimérico aislado de la reivindicación 1, en donde el péptido activo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de ESDV (SEQ ID NO: 6) , ESEV (SEQ ID NO: 7) , ETDV (SEQ ID NO: 8) , ETEV (SEC ID NO: 9) , DTDV (SEQ ID NO: 10) , DTEV (SEQ ID NO: 11) , preferiblemente, KLSSIESDV (SEQ ID NO: 12) o KLSSIETDV (SEQ ID NO: 13) .

5. El péptido quimérico aislado de la reivindicación 1, en donde el péptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos que comprende o consiste en FGRKKRRQRRRKLSSIESDV (SEQ ID NO: 19) o FGRKKRRQRRRKLSSIETDV (SEQ ID NO: 16) .

6. Una composición farmacéutica que comprende el péptido quimérico aislado de la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

7. Un péptido quimérico como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para uso en el tratamiento de los efectos dañinos del accidente cerebrovascular en un paciente que tiene o está en riesgo de accidente cerebrovascular u otra lesión en el SNC.

8. El péptido quimérico de la reivindicación 7, en donde la dosis eficaz es una única dosis de 0, 05 a 500 mg, opcionalmente de 0, 1 a 100 mg, 0, 5 a 50 mg, o 1-20 mg del péptido.

9. El péptido quimérico de la reivindicación 7, en donde el paciente tiene accidente cerebrovascular isquémico, accidente cerebrovascular hemorrágico, una susceptibilidad por encima de la normal a los efectos secundarios mediados por los canales de calcio de tipo N, o el paciente tiene una presión arterial normal o por debajo de la normal.

10. Un agente quimérico aislado, en donde el agente quimérico comprende un agente activo y un péptido de internalización que promueve la absorción del agente quimérico en las células, en donde el péptido de internalización es una variante del péptido tat YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 1) en el que la Y N-terminal está sustituida por F y que tiene una capacidad reducida para unirse a un canal de calcio de tipo N con respecto al péptido TAT, en donde el agente activo es un agente activo mostrado en la Tabla 5.

11. Un péptido de internalización aislado que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2) , en donde X es F.

12. Un agente activo mostrado en la Tabla 5 que tiene una actividad intracelular eficaz para tratar una enfermedad ligada a un péptido variante de tat que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende XGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 2) , en donde X es un aminoácido distinto de Y, o nada y el péptido tat tiene una capacidad reducida para unirse a un canal de calcio de tipo N con respecto al péptido tat YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 1) para su uso en el tratamiento de una enfermedad en un paciente que tiene una susceptibilidad por encima de la normal a los efectos secundarios mediados por los canales de calcio de tipo N.

13. El agente activo de acuerdo con la reivindicación 12 ligado al péptido variante de tat de acuerdo con la reivindicación 12 para su uso en el tratamiento de una enfermedad de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el paciente tiene una presión arterial por debajo de la normal.