Tratamiento de enfermedad inmunitaria por administración a través de la mucosa de antígenos usando Lactobacillus genéticamente modificado.

Un microorganismo que secreta constitutivamente un antígeno que participa en la inducción de la enfermedad celíaca para su uso en la administración a través de la mucosa para tratar la enfermedad celíaca,

con la condición de que cuando el microorganismo que secreta constitutivamente dicho antígeno es Lactococcus lactis MG1363 que secreta la proteína alfa-gliadina, péptido de gliadina HLA-DQ8 o péptido de gliadina HLA-DQ8 en forma desamidada, entonces dicho microorganismo no es para ser administrado por vía oral en combinación con Lactococcus lactis MG1363 que produce IL-10 murina.

Tratamiento de enfermedad inmunitaria por administración a través de la mucosa de antígenos usando Lactobacillus genéticamente modificado

Descripción

La presente divulgación se refiere al tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y alérgicas por la administración a través de la mucosa por microorganismos, en particular Lactococcus lactis, de antígenos inmunodominantes secretados.

Campo de la invención

El sistema inmunitario tiene la tarea de distinguir entre lo propio y lo no propio. El sistema inmunitario mucoso, presente a lo largo de las vías respiratorias, gastrointestinales y genitourinarias, tiene la carga adicional de coexistir con una abundancia de bacterias y antígenos inocuos tales como alimento, antígenos transmitidos por el aire o la flora comensalmente bacteriana. Una característica clave del sistema inmunitario mucoso es su capacidad para seguir tolerante a estos antígenos mientras que retiene eficazmente la capacidad de repeler patógenos. La introducción de antígeno sistémicamente, tanto mediante inyección como lesión, conduce a infiltración local de células Inflamatorias y producción de inmunoglobulinas específicas. Por el contrario, los antígenos introducidos en las superficies de la mucosa, tales como las vías gastrointestinales y genitourinarias, provocan la inhibición activa de la respuesta Inmunitaria a aquellos antígenos sistémicamente. La inducción específica de estas respuestas reguladas por la administración de antígeno a través del tubo gastrointestinal se conoce como tolerancia oral. La administración por vía oral de antígeno puede conducir a falta de reactividad sistémica y es una alternativa atractiva a las invenciones médicas ¡nmunosupresoras que no tienen efectos secundarios deseables (tal como esteroides). La invención se basa en particular en el campo de la tolerancia a baja dosis, obtenida por la exposición continuada a baja dosis de antígeno. Las inducciones de tolerancia mediante la mucosa se han propuesto como estrategia de tratamiento contra enfermedades autoinmunitarias, alérgicas e inflamatorias.

Estado de la materia

La siguiente discusión de los antecedentes de la invención se proporciona simplemente para ayudar al lector en el entendimiento de la invención y no se admite para describir o constituir técnica anteriora la presente Invención.

Las enfermedades autoinmunitarias, alérgicas e inflamatorias Imponen una tremenda carga al paciente y la sociedad, produciendo disminución de la calidad de vida y enormes costes. Además, no existe tratamiento adecuado sin efectos secundarios aceptables o que sea socialmente apropiado. Los actuales tratamientos para enfermedad autolnmunltarla son en gran medida paliativos, generalmente ¡nmunosupresores, o antllnflamatorlos. Las terapias no ¡nmunltarlas, tales como sustitución de hormonas en tiroiditis de Hashimoto o DM tipo 1 tratan desenlaces de la respuesta autoagreslva. El tratamiento con esteroides o AINE limita los síntomas Inflamatorios de muchas enfermedades. IVIG se usa para CIDP y GBS. Se ha mostrado que las terapias inmunomoduladoras más específicas, tales como los antagonistas de TNFa etanercept, son útiles en el tratamiento de RA. Sin embargo, estas ¡nmunoterapias pueden asociarse a riesgo elevado de efectos adversos, tales como elevada susceptibilidad a infección. La enfermedad celíaca, que puede caracterizarse por una pequeña inflamación intestinal crónica, sólo puede tratarse eficazmente por una dieta soclalmente restrictiva que requiere abstinencia durante toda la vida de alimentos que contienen trigo, centeno o cebada. Aunque una estricta dieta sin gluten puede conducirá curar el intestino, la intolerancia al gluten es permanente.

La enfermedad celíaca, también conocida como celiaquía o enteropatía sensible al gluten, es una enfermedad inflamatoria crónica que se desarrolla a partir de una respuesta inmunitaria a granos dietéticos específicos que contienen gluten. El diagnóstico puede hacerse basándose en la presentación clásica de diarrea, heces grasosas, meteorismo y dolor abdominal, pérdida de peso, enfermedades óseas metabólicas, anemia, además de la presencia de anticuerpos del suero con especificidad por gliadina y transglutaminasa tisular (tTG) (también llamados antiendomisiales). La lesión de la mucosa está localizada en la parte proximal del intestino delgado, y se caracteriza por atrofia vellositaria, hiperplasia de células de la cripta e infiltración linfocítica del epitelio y la lámina propia, que liberan citocinas proinflamatorias tales como IL-2 y IFN-y, en respuesta a gliadina. La enfermedad celíaca puede considerarse la enteropatía sensible a los alimentos más común en seres humanos, y puede aparecer en cualquier momento en la vida de una persona. La prevalencia está en el intervalo de 1:1 a 1:3 en poblaciones occidentales, árabes e indias. Aparte del gluten, la enfermedad puede desencadenarse por primera vez después de cirugía, infección vírica, tensión emocional grave, embarazo o parto. El documento WO 27/6375 describe la inducción de tolerancia a a-gliadina tras la co-administración de Lactococcus lactis que secreta a-gliadina con IL-1.

Por tanto, la inducción de tolerancia oral específica para antígeno sería un enfoque terapéutico poco atractivo. Aunque la tolerancia oral se describió por primera vez en 1911, no fue hasta después de los años 7 que los investigadores empezaron a abordar los mecanismos implicados (Mayer y Shao, 24a). Se han propuesto varios mecanismos para el desarrollo de la tolerancia oral, que oscilan de la deleción de linfocitos T antiespecíficos, pasando por la desviación

inmunitaria e inducción de anergia, a supresión por Treg (Mucida y col., 25). La mayoría de los investigadores están de acuerdo con que hay dos formas distintas de obtener la tolerancia oral, la tolerancia a dosis alta, obtenida después de una única dosis alta de antígeno, que se basa en anergia y/o deleción (Friedman y Weiner, 1994), y la tolerancia a dosis baja, obtenida por la exposición repetida a dosis baja de antígeno, mediada por la supresión activa de respuestas inmunitarias por linfocitos T CD4+, que incluyen linfocitos T reguladores productores de Foxp3+, IL-1 y/o TGF-j5. Y, lo que es más importante, se ha mostrado que los linfocitos T reguladores inducidos por la tolerancia de la mucosa median en la supresión circunstancial, un proceso mediante el cual las células reguladoras específicas para una proteína suprimen la respuesta de células efectoras próximas a otra proteína. La supresión circunstancial es otra característica importante de la supresión inducida por antígenos debido a que el conjunto de antígenos que induce la autoinmunidad específica para órgano es muy desconocido, y supera el fenómeno de diseminación de epítopos. La diseminación de epítopos es una complicación de enfermedades autoinmunitarias y alérgicas por lo que el inicio de la respuesta inmunitaria se prolonga con el tiempo para incluir respuestas a otros antígenos.

La administración dirigida y más eficaz de moléculas para aplicaciones terapéuticas y profilácticas es una prioridad para la industria farmacéutica. Estrategias eficaces deben reducir la dosis requerida, aumentar la seguridad y mejorar la eficacia enfocando las moléculas en el sitio de acción deseado. Las vías mucosas de la administración de fármacos y vacunas ofrecen varias ventajas logísticas y biológicas en comparación con la inyección. La administración oral es particularmente atractiva como resultado de la facilidad de administración. Sin embargo, la degradación gastrointestinal y bajos niveles de absorción generalmente convierten esta vía de administración de fármacos de péptido y proteína en ineficaz. Vías mucosas alternativas tales como las vías nasales, rectales, pulmonares y oculares también están siendo investigadas.

Así, sigue existiendo un problema en la materia de inducir eficazmente la tolerancia de antígenos.

Resumen de la invención

Sorprendentemente, los presentes inventores encontraron que un antígeno inmunodominante que participa en la inducción de la enfermedad celíaca que se libera, y preferentemente está continuamente presente, en un sitio mucoso de un paciente induce una inmunotolerancia específica para antígeno. En particular, cuando un microorganismo tal como preferentemente Lactococcus ladis (LL), que expresa y secreta constitutivamente un antígeno inmunodominante que participa en la inducción de la enfermedad celíaca, se libera diariamente en un sitio mucoso, se indujo una tolerancia inmunitaria específica para antígeno. Los presentes inventores observaron que la administración a través de la mucosa de un tal antígeno por un microorganismo de L. ladis da... [Seguir leyendo]

1. Un microorganismo que secreta constitutivamente un antígeno que participa en la inducción de la enfermedad celíaca para su uso en la administración a través de la mucosa para tratar la enfermedad cellaca, con la condición de que cuando el microorganismo que secreta constitutivamente dicho antígeno es Lactococcus lactis MG1363 que secreta la proteína alfa-gliadina, péptido de gliadina HLA-DQ8 o péptido de gliadina HLA-DQ8 en forma desamidada, entonces dicho microorganismo no es para ser administrado por vía oral en combinación con Lactococcus lactis MG1363 que produce IL-1 murina.

2. El microorganismo que secreta un antígeno para su uso según la reivindicación 1, en el que dicho microorganismo

es:

- bacteria del ácido láctico o levadura, más preferentemente es Lactococcus lactis (LL);

- se administra diariamente;

- se administra durante al menos 1 semana, más preferentemente durante al menos 1 mes o 1 año;

- se administra al menos una vez a día, preferentemente dos veces a día;

- se administra en una dosis de al menos 1 femtogramos a 1 mg por día, tal como 1 fg a 1 mg por día, o 1 pg a 1 mg por día, o 1 pg a 1 pg por día, o 1 pg a 1 pg por día, o 1 ng a 1 pg por día, o 1 ng a 1 mg por

día; y/o

- se administra por espray, cápsula, aerosol, pastillas para chupar, bolo, comprimido, sobres, líquido, suspensión, emulsión o trociscos.

3. El microorganismo que secreta un antígeno para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que dicha administración a través de la mucosa se elige del grupo que consiste en administración rectal, administración bucal, administración pulmonar, administración ocular, administración nasal, administración vaginal y administración oral.

4. El microorganismo que secreta un antígeno para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho microorganismo o composición se formula como un medicamento, alimento médico o producto nutricéutico.

5. Una composición farmacéutica que consiste en un microorganismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicho microorganismo secreta constitutivamente un antígeno, que participa en la inducción de la enfermedad celíaca, con la condición de que cuando el microorganismo que secreta constitutivamente dicho antígeno es Lactococcus lactis MG1363 que secreta la proteína alfa-gliadina, péptido de gliadina HLA-DQ8 o péptido de gliadina HLA-DQ8 en forma desamidada, entonces dicho microorganismo es para ser administrado por vía oral en combinación con Lactococcus lactis MG1363 que produce IL-1 murina.

6. La composición farmacéutica según la reivindicación 5, en la que dicho microorganismo es bacteria del ácido láctico o levadura, más preferentemente es Lactococcus lactis (LL).

7. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en la que dicho microorganismo está presente en una dosis de al menos 1 femtogramos a 1 mg, tal como 1 fg a 1 mg, o 1 pg a 1 mg, o 1 pg a 1 pg, o 1 pg a 1 pg, o 1 ng a 1 pg, o 1 ng a 1 mg.

8. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en la que dicha composición farmacéutica se formula en esprays, cápsulas, aerosoles, pastillas para chupar, bolo, comprimidos, sobres, líquidos, suspensiones, emulsiones o trociscos.

9. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8 para su uso en la administración a través de la mucosa para tratar la enfermedad celíaca.

1. Medicamento, producto nutricéutico o alimento médico para tratar, prevenir y/o aliviar la enfermedad celíaca, que comprende al menos un microorganismo, en el que dicho microorganismo secreta constitutivamente un antígeno, que participa en la inducción de la enfermedad celíaca, con la condición de que cuando el microorganismo que secreta constitutivamente dicho antígeno es Lactococcus lactis MG1363 que secreta la proteína alfa-gliadina, péptido de gliadina HLA-DQ8 o péptido de gliadina HLA-DQ8 en forma desamidada, entonces dicho microorganismo no es para ser administrado por vía oral en combinación con Lactococcus lactis MG1363 que produce IL-1 murina.

11. Medicamento, producto nutricéutico o alimento médico según la reivindicación 1, en el que dicho microorganismo es bacteria del ácido láctico o levadura, más preferentemente es Lactococcus lactis (LL)