Péptidos de unión a KDR y a VEGF/KDR y su uso en diagnóstico.

Un compuesto que comprende un macador óptico conjugado directamente o por mediación de un engarce o un espaciador con al menos un polipéptido que tiene la capacidad de unirse a KDR o a complejo VEGF/KDR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

AGDSWCSTEYTYCEMIGTGGGK (SEC ID N.º: 4),

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5),

AGVWECAKTFPFCHWFGTGGGK (SEC ID N.º: 6),

AGWVECWWKSGQCYEFGTGGGK (SEC ID N.º: 7),

AGWIQCNSITGHCTSGGTGGGK (SEC ID N.º: 8),

AGWIECYHPDGICYHFGTGGGK (SEC ID N.º: 9),

AGSDWCRVDWYYCWLMGTGGGK (SEC ID N.º: 10),

AGANWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 11),

AGANWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 12),

AGPDWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 13),

AGSNWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 14),

AGPDWCAADWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 15),

AGPEWCEVDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 16),

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17),

AGSKWCEQDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 18),

AGRNWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 19),

AGVNWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 20),

AGANWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 21),

AGQAWVECYAETGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 22),

AGQAWIECYAEDGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 23),

AGVGWVECYQSTGFCYHSRDGTGGGK (SEC ID N.º: 24),

AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.º: 25),

AGDSWVECDAQTGFCYSFLYGTGGGK (SEC ID N.º: 26),

AGERWVECRAETGFCYTWVSGTGGGK (SEC ID N.º: 27),

AGGGWVECRAETGHCQEYRLGTGGGK (SEC ID N.º: 28),

AGVAWVECYQTTGKCYTFRGGTGGGK (SEC ID N.º: 29),

AGEGWVECFANTGACFTYPRGTGGGK (SEC ID N.º: 30),

GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31),

GDDSYCMMNEKGWWNCYLYDPGGGK (SEC ID N.º: 32),

GDPAQCWESNYQGIFFCDNPDPGGGK (SEC ID N.º: 33),

Péptidos de unión a KDR y a VEGF/KDR y su uso en diagnóstico Antecedentes de la invención

En el embrión en desarrollo, la principal red vascular se establece mediante diferenciación in situ de las células mesodérmicas en un proceso que se denomina vasculogénesis. No obstante, tras la vasculogénesis embrionaria se cree que toda la posterior generación de nuevos vasos sanguíneos, en el embrión o en adultos, está dirigida por el brote o nacimiento de nuevos capilares en la vasculatura preexistente en un proceso denominado angiogénesis (Pepper, M. y col., 1996. Enzyme Protein, 49: 138-162; Risau, W., 1997. Nature, 386: 671-674). La angiogénesis no solo está implicada en el desarrollo embrionario y el crecimiento y reparación normal de los tejidos, también está implicada en el ciclo reproductor femenino, establecimiento y mantenimiento del embarazo y en la reparación de heridas y fracturas. Además de la angiogénesis que tiene lugar en el individuo normal, los acontecimientos angiogénicos están implicados en una serie de procesos patológicos, principalmente crecimiento y metástasis tumoral y otras afecciones en la que aumenta la proliferación de vasos sanguíneos, tales como retinopatía diabética, psoriasis y artropatías. La angiogénesis es tan importante en la transición de un tumor desde crecimiento hiperplásico a neoplásico, que la inhibición de la angiogénesis se ha convertido en una terapia activa contra el cáncer (Kim, K. y col., 1993. Nature, 362: 841-844).

Se piensa que la angiogénesis inducida por tumores depende de la producción de factores de crecimiento proangiogénicos por las células tumorales, que superan otras fuerzas que tienden a mantener a los vasos existentes quiescentes y estables ((Hanahan, D. y Folkman, J., 1996. Cell, 86: 353-364). El mejor caracterizado de estos agentes proangiogénicos es el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (Neufeld, G. y col., 1999. FASEB J.,

13: 9-22).

El VEGF se produce de forma natural en varios tipos de células en respuesta a hipoxia y algunos otros estímulos. Muchos tumores también producen grandes cantidades de VEGF y/o inducen a las células estromales cercanas para que fabriquen VEGF (Fukumura, D. y col., 1998. Cell, 94: 715-725). El VEGF, también denominado VEGF-A, se sintetiza como cinco diferentes ¡soformas de corte y empalme de 121, 145, 165, 189 y 206 aminoácidos. El VEGF121 y el VEGF165 son las formas principales producidas, particularmente en tumores (véase Neufeld, G. y col., 1999, ant.). El VEGF121 carece de un dominio básico codificado por los exones 6 y 7 del gen de VEGF y no se une a la heparina o a la matriz extracelular, al contrario que el VEGF165.

Los miembros de la familia del VEGF actúan principalmente uniéndose a las tirosina cinasas receptoras. En general, las tirosina cinasas receptoras son gllcoproteínas que tienen un dominio extracelular capaz de unirse a uno o más factores de crecimiento específicos, un dominio transmembrana (normalmente una hélice alfa), un dominio yuxtamembranal (en el que el receptor puede estar regulado mediante, por ejemplo, fosforilación), un dominio tirosina clnasa (el componente catalítico del receptor) y una cola carboxitermlnal, que en muchos receptores, está Implicada en el reconocimiento y unión de los sustratos por la tirosina cinasa. Existen tres tirosina cinasas receptoras específicas de las células endotellales que se sabe que se unen al VEGF: VEGFR-1 (Flt-1), VEGFR-2 (KDR o Flk-1) y VEGFR-3 (Flt4). Flt-1 y KDR se han Identificado como los principales receptores de VEGF de alta afinidad. Aunque Flt-1 tiene una mayor afinidad por VEGF, KDR muestra una expresión más abundante en las células endotellales (Blkfalvl, A. y col., 1991. J. Cell. Physiol., 149: 50-59). Además, se piensa que el KDR domina la respuesta anglogénlca y por tanto, es de mayor Interés terapéutico y diagnóstico (véase Neufeld, G. y col., 1999, ant.). La expresión de KDR está muy regulada por Incremento en los vasos angiogénicos, especialmente en tumores que Inducen una fuerte respuesta anglogénlca (Velkkola, T. y col., 2000. Cáncer Res., 60: 203-212).

El documento WO 99/58162 divulga agentes de contraste para ultrasonidos que se unen a KDR que comprenden un péptldo cíclico. Por tanto, estos llgandos son estructuralmente diferentes de los de la presente Invención.

KDR está formado por 1336 aminoácidos en su forma madura. Debido a la glucosllaclón, migra en un gel de SDS- PAGE con un peso molecular aparente de aproximadamente 205 kDa. KDR contiene siete dominios de tipo inmunoglobulina en su dominio extracelular, de los que los primeros tres son los más importantes en la unión a VEGF (Neufeld, G. y col., 1999, ant.). El propio VEGF es un dímero de omh capaz de unirse a dos moléculas de KDR de forma simultánea. El resultado es que dos moléculas de KDR se han dlmerlzado tras la unión y se autofosforilan, convirtiéndose en mucho más activas. El incremento de la actividad cinasa a su vez inicia una vía de señalización que media en los efectos biológicos específicos de KDR del VEGF.

A partir de lo anterior, se puede ver que la actividad de unión a VEGF de KDR in vivo no solo es crítica para la angiogénesis sino que la capacidad para detectar regulación por aumento de KDR sobre las células endotellales o para detectar complejos de unión VEGF/KDR sería extremadamente beneficiosa en la detección o monitorización de la angiogénesis, con particulares aplicaciones diagnósticas tales como detectar el crecimiento de un tumor maligno. También sería beneficioso en aplicaciones terapéuticas, tales como agentes tumoricidas dirigidos o inhibidores de la angiogénesis en un sitio tumoral o dirigiendo KDR, VEGF/KDR, o agonistas de la angiogénesis a un sitio deseado.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto que comprende un marcador óptico de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas útil para detectar y dirigir a receptores primarios sobre las células endoteliales para el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), es decir, el receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR-2, también conocido como región del dominio cinasa (KDR) y cinasa 1 hepática fetal (Flk1)) y para obtener imágenes de complejos formados por VEGF y KDR. La implicación de VEGF y KDR en la angiogéneis hace de los polipéptidos de unión VEGF/KDR y KDR de la presente invención particularmente útiles para la obtención de imágenes de importantes sitios de la angiogénesis, por ejemplo tumores neoplásicos.

Se ha descubierto un grupo de polipéptidos que se unen a KDR o al complejo VEGF/KDR (en el presente documento denominados "polipéptidos de unión a KDR" o "restos de unión a KDR" y homólogos de los mismos). Tales polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR se concentrarán en los sitios de angiogénesis, de modo que proporcionan un medio para detectar y obtener imágenes de sitios de angiogénesis activa, que pueden incluir sitios de crecimiento de tumores neoplásicos. Tales polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR proporcionan nuevos productos terapéuticos para inhibir o estimular, por ejemplo, la angiogénesis. La preparación, uso y rastreo de dichos polipéptidos, por ejemplo como agentes de formación de imágenes o como parejas de fusión para productos terapéuticos de guiado a KDR o a VEGF/KDR se describen con detalle en el presente documento.

En respuesta a la necesidad de materiales y métodos mejorados para detectar, localizar, medir y posiblemente, inhibir afectando, por ejemplo, angiogénesis, los autores de la presente invención han descubierto sorprendentemente siete familias de polipéptidos que no se dan en la naturaleza que se unen específicamente a KDR o al complejo VEGF/KDR. El mareaje adecuado de dichos polipéptidos proporciona agentes de formación de imágenes detectables que se pueden unir a, por ejemplo, una concentración elevada, a células endoteliales que expresan KDR o células que exhiben complejos de VEGF/KDR, proporcionando agentes formación de imágenes específicos de la angiogénesis. Los polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR de la presente invención pueden usarse así en la detección y diagnóstico de dichos trastornos relacionados con la angiogénesis. La conjugación o fusión de dichos polipéptidos con agentes eficaces tales como inhibidores de VEGF o agentes tumoricidas también se pueden usar para tratar tumores patogénicos, causando, por ejemplo, el conjugado o fusión para "guiar" al sitio de la angiogénesis activa, proporcionando de este modo un medio eficaz para tratar afecciones patogénicas asociadas con la angiogénesis.

Esta invención pertenece a al menos un polipéptido de unión a KDR y a VEGF/KDR, que comprende un marcador óptico conjugado directamente... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que comprende un macador óptico conjugado directamente o por mediación de un engarce o un espaciador con al menos un polipéptido que tiene la capacidad de unirse a KDR o a complejo VEGF/KDR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

AGDSWCSTEYTYCEMIGTGGGK (SEC ID N.°: 4),

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.°: 5),

AGVWECAKTFPFCHWFGTGGGK (SEC ID N.°: 6),

AGWVECWWKSGQCYEFGTGGGK (SEC ID N.°: 7),

AGWIQCNSITGHCTSGGTGGGK (SEC ID N.°: 8),

AGWIECYHPDGICYHFGTGGGK (SEC ID N.°: 9),

AGSDWCRVDWYYCWLMGTGGGK (SEC ID N.°: 10),

AGANWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.°: 11),

AGANWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.°: 12),

AGPDWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.°: 13),

AGSNWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.°: 14),

AGPDWCAADWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.°: 15),

AGPEWCEVDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.°: 16),

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 17),

AGSKWCEQDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.°: 18),

AGRNWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.°: 19),

AGVNWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.°: 20),

AGANWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.°: 21),

AGQAWVECYAETGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.°: 22),

AGQAWIECYAEDGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.°: 23),

AGVGWVECYQSTGFCYHSRDGTGGGK (SEC ID N.°: 24),

AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.°: 25),

AGDSWVECDAQTGFCYSFLYGTGGGK (SEC ID N.°: 26),

AGERWVECRAETGFCYTWVSGTGGGK (SEC ID N.°: 27),

AGGGWVECRAETGHCQEYRLGTGGGK (SEC ID N.°: 28),

AGVAWVECYQTTGKCYTFRGGTGGGK (SEC ID N.°: 29),

AGEGWVECFANTGACFTYPRGTGGGK (SEC ID N.°: 30),

GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 31),

GDDSYCMMNEKGWWNCYLYDPGGGK (SEC ID N.°: 32),

GDPAQCWESNYQGIFFCDNPDPGGGK (SEC ID N.°: 33),

GDGWACAKWPWGGEICQPSDPGGGK (SEC ID N.°: 34),

GDSSVCFEYSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 104),

GDSRVCWEYSWGGQICLGYDPGGGK (SEC ID N.°: 105),

AQQVQYQFFLGTPRYEQWDLDKGGK (SEC ID N.°: 35),

AQEPEGYAYWEVITLYHEEDGDGGK (SEC ID N.°: 36),

AQAFPRFGGDDYWIQQYLRYTDGGK (SEC ID N.°: 37),

AQGDYVYWEIIELTGATDHTPPGGK (SEC ID N.°: 38),

AQRGDYQEQYWHQQLVEQLKLLGGK (SEC ID N.°: 39),

AQRSWYLGPPYYEEWDPIPNGGK (SEC ID N.°: 40),

AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGGK (SEC ID N.°: 41),

AQAPAWTFGTNWRSIQRVDSLTGGGGGK (SEC ID N.°: 42), AQEGWFRNPQEIMGFGDSWDKPGGGGGK (SEC ID N.°: 43),

AQEGWFRNPQEIMGFGDSWDKPGGGK (SEC ID N.°: 44),

AQRGDYQEQYWHQQLVEQLKLLGGGK (SEC ID N.°: 45),

Ac-AGWYWCDYYGIGCK(ivDde)WTGGGK-NH2 (SEC ID N.°: 46), Ac-AGWYWCDYYGIGCKWTGTGGGK-NH2 (SEC ID N.°: 47), Ac-AQWYYDWFHNQRKPPSDWIDNLGGGK-NH2 (SEC ID N.°: 48), Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 49), Ac-AGPTWCEDDWYYCWLFGTJK(b¡ot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 50), Ac-AQAHMPPWRPVAVDALFDWVEGG-GGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 51), Ac-AQAHMPPWWPLAVDAQEDWFEGG-GGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 52), Ac-AQAQMPPWWPLAVDALFDWFEGG-GGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 53), Ac-AQDWYWREWMPMHAQFLADDWGG-GGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 54), Ac-AQPVTDWTPHHPK(ivDde)APDVWLFYT-GGGGGK(b¡ot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 55), Ac-AQDALEA.PK(ivDde)RDWYYDWFLNHSP-GGGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 56), Ac-KWCEEDWYYCMITGTGGGK(biot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 57), Ac-AGPKWCEEDWYYCMIGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 58), Ac-KWCEEDWYYCMIGGGK(biotina^JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 59),

Ac-AQPDNWK(lvDde)EFYESGWK(ivDde)-YPSLYK(lvDde)PLGGGGGK(b¡ot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 60), Ac-AQMPPGFSYWEQVVLHDDAQVLGG-GGGK(blotlna^JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 61), Ac-AQARMGDDWEEAPPHEWGWADGG-GGGK(blotlna^JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 62), Ac-AQPEDSEAWYWLNYRPTMFHQLGG-GGGK(blotlna-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 63), Ac-AQSTNGDSFVYWEEVELVDHPGG-GGGK(blot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 64),

Ac-AQWESDYWDQMRQQLK(iv-Dde)TAYMK(¡v-Dde)VGGGGGK(b¡ot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 65), Ac-AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 66),

VCWEDSWGGEVCFGGGK (SEC ID N.°: 76),

GDSRVCWEDSWGGEVCFGGGK (SEC ID N.°: 77),

SRVCWEDSWGGEVCFRYGGGGK (SEC ID N.°: 79),

GDSRVCWEDSWGGEVCFRYGGGK (SEC ID N.°: 80),

DWYYGGGK (SEC ID N.°: 95),

AQDWYYDEILGRGRGGRGG (SEC ID N.°: 96),

AGPTWEEDDWYYKWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 90),

AGPTWKEDDWYYEWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 91),

AGPTWDprEDDWYYDWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 92),

AGPTWDEDDWYYDprWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 93), y AGPTWDEDDWYYKWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 94);

en las que J es el espaciador o grupo de engarce, 8-amino-3,6-dioxaoctanoílo y iv-Dde es 1-(4,4-dimetil-2,6- dioxociclohex-1-¡l¡den)-3-metibut¡lo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el marcador óptico está conjugado directamente o por mediación de un engarce o un espaciador a un compuesto dimérico o multimérico que comprende dos o más polipéptidos que tienen la capacidad de unirse a KDR o a complejo VEGF/KDR.

3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el compuesto comprende dos o más polipéptidos y los polipéptidos tienen especificidad por diferentes epítopos en KDR, en el que los polipéptidos preferiblemente están selecionados de forma independiente del grupo que consiste en:

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.°: 5);

GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 31);

AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.°: 41);

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 17);

AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.°: 25); y

Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK(blotlna^JJ-)-NH2 (SEQ ID N.°: 49).

4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, en el que uno o más de los polipéptidos no incluyen la extensión GGGK C-terminal en su secuencia de aminoácidos.

5. El compuesto de la reivindicación 3, en el que los polipéptidos comprenden cualquiera de las combinaciones siguientes:

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 17) y Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK(blot¡na-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 49);

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 17) y GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 31);

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.°: 5) y GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 31); o

AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.°: 41) y Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 49).

6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende:

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.°: 5);

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.°: 17);

GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.°: 31);

AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.°: 41); o Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK(biotina-JJ-)-NH2 (SEC ID N.°: 49).

7. Un compuesto que comprende un macador óptico conjugado directamente o por mediación de un engarce o un espaciador con un dímero, comprendiendo el dímero dos polipéptidos que tienen la capacidad de unirse a KDR o a complejo VEGF/KDR, y en el que el dímero está seleccionado del grupo que consiste en D1 (figura 25), D2 (figura 26), D3 (figura 27), D5 (figura 29), D6 (figura 50), D7 (figura 51), D8 (figura 30), D9 (figura 31), D17 (figura 39), D19 (figura 41), D20 (figura 42), D22 (figura 44), D23 (figura 45), D24 (figura 46), D25 (figura 47), D26 (figura 48) y D27 (figura 49).

8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el polipéptido está unido al marcador óptico por mediación de un engarce o un espaciador, en el que dicho engarce o espaciador está seleccionado preferiblemente del grupo que consiste en una cadena de alquilo sustituida, una cadena de alquilo no sustituida, un derivado de polietilenglicol, un espaciador aminoácídico, un azúcar, un espaciador alifático, un espaciador aromático, una molécula lipídica o combinación de los mismos.

9. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el marcador óptico comprende un pigmento óptico, una molécula bioluminiscente, un marcador de fotoabsorción o una perla fluorescente.

10. El compuesto de la reivindicación 9, en el que el marcador óptico es un pigmento óptico tal como un fluóforo o cromóforo orgánico, tal como, por ejemplo, un compuesto fluorescente o en el que el marcador óptico es una perla fluorescente.

11. El compuesto de la reivindicación 9, en el que el marcador óptico comprende una molécula bioluminiscente.

12. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para producir una composición de diagnóstico para la obtención de imágenes, en particular para la obtención de imágenes de sitios importantes de angiogénesis, por ejemplo tumores neoplásicos.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que dicha obtención de imágenes es para la monitorización de una terapia con un agnete tumoricida o un agente anti-angiogénesis.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 12 ó 13, en el que dicho marcador se detecta mediante un parámetro seleccionado de radiación transmitida, absorción, emisión fluorescente o fosforescente, reflexión de luz, cambios de la amplitud de la absorbancia o de la absorbancia máxima y radiación elásticamente dispersada.