Péptidos WT1 de unión a HLA de clase II, y composiciones y métodos que los comprenden.

Un péptido WT1 aislado que tiene la secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID Nº 4).

Péptidos WT1 de unión a HLA de clase II, y composiciones y métodos que los comprenden Campo de la invención

La presente invención proporciona un péptldo WT1 aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4) y usos médicos del mismo, en particular, para el tratamiento de, la reducción de la incidencia de y la Inducción de respuestas inmunes contra un cáncer que expresa WT1.

Antecedentes de la invención

El tumor de Wilms (WT), un nefroblastoma pediátrico que se produce con una frecuencia de 1 de cada 10.000 nacimientos, ha sido objeto de una intensa investigación clínica y básica durante varios años. El tumor es de origen embrionario, y normalmente se detecta en los niños durante los primeros 5 años de vida, pudiendo darse de manera unilateral o bilateral. Los WT surgen cuando las células mesenquimales metanéfricas condensadas del riñón en desarrollo no se diferencian correctamente. La implicación del gen supresor del tumor de Wilms 1 (WT1) en la etiología del WT ilustra el impacto que las alteraciones genéticas pueden tener en el desarrollo y la tumorigénesis. El documento WO 03/037060 se refiere a composiciones y métodos de inmunoterapia específica de WT1.

Compendio de la invención

En el presente documento, se desvelan péptidos WT1 y métodos de tratamiento de, reducción de la incidencia de e inducción de respuestas inmunes contra un cáncer que expresa WT1 que los comprenden.

También se desvela un péptido WT1 aislado que tiene una secuencia de aminoácidos (AA) que comprende o consiste en la secuencia RSDELVRHHNMHQRNMTKL (SEC ID N° 2) o un fragmento de la SEC ID N° 2.

La presente invención proporciona un péptido WT1 aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos (AA) PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4). También se desvela un fragmento de SEC ID N° 4.

En otra realización, la presente invención proporciona una composición que comprende (a) una célula presentadora de antígeno y (b) un péptido que consiste en PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4).

En otra realización, la presente invención proporciona el péptido que consiste en SEC ID N° 4 para su uso en el tratamiento de un sujeto con un cáncer que expresa WT 1, que comprende la administración al sujeto de una vacuna contra WT1 que comprende un péptido de la presente invención, tratando de este modo a un sujeto con un cáncer que expresa WT1.

En otra realización, la presente invención proporciona el péptido que consiste en SEC ID N° 4 para su uso en la reducción de la incidencia de un cáncer que expresa WT1, o su recaída, en un sujeto, que comprende la administración al sujeto de una vacuna contra WT1 que comprende un péptido de la presente invención, reduciendo de este modo la incidencia de un cáncer que expresa WT1, o su recaída, en un sujeto.

En otra realización, la presente invención proporciona el péptido que consiste en SEC ID N° 4 para su uso en la inducción de una respuesta inmune anti-mesotelioma en un sujeto, que comprende la etapa de poner en contacto el sujeto con una composición ¡nmunogénica que comprende un péptido de la invención, induciendo así una respuesta inmune anti-mesotelioma en un sujeto.

En otra realización, la presente invención proporciona el péptido que consiste en SEC ID N° 4 para su uso en el tratamiento de un sujeto con un mesotelioma, que comprende la etapa de administrar al sujeto una composición ¡nmunogénica que comprende un péptido de la invención, tratando de este modo un sujeto con un mesotelioma.

En otra realización, la presente invención proporciona el péptido que consiste en SEC ID N° 4 para su uso en la reducción de una incidencia de un mesotelioma, o su recaída, en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto una composición ¡nmunogénica que comprende un péptido de la invención, reduciendo así la incidencia de un mesotelioma, o su recaída, en un sujeto.

Breve descripción de las figuras

Figura 1. Ensayo de estabilización de T2 de péptidos WT-1 nativos y sintéticos contra células HLA A0201 (A) y células HLA A0301 (B-E). El índice de fluorescencia es la proporción entre la mediana de la fluorescencia con el péptido ensayado y la mediana de la fluorescencia sin péptido. Eje X: concentración por pocilio del péptido ensayado.

Figura 2. ELISPOT (A) y citotoxicidad (B) del ¡nterferón y (IFN) CD8+/CD3+ de donantes sanos HLA A0201 contra linfocitos T2 pulsados con los siguientes péptidos: primera barra de cada serie: sin péptido; segunda barra: mismo péptido usado para la estimulación; tercera barra: péptido nativo correspondiente; cuarta barra: péptido control

negativo. Eje X: péptidos usados para estimulaciones. Los experimentos se realizaron por triplicado y se confirmaron de 3 a 5 veces.

Figura 3. ELISPOT del IFN y CD8+ (A) y CD3+ (B-D) de donantes sanos FILA A0201 usando la asignación de péptidos indicada de las barras en cada serie de la Figura 2. Cada subfigura de B-D representa una repetición separada del experimento.

Figura 4. Ensayos de citotoxicidad usando linfocitos T CD8+ estimulados con péptidos WT-1 A1 sintéticos de un donante HLA A0201 contra blastocitos de LMC con HLA que presentan secuencias de péptidos nativos. A. Gráficos de barras de resultados. Primera barra de cada serie: SKLY-16 (WT1); segunda barra: BV173 (WT1+); tercera barra: LAMA81 (WT1+); cuarta barra: CMLA (control negativo adicional). B. Curvas de destrucción. Cuadrados: SKLY-16. Diamantes: células 697. G3, F4, C5 y G5 son clones de linfocitos T generados a partir de un donante HLA-A0201 sano tras múltiples estimulaciones in vitro. Eje Y: porcentaje de citotoxicidad. Eje X: Proporción entre linfocitos T y células diana.

Figura 5, parte 1. ELISPOT de IFN y tras la estimulación con péptidos WT1 de linfocitos T CD3+ de donantes sanos con diferentes tipos de HLA-DRB1. Eje Y: Porcentaje de citotoxicidad. Eje X: Proporción entre células efectoras y células diana. Parte 2. se estimularon linfocitos T CD3+ (A: HLA-DRBL*1001/1501; B: HLA-DRB1*0701/1202; C: HLA-DRB1*0301/901; D: HLA-DRB1*0407/1302) dos veces con péptido WT1DR328 o WT1DR423. Se desafiaron los linfocitos T estimulados en un ensayo ELISPOT de IFN y con lo siguiente: barras grises: control no desafiado; barras negras: células CD14+ pulsadas con péptido estimulante (bien WT1DR 328 o WT1DR 423); barras blancas: células CD14+ pulsadas con epítopo de péptido CD4+ irrelevante (RAS); barras rayadas: células CD14+no pulsadas. * -p < 0,05 en comparación con los controles. Eje Y: Número de manchas por 1 x 105 linfocitos T CD3+. Eje X: Péptido usado para la estimulación de linfocitos T.

Figura 6. Los péptidos de la presente invención son procesados, presentados y reconocidos por linfocitos T humanos. A. Se estimularon linfocitos T CD3+ de un donante sano HLA A0201/301DRB1*1301/1302 con DC autólogas previamente Incubadas con lisados de tumor 697, luego se desafiaron en un ensayo ELISPOT de IFN y con DC autólogas previamente incubadas bien con lisado de tumor 697, péptidos WT1 individuales, péptidos de control o DC no pulsadas (eje X). B. Se estimularon linfocitos T CD3+ de un donante sano HLA A0201/101, DRB1*0301/1601 con DC autólogas previamente incubadas con lisados tumorales bien de JMN (barras negras) o MeWo (barras blancas). Las linfocitos T se desafiaron en un ensayo ELISPOT de IFN y con DC autólogas previamente incubadas con lisados tumorales JMN o MeWo, péptidos WT1DR individuales o péptido de control de clase II (eje X). Barras sombreadas: Nivel de fondo de las manchas de DC autólogas incubadas en ausencia de linfocitos T. *- P < 0,05 en comparación con los péptidos de control. Eje Y: Número de manchas por 1 x 105 células CD3+.

Figura 7. ELISPOT de interferón y de CD3+frente a líneas celulares de mesotelioma. Se estimularon PBMC totales de un donante HLA-A0201 dos veces con los diferentes péptidos WT1DR y, a continuación, se desafiaron linfocitos T en un ensayo ELISPOT de IFN y con lo siguiente: línea celular de mesotelioma H-Meso1A (barras negras; WT1+, A0201+); línea celular de melanoma MeWo de control (WTT, A0201+; barras grises). * - p < 0,01 en comparación con los controles de MeWo. Eje Y: Número de manchas por 2 x 105 PBMC. Eje X: Péptido usado para la estimulación de los linfocitos T.

Figura 8. ELISPOT de IFN y de CD3+ frente a líneas celulares de mesotelioma. Se estimularon PBMC totales de un donante HLA-A0201 dos veces con los diferentes péptidos WT1DR y, a continuación, se desafiaron linfocitos T en un ensayo ELISPOT de IFN y con lo siguiente: línea celular de mesotelioma H-Meso1A (barras negras; WT1+, A0201+); línea celular de MeWo (WTF', A0201+; barras grises). * - p < 0,01... [Seguir leyendo]

1. Un péptido WT1 aislado que tiene la secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4).

2. El péptido WT1 aislado de la reivindicación 1, en el que dicho péptido WT1 aislado se une a una molécula HLA de clase II, preferentemente en el que dicha molécula HLA de clase II es una molécula HLA-DRB.

3. El péptido WT1 aislado de la reivindicación 2, en el que dicho péptido WT1 aislado se une a una segunda

molécula HLA-DRB, en el que dicha molécula HLA-DRB de la reivindicación 2 y dicha segunda molécula HLA-DRB están codificadas por alelos HLA-DRB distintos.

4. Una composición que comprende el péptido WT1 aislado de la reivindicación 2 y un péptido WT1 aislado adicional, en la que dicho péptido WT 1 aislado adicional se une a una molécula HLA de clase II adicional.

5. Una composición que comprende:

a) una célula presentadora de antígeno; y

(b) un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

6. La composición de la reivindicación 5, en la que dicha célula presentadora de antígeno presenta dicho péptido

sobre una molécula HLA de clase II del mismo y en la que dicha composición comprende además un péptido de

unión a la molécula HLA de clase II o un péptido WT 1 de unión a la molécula HLA de clase I.

7. Una composición que comprende el péptido WT1 aislado de la reivindicación 3 y un péptido WT1 aislado adicional, en la que dicha molécula HLA de clase II adicional es una tercera molécula HLA-DRB que es diferente de dicha molécula HLA-DRB de la reivindicación 2 y dicha segunda molécula HLA-DRB de la reivindicación 3.

8. La composición de la reivindicación 7, en la que dicho péptido WT1 aislado adicional se une a una cuarta molécula HLA-DRB, en la que dicha tercera molécula HLA-DRB de la reivindicación 7 y dicha cuarta molécula HLA- DRB están codificadas por alelos HLA-DRB separados.

9. Una composición que comprende el péptido WT1 aislado de la reivindicación 1 y un péptido WT1 de unión a la molécula HLA de clase I.

10. La composición de la reivindicación 6 o 9, en la que dicha molécula HLA de clase I es una molécula HLA-A o en la que la secuencia de aminoácidos de dicho péptido WT1 de unión a la molécula HLA de clase I comprende una secuencia seleccionada entre las SEC ID N° 5-38.

11. Una vacuna que comprende:

(a) el péptido WT1 aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o la composición de la reivindicación 6;

y

(b) un adyuvante o un vehículo.

12. La vacuna de la reivindicación 11, en la que dicho adyuvante es QS21, adyuvante incompleto de Freund, fosfato de aluminio, hidróxido de aluminio, BCG, alumbre, un factor de crecimiento, una citocina, una quimiocina, una interleucina, Montanide ISA 51 o GM-CSF.

13. La composición de la reivindicación 4, en la que el péptido WT1 aislado consiste en una secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4) y el péptido WT1 aislado adicional se selecciona entre SEC ID N° 1 y 3.

14. Una composición farmacéutica que comprende la vacuna de la reivindicación 11 o la composición de la reivindicación 5 para su uso en el tratamiento de un sujeto con un cáncer que expresa WT1, para su uso en la Inducción de la formación y proliferación de células específicas de CTL de un cáncer que expresa WT1 o para su uso en la reducción de una incidencia de un cáncer que expresa WT1, o de su recaída, en un sujeto.

15. Uso de la vacuna de la reivindicación 11 o de la composición de la reivindicación 5 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un sujeto con un cáncer que expresa WT 1, para la inducción de la formación y proliferación de CTL específicos de células de un cáncer que expresa WT1 o para la reducción de una incidencia de un cáncer que expresa WT1, o de su recaída, en un sujeto.

16. La composición farmacéutica de la reivindicación 14 o el uso de la reivindicación 15, en los que dicho cáncer que expresa WT1 es una leucemia, un tumor desmoplásico de células pequeñas redondas, un cáncer gástrico, un cáncer de colon, un cáncer de pulmón, un cáncer de mama, un tumor de células germinales, un cáncer de ovario, un cáncer de útero, un cáncer de tiroides, un cáncer de hígado, un cáncer renal, un sarcoma de Kaposi, un sarcoma, un carcinoma hepatocelular, un tumor de Wilms, una leucemia mielógena aguda (AML), un síndrome mioelodisplásico (MDS) o un cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).

17. Una composición farmacéutica que comprende un péptido WT1 aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG (SEC ID N° 4) para su uso en la inducción de una respuesta inmune anti-mesotelioma en un sujeto, para su uso en el tratamiento de un sujeto con mesotelioma o para su uso en la reducción de una incidencia de mesotelioma o de su recaída en un sujeto.

18. Uso de un péptido WT1 aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG

(SEC ID N° 4) para la preparación de una composición farmacéutica para la inducción de una respuesta inmune anti- mesotelioma en un sujeto, para el tratamiento de un sujeto con mesotelioma o para la reducción de una incidencia de mesotelioma o de su recaída en un sujeto.