Procedimiento para producir nanopartículas.

Método de formación de nanopartículas que comprende poner en contacto un primer líquido que comprende un polímero biodegradable disuelto en un disolvente orgánico con un segundo líquido que comprende un disolvente acuoso que comprende un tampón,

que es miscible con el disolvente orgánico, al tiempo que es un no disolvente para el polímero biodegradable, en condiciones de agitación suave sin remover de manera que se forman nanopartículas, con lo que el rendimiento del proceso, en base a la cantidad de polímero biodegradable que se recupera en forma de nanopartículas, es del 90% o más y con lo que el valor D(v, 0,5) para las nanopartículas es inferior a 200 nm.

DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La práctica de la presente invención empleará, a menos que se Indique lo contrario, procedimientos convencionales de química, química de polímeros, bioquímica, biología molecular, Inmunología y farmacología, dentro de los conocimientos de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Véanse, por ejemplo, los documentos Remingtons Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 199); Methods in Enzymology (S. Colowick y N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.); Weir, D.M.,

Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV, 5a ed. (Blackwell Publishers, 1996); Sambrook, J. et al., Molecular Clonlng: A Laboratory Manual, 3a ed. (Coid Spring Harbor Laboratory Press, 21); Ausubel, F. M. et al., Short Protocols In Molecular Blology, 5a ed. (Current Protocols, 22); Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S., ed., CRC Press, 23) y Seymour/Carrahers Polymer Chemistry, 7a ed. (CRC Press, 27).

Tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva y en cualquiera de las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", una, el y "la" incluyen las referencias plurales a menos que el contenido dicte claramente lo contrario. Por lo tanto, por ejemplo, el término "nanopartícula" se refiere a una o más nanopartículas, y similares.

A menos que se indique lo contrario o a menos que el contexto dicte claramente lo contrario, todos los porcentajes y relaciones en el presente documento se dan en base al peso.

A. Definiciones

En la descripción de la presente invención, se entiende que los siguientes términos se definen como se Indica a continuación.

El término "nanopartícula", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una partícula Inferiora

1. nm de diámetro.

El tamaño de partícula puede determinarse (medirse) utilizando los métodos disponibles en la técnica. Por ejemplo, el tamaño de partícula puede determinarse mediante espectroscopia de correlación de fotones, dispersión dinámica de luz o dispersión casi-elástica de luz. Estos métodos se basan en la correlación del tamaño de partícula con las propiedades de difusión de las partículas obtenidas a partir de mediciones del movimiento browniano. El movimiento browniano es el movimiento aleatorio de las partículas debido al bombardeo por las moléculas de disolvente que rodean las partículas. Cuanto mayor sea la partícula, más lento será el movimiento browniano. La velocidad se define mediante el coeficiente de difusión traslaclonal. El valor medido se refiere a cómo se mueve una partícula dentro de un líquido (diámetro hidrodinámico). El diámetro que se obtiene es el diámetro de una esfera que tiene el mismo coeficiente de difusión traslacional que la partícula.

El tamaño de partícula también puede determinarse mediante la dispersión estática de luz, que mide la Intensidad de la luz dispersada por las partículas en una solución en un único momento. La dispersión estática de luz mide la Intensidad de la luz en función del ángulo de dispersión y la concentración de soluto. Las partículas que pasan a través de una fuente de luz, por ejemplo, un haz de láser, dispersan la luz con un ángulo que es Inversamente proporcional a su tamaño. Las partículas grandes generan un patrón de difracción con ángulos de dispersión bajos con alta intensidad, mientras que las partículas pequeñas dan lugar a señales de baja intensidad con ángulos amplios. Puede calcularse las distribuciones de tamaño de partícula si la intensidad de la luz dispersada a partir de una muestra se mide en función del ángulo. La información angular se compara con un modelo de dispersión (por ejemplo, la teoría de Míe) con el fin de calcular la granulometría.

Generalmente, el tamaño de partícula se determina a temperatura ambiente e implica múltiples análisis de la muestra en cuestión (por ejemplo, al menos 3 mediciones repetidas en la misma muestra) para obtener un valor medio para el diámetro de partícula.

Para la espectroscopia de correlación de fotones, el Z medio (también denominado media por cumulantes o diámetro hidrodinámico) se calcula por lo general a partir del análisis (monomodal) por cumulantes.

Para las mediciones de dispersión estática de luz (y también para la espectroscopia de correlación de fotones en algunas formas de realización), pueden medirse los parámetros de tamaño en base al volumen. Por ejemplo, el D(v, ,5) (donde v significa volumen) es un parámetro de tamaño cuyo valor se define como el punto en el que el 5% de las partículas (en base al volumen) en la composición, tal como se mide, tienen un tamaño inferior al valor D(v, ,5), y el 5% de las partículas en la composición tienen un tamaño superior al valor D(v, ,5). Del mismo modo, el D(v, ,9) es un parámetro de tamaño cuyo valor se define como el punto en el que el 9% (en base al volumen) de las partículas en la composición tienen un tamaño inferior al valor D(v, ,9) y el 1% de las partículas en la composición tienen un tamaño superior al valor D(v, ,9).

Las nanopartículas dentro de las composiciones tienen por lo general una granulometría en la que el Z medio y/o el valor D(v, ,5) es inferior a 2 nm, y más generalmente inferior a 15 nm y en la que el D(v, ,9) es inferior a 25 nm, y más generalmente inferior a 2 nm.

Tal como se define en el presente documento, una "especie de disolvente orgánico" es una especie de disolvente que comprende al menos un átomo de carbono.

Tal como se define en el presente documento, un líquido "acuoso" es un líquido que contiene agua, por lo general un líquido que contiene más del 5% en peso de agua, por ejemplo del 5% al 75% al 9% al 95% en peso, o más, de agua.

Tal como se define en el presente documento, un disolvente "acuoso" es un disolvente que contiene agua, por lo general un disolvente que contiene más del 5% en peso de agua, por ejemplo del 5% al 75% al 9% al 95% en peso, o más, de agua.

Tal como se define en el presente documento, una "suspensión de nanopartículas" es una fase liquida que contiene nanopartículas.

Una "suspensión acuosa de nanopartículas" es un líquido que contiene agua que contiene adlclonalmente nanopartículas. Las suspensiones acuosas de nanopartículas según la Invención contienen por lo general más del 5% en peso de agua, por ejemplo del 5% al 75% al 9% al 95% en peso, o más, de agua.

Las nanopartículas de la Invención se forman por lo general a partir de polímeros que son sustanclalmente no tóxicos y biodegradables. Tales materiales incluyen poliésteres tales como poll(a-hidroxiácidos) y polllactonas (por ejemplo, policaprolactona), poliortoésteres, polianhídridos y pollclanoacrilatos (por ejemplo, polialqullcianoacrilato o "PACA"), entre otros. Más generalmente, las nanopartículas para su uso con la presente invención son nanopartículas pollmérlcas derivadas de poli(a-hidroxiácidos), por ejemplo, de una poli(lactlda) ("PLA") tal como poli(D,L-lactida), un copolimero de lactida y glicólido, tal como una poll(D,L-lactida-co-gllcól¡do) o poli(L-lactida-co-glicólido) (ambos conocidos como "PLG") o un copolimero de D,L-lactlda y caprolactona. Las nanopartículas poliméricas pueden formarse a partir de polímeros con diversos pesos moleculares y, en el caso de los copolímeros, tales como PLG, diversas relaciones entre monómeros (por ejemplo, láctldo:glicólido). También se dispone de polímeros con diversos grupos terminales. Estos parámetros se analizan más adelante.

El término "tensioactivo" proviene de la expresión "agente con actividad superficial". Los tensioactlvos se acumulan en las interfaces (por ejemplo, en las Interfaces líquido-líquido, líquido-sólido y/o líquido-gas) y cambian las propiedades de la interfaz. Tal como se utilizan en el presente documento, los tensioactlvos incluyen detergentes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, estabilizadores de emulsiones, y similares.

Tal como se define en el presente documento, "carbohidratos" incluye monosacárldos, oligosacárldos y polisacáridos, así como sustancias derivadas de monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos, por ejemplo, por reducción (por ejemplo, alditoles), por oxidación de uno o más grupos terminales a ácidos carboxílicos (por ejemplo, ácido glucurónico) o por sustitución de uno o más grupos hidroxi por un átomo de hidrógeno o un grupo amino (por ejemplo, beta-D-glucosamina y beta-D-galactosamina).

Tal como se define en el presente documento, un "monosacárido" es un alcohol polihídrico, es decir, un alcohol que comprende adicionalmente un grupo aldehido (en cuyo caso el monosacárido es una aldosa) o un grupo ceto (en cuyo caso el... [Seguir leyendo]

1. Método de formación de nanopartfculas que comprende poner en contacto un primer liquido que comprende un polímero biodegradable disuelto en un disolvente orgánico con un segundo líquido que comprende un disolvente acuoso que comprende un tampón, que es miscible con el disolvente orgánico, al tiempo que es un no disolvente para el polímero biodegradable, en condiciones de agitación suave sin remover de manera que se forman nanopartfculas, con lo que el rendimiento del proceso, en base a la cantidad de polímero biodegradable que se recupera en forma de nanopartículas, es del 9% o más y con lo que el valor D(v, ,5) para las nanopartfculas es inferior a 2 nm.

2. Método según la reivindicación 1, en el que:

a) el polímero biodegradable es un poli(alfa-hidroxiácido); o

b) el polímero biodegradable está seleccionado de entre los polímeros que comprenden polilactida, poliglicólido o poli(lactida-co-glicólido).

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la concentración de polímero biodegradable en el primer líquido va del ,5% al 3% p/v.

4. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la agitación se lleva a cabo utilizando un agitador giratorio.

5. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el primer líquido se añade al segundo líquido gota a gota.

6. Método según la reivindicación 1 ó 2, que comprende adicionalmente permitir que el disolvente orgánico se evapore.

7. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el disolvente orgánico es un disolvente orgánico hidrófilo y es opcionalmente acetona.

8. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el primer líquido comprende adicionalmente un producto farmacéutico, que es opcionalmente una especie inmunógena.

9. Método según la reivindicación 8, en el que la especie inmunógena:

a) es un antígeno; o

b) es un adyuvante inmunitario; o

c) un inmunopotenciador de molécula pequeña (SMIP); o

d) estimula una respuesta inmunitaria innata.

1. Método según la reivindicación 8, en el que la especie inmunógena:

a) es una especie inmunógena aceptora de protones y en el que el tampón está seleccionado para mantener un pH superior a la pKa de la especie inmunógena; o

b) es una especie inmunógena donadora de protones y en el que el tampón está seleccionado para mantener un pH inferior a la pKa de la especie inmunógena.

11. Método según la reivindicación 8, en el que dicho método tiene una eficacia de encapsulación para dicha especie inmunógena del 5% o más.

12. Método según la reivindicación 8, en el que la cantidad de especie inmunógena con respecto al polímero biodegradable utilizado en el método va del ,5% al 2%.

13. Método según la reivindicación 8, en el que dicho método tiene una eficacia de encapsulación para dicha especie inmunógena del 8% o más.

14. Método según la reivindicación 8, en el que la cantidad de especie inmunógena con respecto al polímero biodegradable utilizado en el método va del ,5% al 3%.