Uso de una bacteria recombinante no patógena y no invasiva transformada con ADN que codifica un péptido trébol y que es capaz de liberar un péptido trébol en el tracto gastrointestinal de un ser humano o un animal para la preparación de un medicamento para tratar lesiones o para inhibir la formación de lesiones en el canal alimentario producidas por terapia con radiaciones o quimioterapia para el tratamiento del cáncer,

un fármaco que lesiona el canal alimentario incluyendo alcohol, la exposición accidental a la radiación o a una sustancia caústica, infección, trastorno digestivo, incluyendo pero sin limitarse a dispepsia no ulcerosas, gastritis, úlcera péptica o duodenal, cáncer gástrico, linfoma MALT, síndrome de Menetier o enfermedad por reflujo gastroesofágico

LIBERACIÓN DE PÉPTIDOS TRÉBOL

La presente memoria descriptiva se refiere al campo de sistemas de liberación de proteínas in vivo. Más particularmente, la presente memoria descriptiva se refiere a la secreción in vivo de péptidos trébol por parte de microorganismos, preferiblemente cepas bacterianas, preferiblemente cepas no patógenas, preferiblemente cepas no invasivas, preferiblemente cepas de calidad alimentaria, a procedimientos para la liberación de péptidos trébol usando dichos sistemas y al uso de dichos sistemas de expresión de péptidos trébol para el tratamiento de trastornos inflamatorios del tracto gastrointestinal.

Lactococcus lactis es una bacteria del ácido láctico Gram positiva no patógena que puede sobrevivir en el intestino (Klijn y col., 1995). No se sabe con certeza si

L. lactis puede estar también metabólicamente activa en todos estos entornos.

La expresión del fragmento C de la toxina tetánica por parte de Lactococcus lactis con vistas a la vacunación fue descrita por Wells y col. (1993b) y Robinson y col. (1997). Además se demostró que cuando se administraban por vía intranasal a ratones preparaciones bacterianas de L. lactis modificadas para expresar interleucina-2 o interleucina-6 junto con el fragmento C de la toxina tetánica (TTFC), se producía más de 10 veces más anticuerpos dirigidos contra TTFC que tras la administración similar de cepas que expresaban TTFC únicamente (solicitud de patente internacional publicada en el documento WO 97/14806). Estos resultados prueban el uso de un vector de vacuna bacteriano experimental que secreta citocinas no invasivo para potenciar las respuestas inmunes a un antígeno conjuntamente expresado. También se ha descrito un enfoque para adjuntar fragmentos proteicos heterólogos en la pared celular y de esta forma mostrarlos en la superficie de L. lactis, conduciendo posiblemente a propiedades de vacunación más potenciadas (documento WO 9709437 Steidler,

Remaut, Wells).

Los péptidos trébol son secretados por las células epiteliales mucosas y son estables en un entorno ácido. Estos péptidos contribuyen a la protección de la mucosa (formación de un gel sobre el epitelio) y están implicados probablemente en la reparación de la mucosa dañada mediante la estimulación de la migración epitelial (Playford y col., 1996). La producción de péptidos trébol aumenta localmente en aquellas regiones en las que se ha producido un daño tales como úlceras gástricas y colitis (Wright y col., 1990). Babyatsky y col (1996) han demostrado que la administración de péptidos trébol recombinantes reduce el daño en esos lugares. Al contrario que la mayoría de las demás proteínas que son importantes para la protección de la mucosa (tales como el factor de crecimiento epidérmico), la mayoría de los estudios han demostrado que los péptidos trébol provocan poca o ninguna proliferación (Playford y col., 1996). Se han identificado en humanos tres miembros de esta familia de péptidos trébol y se designaron originalmente: pS2 (gen inducible por estrógenos de cáncer de mama, O. Lefebvre, 1993), SP (péptido espasmolítico) e ITF (factor trébol intestinal). En la nomenclatura actual, se ha renombrado pS2 como TFF1, SP como TFF2 e ITF como TFF3 (véase por ejemplo Wong y col., 1999). Esta nueva nomenclatura se usará a lo largo de la presente divulgación.

En seres humanos, ratones y ratas, TFF1 y TFF2 se encuentran predominantemente en el estómago, mientras que TFF3 se encuentra predominantemente en el duodeno y el colon. Wong y col. (1999) dan una visión general reciente de péptidos trébol.

Se piensa que TFF1 actúa por medio de un receptor de la superficie celular (Tan y col., 1997).

El uso de péptidos o proteínas trébol para el tratamiento de trastornos y daños del tracto digestivo, incluyendo la boca, el esófago, el estómago y los intestinos grueso y delgado, así como para la protección y el tratamiento de tejidos que se encuentran fuera del tracto digestivo se describe en los documentos WO 97/38712 y WO 92/14837. Estas proteínas se pueden usar o bien para tratar lesiones en estas áreas o bien para inhibir la formación de lesiones. Estas lesiones pueden ser provocadas por: radioterapia o quimioterapia para el tratamiento del cáncer, cualquier otro fármaco incluyendo alcohol que dañe el tracto digestivo, exposición accidental a radiación o a una sustancia cáustica, infección, un trastorno digestivo incluyendo, pero sin limitación dispepsia no ulcerosa, gastritis, úlcera péptica o duodenal, cáncer gástrico, linfoma MALT, síndrome de Menetier, enfermedad de reflujo gastroesofágico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y colitis aguda de origen químico, bacteriano o desconocido.

Los péptidos trébol son particularmente útiles para el tratamiento de la colitis aguda.

También se ha usado el ITF en combinación con EGF (factor de crecimiento epidérmico) para tratar úlceras del tracto gastrointestinal. Experimentos in vitro e in vivo han demostrado que las actividades de curación de heridas del EGF se incrementan notablemente por el tratamiento de EGF en combinación con ITF, sin incrementar la acción proliferativa del EGF (Chinery y Playford, 1995).

La enfermedad inflamatoria intestinal es el nombre conjunto de una serie de inflamaciones gastrointestinales. A este grupo pertenecen la enteritis, la colitis, inflamaciones de la mucosa del duodeno o del colon respectivamente. La enfermedad de Crohn (enteritis regionalis) y la colitis ulcerosa (colitis ulcerosa) son enfermedades del tracto gastrointestinal íntimamente relacionadas espontáneamente recurrentes. Estas enfermedades están mediadas inmunológicamente y tienen causas ambientales y genéticas. Sartor (1995) describe los diferentes aspectos de la enfermedad inflamatoria intestinal. La enfermedad de Crohn ha sido particularmente estudiada por ejemplo por Herfath y Sartor, (1994), Cominelli y col., (1994) y MacDermott (1989).

La presente invención proporciona materia según se reivindica en uno cualquiera y en todos los apartados (i) a

(viii) siguientes:

(i) Uso de una bacteria recombinante no patógena y no invasiva transformada con un ADN que codifica un péptido trébol y que es capaz de liberar un péptido trébol en el canal alimentario de un ser humano o animal para la preparación de un medicamento para tratar lesiones o para inhibir la formación de lesiones en el canal alimentario producidas por terapia con radiaciones o quimioterapia para el tratamiento del cáncer, un fármaco que lesiona el canal alimentario incluyendo alcohol, la exposición accidental a la radiación o a una sustancia caústica, infección, trastorno digestivo, incluyendo pero sin limitarse a dispepsia no ulcerosas, gastritis, úlcera péptica o duodenal, cáncer, gástrico, linfoma MALT, síndrome de Menetier o enfermedad por reflujo gastroesofágico.

(ii) Uso como se ha definido en (i) anterior en donde las lesiones en el canal alimentario están originadas terapia con radiaciones o quimioterapia para el tratamiento del cáncer.

(iii) Uso como se ha definido en uno cualquiera de (i) o

(ii) anterior en donde el canal alimentario incluye la boca, esófago, estómago, intestino grueso y delgado.

(iv) Uso como se ha definido en uno cualquiera de (i) a

(iii) en donde las lesiones se encuentran en las superficies mucosas.

(v) Uso como se ha definido en uno cualquiera de (i) a (iv) anterior en donde dicha bacteria no patógena y no invasiva es una cepa bacteriana de calidad alimentaria, preferiblemente una cepa bacteriana Gram positiva.

(vi) Uso como se ha definido en (v) anterior en donde dicha cepa bacteriana es una especie de Lactococcus o Lactobacillus.

(vii) Uso como se ha definido en (vi) anterior en donde dicha cepa bacteriana es Lactococcus lactis.

(viii) Uso como se ha definido en uno cualquiera de (i) a

(vii) en donde dicho péptido trébol es TFF1.

La materia proporcionada por la presente invención pertenece así específicamente a la divulgación y descripción de la presente memoria descriptiva.

La presente divulgación da a conocer un procedimiento para la liberación de péptidos trébol para el tratamiento de trastornos gastrointestinales y una composición farmacéutica para el tratamiento de trastornos gastrointestinales.

La presente invención da a conocer más particularmente un microorganismo que libera un péptido trébol in vivo. Preferiblemente, Dicho microorganismo es una cepa bacteriana, preferiblemente...

1. Uso de una bacteria recombinante no patógena y no invasiva transformada con ADN que codifica un péptido trébol y que es capaz de liberar un péptido trébol en el tracto gastrointestinal de un ser humano o un animal para la preparación de un medicamento para tratar lesiones o para inhibir la formación de lesiones en el canal alimentario producidas por terapia con radiaciones o quimioterapia para el tratamiento del cáncer, un fármaco que lesiona el canal alimentario incluyendo alcohol, la exposición accidental a la radiación o a una sustancia caústica, infección, trastorno digestivo, incluyendo pero sin limitarse a dispepsia no ulcerosas, gastritis, úlcera péptica o duodenal, cáncer gástrico, linfoma MALT, síndrome de Menetier o enfermedad por reflujo gastroesofágico.

2. Uso según la reivindicación 1 en donde las lesiones en el canal alimentario están originadas por terapia con radiaciones o quimioterapia para el tratamiento del cáncer.

3. Uso según en una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 en donde el canal alimentario incluye la boca, esófago, estómago, intestino grueso y delgado.

4. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en donde las lesiones se encuentran en las superficies mucosas.

5. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en donde dicha bacteria no patógena y no invasiva es una cepa bacteriana de calidad alimentaria, preferiblemente una cepa bacteriana Gram positiva.

6. Uso según la reivindicación 5, en la que dicha cepa bacteriana es una especie de Lactococcus o de Lactobacillus.

7. Uso según la reivindicación 6, en la que dicha cepa bacteriana es Lactococcus lactis.

8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde dicho péptido trébol es TFF1.